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目的:分析酸枣仁、牛蒡子、王不留行、决明子、牵牛子五种药材炒制前后蛋白质成分的变化,为探索子类中药"逢子必炒"炮制机制奠定基础.方法:采用裂解液提取总蛋白进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,比较酸枣仁、牛蒡子、王不留行、决明子、牵牛子炒制前后电泳图谱异同.结果:酸枣仁、牛蒡子、王不留行、决明子、牵牛子炒制前后蛋白质电泳图谱... 相似文献
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目的:建立基于生物信息技术和液质联用技术识别特征肽鉴别阿胶的新方法。方法:利用生物信息技术对驴皮、牛皮和猪皮I型胶原蛋白α1链氨基酸序列进行同源性比对发现3种皮类胶原蛋白氨基酸序列存在差异,通过生物学软件模拟胰酶酶解,分析比对驴皮、牛皮、猪皮来源I型胶原蛋白α1链酶解肽段,然后通过实验对样品前处理条件进行系统摸索,采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF-MS)进行验证。结果:筛选出12个驴皮的特异性肽段,鉴定出1个与预测结果一致的驴皮特异性肽段,其质荷比(m/z)为766.4,分子量为1 530.802 2,对应的多肽序列为GEAGPAGPAGPIGPVGAR,利用特征肽段对10组阿胶样品进行鉴定。结论:生物信息技术结合UPLC/Q-TOF-MS检测出的驴皮特征肽可有效、特异、准确地对阿胶药材进行专属性鉴定。 相似文献
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目的:观察冬虫夏草蛋白提取物(OSPE)对肺癌细胞A549的抑制作用,研究其对免疫功能的影响。方法:以OSPE低、中、高质量浓度(100,200,500 mg·L~(-1))处理A549细胞24 h;以200 mg·L~(-1)OSPE分别处理A549细胞12,24,48,72 h噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力;Hoechst 33258染色和流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达。利用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒,检测不同质量浓度OSPE对巨噬细胞分泌的肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1(IL~(-1)),白细胞介素-12(IL~(-1)2)的影响。结果:OSPE具有明显抑制A549细胞活力的作用,OSPE(100,200,500 mg·L~(-1))组抑制率分别为19.29%,58.70%,94.91%;200 mg·L~(-1)OSPE处理A549细胞(12~72 h),抑制率呈时间依赖性;Hoechst染色后,细胞呈现典型的凋亡形态变化,流式细胞检测凋亡率显示,200 mg·L~(-1)OSPE呈现时间依赖性地增加A549细胞凋亡率(P0.01);Real-time PCR结果显示OSPE明显上调Bax mRNA表达量,Bcl-2/Bax显著减小(P0.01)。ELISA检测结果显示,OSPE对正常巨噬细胞TNF-α,IL~(-1),IL~(-1)2具有显著促进分泌作用(P0.01)。结论:OSPE可通过上调Bax诱导凋亡,抑制A549细胞增殖;也可促进正常巨噬细胞分泌因子TNF-α,IL~(-1),IL~(-1)2的分泌,推测OSPE可通过诱导凋亡和激活免疫2种方式抑制肿瘤。 相似文献
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目的:建立一种冬虫夏草蛋白质含量快速测定方法,弥补Bradford法不足,为研究过程中快速准确定量蛋白质奠定基础。方法本研究用牛血清蛋白(bovine serum albumin,BSA)作为已知浓度的定量标准,用它来计算其它带的量。根据Quantity One来降低图像噪音和背景强度,并确定泳道,定义带并建立光密度与已知浓度的定量标准蛋白线性关系,通过每个带的光密度定量计算凝胶上每个带的质量。结果本实验所建立的凝胶染色扫描法能够较为快速、简便、准确地测定冬虫夏草蛋白含量。结论凝胶染色扫描法用于蛋白质定量,准确度、精密度、重复性均符合要求,为测定方法的进一步完善奠定了基础。 相似文献
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冬虫夏草为我国传统名贵中药材。资源短缺、价格昂贵和巨大的市场需求导致市售冬虫夏草掺伪掺假现象严重,亟需建立快速有效的鉴别方法。该研究基于实验前期已建立的冬虫夏草快速鉴定SS-PCR方法,按照体外诊断试剂评价标准开发试剂盒,并对试剂盒的特异性、检测限、重复性及保存期4项性能进行了评价。结果显示冬虫夏草质量占混合物质量的1/200(质量分数0.5%以上)以上时可被成功检测。试剂盒对冬虫夏草及其伪品的检测结果显示,仅有冬虫夏草可被成功扩增,并在紫外下显示绿色荧光。该试剂盒37℃温育7 d仍有效,说明4℃保存其在1年内稳定有效。同一批次试剂盒在不同条件下,不同批次试剂盒在相同条件下,其检测结果均一致且准确,表明试剂盒具有良好的批内及批间重复性。将该试剂盒用于市售冬虫夏草及其混伪品的检测,操作简单快速,结果准确可靠,为下一步中药快检试剂盒的商品化奠定了基础。 相似文献
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目的:为了建立一种快速提取中药材DNA的新方法,本研究考察了滤纸法对中药材DNA提取的适用性。方法:提取了33个中药材DNA,动物药使用COI(除了海马)、植物药使用ITS2、真菌使用ITS通用引物进行聚合酶链式反应(PCR)扩增。结果:通过琼脂糖凝胶电泳检测发现,27个中药材PCR扩增成功,扩增成功率达到81.8%。结论:研究结果表明滤纸法对于动物类、叶类、花类、全草类、果实类及根茎类药材DNA提取有较好的效果,提取时间可控制在30 s之内。滤纸法缩短了DNA提取时间,减少了提取成本,将在中药材分子鉴别中发挥重要作用。 相似文献
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