NgR特异性siRNA筛选及其表达载体构建

目的:将siRNA技术应用于NgR,筛选出高效的NgR(Nogo受体)特异性siRNA,并构建其表达载体。方法:2005-03/2006-03,在杭州新瑞佳生物制药有限公司、解放军第二军医大学神经生物教研室设计筛选NgR特异性siRNA,按照E1bashir等设计原则和siRNA的要求,设计、合成4对siRNA,转染体外培养大鼠原代皮层和海马细胞,筛选出基因高沉默效率的NgR特异性siRNA;2004-03/2005-03上海生工生物工程公司将获得的高沉默效率siRNA设计成带有BamHI、HindⅢ酶切粘性末端、终止识别序列和LOOP环的发卡式RNA,并将其克隆入载体pRNAT-U6.1/Neo,构建NgR特异性siRNA表达载体,然后进行酶切鉴定及基因测序。结果:①4对NgR特异siRNA中,siRNA199下调NgRmRNA的表达水平效率最高,转染72h效果最显著(96.04%)。NgR特异性siRNA199序列为:5’-CCGAAUCUCUUACGUGCCATT-3’。②将该序列的发卡式RNA成功克隆入载体pRNAT-U6.1/Neo,构建成NgR特异性siR-NA199表达载体,酶切鉴定及基因测序表明设计序列完全相符,目的基因序列准确无误。结论:NgR特异性siRNA199及其表达载体构建成功,为进一步合成病毒载体及观察NgR特异性RNA干扰抑制大鼠NgRmRNA表达对脊髓损伤的修复作用奠定了基础。     

中枢神经系统应用病毒载体介导RNAi基因治疗

近几年在基因治疗的临床试验方面发生了几起病例死亡事件,对基因治疗临床试验的开展产生了巨大的负面影响。有关部门对基因治疗临床试验制定了更为严格的规定,但是一些接受基因治疗试验的患者的良好治疗效果进一步证实了基因治疗的可行性。这些信息告诉我们应该清楚地认识病毒载体和转基因技术对宿主细胞可能产生的多种不同影响。现已证实在转基因治疗中病毒有可能激活插入     

siRNA干扰大鼠神经元Nogo受体mRNA 表达的时程研究

目的：观察大鼠Nogo受体（NgR）特异性小于扰RNA（small interfering RNA，siRNA）在原代神经元干扰其mRNA表达的时程效果。方法：体外培养大鼠原代皮层和海马细胞，应用阳离子脂质体转染试剂转染针对2个基因片段（199和964位点）的大鼠NgR特异性siRNA和对照siRNA，分别于转染后24h、48h、72h和96h，应用文时荧光定量PCR检测NgRmRNA表达情况。结果：2对siRNA（siNgRl99和siNgR964）均能够下调靶基因mRNA的表达水平，24h、48h、72h和96h，NgR mRNA表达分别为对照siRNA组的38．12％、12.47％、3．96％、18.4％（siNgR199）和49．54％、24．25％、13．17％、37．93％（siNgR964），与对照siRNA组比较有统计学意义（P〈0．05）。结论：NgR特异性siRNA能够在原代皮层和海马细胞下凋靶基因mRNA的表达水平．且基因沉默效果存转染后3d最显著，     

大鼠Nogo受体基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定

目的:构建大鼠Nogo受体(Nogo receptor,NgR)基因RNA干扰慢病毒表达载体,并观察其对293T细胞感染效率.方法: 应用基因工程技术,首先构建携带目的基因siNgR199的慢病毒穿梭质粒表达载体,然后使用慢病毒包装质粒混合物和构建好的慢病毒穿梭质粒共转染293T细胞,转染48 h后收集上清离心过滤后冰浴保存,最后进行病毒滴度测定,与标准病毒液分别感染293T细胞,按MOI值分为5个梯度:1、3、5、10、20,以确定病毒滴度及适合感染的MOI值.其中采用PCR方法对重组载体进行鉴定,利用绿色荧光蛋白作为报告基因,对病毒滴度和感染效率进行检测.结果: 酶切鉴定及PCR结果与病毒载体的预期结果一致,病毒滴度达1×108 ifu/m1,适合感染的MOI值为3.结论: 应用基因工程技术,成功构建了大鼠siNgR199慢病毒表达载体,为应用于治疗脊髓损伤后轴突再生创造了条件.     

双下肢重度脱套伤1例

双下肢重度脱套伤临床虽不多见 ,但其后果严重 ,现将我科 1999年收治的 1例双下肢重度脱套伤病人报告如下。1　病例介绍女 ,38岁。因车祸 1ｈ后入院 ,伤及双下肢 ,有休克临床表现。查双足脱套 ,但双侧足跟均与皮下组织紧密相连 ,且足跟皮肤血运良好 ,右小腿皮肤潜性剥脱达膝关节 ,左下肢皮肤潜性剥脱达膝上 15ｃｍ ,合并有左踝骨折。踝关节反转畸形 ,胫前动脉碾挫、栓塞、断裂 ,胫后动脉波动正常 ,右下肢远端血运良好 ,左下肢远端血运欠佳 ,行保肢手术 ,左踝关节融合。皮肤轴向多处切开引流 ,加压包扎。术后 36ｈ双下肢皮下均出现大量脂肪液…     

NgR特异性siRNA筛选及其表达载体构建

目的：将siRNA技术应用于NgR，筛选出高效的NgR（Nogo受体）特异性siRNA，并构建其表达载体。 方法：2005-03／2006-03，在杭州新瑞佳生物制药有限公司、解放军第二军医大学神经生物教研室设计筛选NgR特异性siRNA，按照Elbashir等设计原则和siRNA的要求，设计、合成4对siRNA，转染体外培养大鼠原代皮层和海马细胞，筛选出基因高沉默效率的NgR特异性siRNA；2004—03／2005-03上海生工生物工程公司将获得的高沉默效率siRNA设计成带有BamHⅠ、HindⅢ酶切粘性末端、终止识别序列和LOOP环的发卡式RNA，并将其克隆入载体pRNAT—U6．1／Neo，构建NgR特异性siRNA表达载体，然后进行酶切鉴定及基因测序。 结果：①对NgR特异siRNA中，siRNA199下调NgRmRNA的表达水平效率最高，转染72h效果最显著（96．04％）。NgR特异性siRNA199序列为：5’-CCGAAUCUCUUACGUGCCATT-3’。②将该序列的发卡式RNA成功克隆入载体pRNAT—U6．1／Neo，构建成NgR特异性siRNA199表达载体，酶切鉴定及基因测序表明设计序列完全相符，目的基因序列准确无误。 结论：NgR特异性siRNA199及其表达载体构建成功，为进一步合成病毒载体及观察NgR特异性RNA干扰抑制大鼠NgR mRNA表达对脊髓损伤的修复作用奠定了基础。     

分子途径修复脊髓损伤研究进展

髓磷脂相关轴突生长抑制物是脊髓损伤后抑制轴突再生的主要因素之一，其作用机制、与之结合的受体和信号传导途径已逐渐被认识。目前，中和这些抑制物的分子方法可分为细胞外途径(单抗、疫苗、竞争性肽段、神经营养因子)和细胞内途径(增加 cAMP 水平、灭活 Rho)等。脊髓损伤后刺激轴突再生提供了新的治疗策略。本文着重就每种方法的活体研究结果及其促进轴突再生的可能优点进行综述。     

步态康复机器人的研究进展

随着医学的发展和人民生活水平的提高,康复问题越来越受到人们的关注,步态康复机器人的出现,为步行功能障碍的患者提供了全新的治疗手段,弥补了治疗师少而患者多的难题,降低了治疗师的工作强度,有着传统康复手段难以比拟的优势。本文对康复机器人的研究进行概述,重点介绍国内外几款具有代表性的步态康复机器人,指出目前研究所取得的成果与存在的不足,为同类产品的研发提供借鉴。     

胫骨Pilon骨折34例临床治疗探讨

目的:分析在高能量胫骨Pilon骨折治疗中有限内固定结合外固定的疗效。方法:对2006-06～2011-05采用有限内固定结合外固定手术治疗的34例胫骨高能量Pilon骨折患者资料进行回顾分析。结果:34例患者3个月内愈合骨折愈合16例,4～6个月骨折愈合15,3例在7～8个月愈合,平均骨折愈合时间3.9个月。踝关节功能恢复优良率达85.29%(29/34)。3例患者发生针道感染,经治疗痊愈。结论:有限内固定结合外固定手术手术操作安全、简单、切口小,在达到内固定的同时,减少了软组织损伤、感染和皮肤坏死的发生,使骨愈合时间和效果提升。     

基于髋关节功能评价抗旋髓内钉治疗老年股骨近端骨折☆

背景:股骨近端骨折的患者有78.9%都是年龄在65岁以上的老年人,常伴有心血管系统疾病、糖尿病或肺部疾病等,外科治疗风险大,而且存在骨质疏松现象,骨折后愈合较慢,因此在治疗上要求创伤性小,出血少,内固定牢固. 目的:对抗旋髓内钉置入内固定治疗股骨近端骨折研究的文献资料趋势进行多层次探讨分析. 方法:以电子检索方式对CNKI数据库学术期刊2008-01/2011-12收录有关抗旋髓内钉置入内固定治疗股骨近端骨折研究的文献进行分析,采用检索词为“抗旋髓内钉;股骨近端;骨折;置入内固定”,运用数据库的分析功能和Excel软件图表的功能分析数据特征. 结果与结论:在CNKI数据库学术期刊2008/2011收录的文献中,共检索到35篇与抗旋髓内钉置入内固定治疗股骨近端骨折研究相关的文献.2011年收录的文献最多为23篇,文献数量处于上升的发展趋势.以外科学分类的文献数量最多.发表文献量较多的期刊为《临床骨科杂志》.文献关键词分析显示抗旋髓内钉主要用于治疗老年人股骨转子间骨折.抗旋髓内钉治疗老年股骨转子间骨折的关节功能评分优良率在80%以上,手术需要时间短,术后骨折愈合良好,恢复时间快,并发症少.抗旋髓内钉置入内固定是治疗老年股骨近端骨折较理想的方法.