127例乙肝表面抗体ELISA检测与化学发光法的比较

Objective To compare the difference between ELISA and chemiluminescence assay in de-tecting hepatitis B surface antibody (HBsAb) serum valued in 5～100mIU/ml. Method 127 HBsAb serum samples that had valued by chemiluminescence were detected using 10 domestic ELISA kits. The correlation between the results of ELISA kits and chemiluminescence assay were analyzed. Coincidence between the results of ELISA kits and chemiluminescence at different OD value range were also analyzed. Results The detected results between 10 domestic ELISA kits and chemiluminescence assay are positive correlation (P<0.01); The optimal coincidence rates of the results of ELISA with those samples valued by chemiluminescence at more than 100mIU/ml was 99.4%; the coinci-dence rate is from 42% to 80% in cut-off±20%. The average coincidence rate is under 60%. Conclusions Though the detected results of 10 domestic ELISA reagents is related closely, the coincidence rate of the results at 5～10mIU/ ml in detecting anti-HBs is low. So it is important to make a positive standard in detecting anti-HBs.     

白细胞介素-21在疾病中作用的研究进展

白细胞介素-21(IL-21)是一种新近发现的细胞因子,具有广泛生物学活性,能够调节B细胞的分化及免疫球蛋白类别转换,促进T细胞、NK细胞的增殖、分化,提高NK细胞杀伤活性,是多种自身免疫性疾病、感染性疾病、变态反应性疾病和肿瘤的重要致病因素,在疾病的发生发展中举足轻重,具有潜在临床研究价值,可能成为多种疾病治疗的新靶标.作为新的免疫系统调节因子,IL-21在免疫性疾病中的作用越来越受到关注,已成为近年来研究的热点.     

127例乙肝表面抗体ELISA检测与化学发光法的比较

Objective To compare the difference between ELISA and chemiluminescence assay in de-tecting hepatitis B surface antibody (HBsAb) serum valued in 5～100mIU/ml. Method 127 HBsAb serum samples that had valued by chemiluminescence were detected using 10 domestic ELISA kits. The correlation between the results of ELISA kits and chemiluminescence assay were analyzed. Coincidence between the results of ELISA kits and chemiluminescence at different OD value range were also analyzed. Results The detected results between 10 domestic ELISA kits and chemiluminescence assay are positive correlation (P<0.01); The optimal coincidence rates of the results of ELISA with those samples valued by chemiluminescence at more than 100mIU/ml was 99.4%; the coinci-dence rate is from 42% to 80% in cut-off±20%. The average coincidence rate is under 60%. Conclusions Though the detected results of 10 domestic ELISA reagents is related closely, the coincidence rate of the results at 5～10mIU/ ml in detecting anti-HBs is low. So it is important to make a positive standard in detecting anti-HBs.     

酶联免疫吸附测定检测儿童粪便幽门螺杆菌抗原

目的:探讨酶联免疫法检测粪便标本幽门螺杆菌抗原(HpSA)诊断儿童Hp感染的应用价值.方法:采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)检测2005年1月至2006年1月门诊、住院的86例患儿怀疑Hp感染的粪便标本,同时与临床试验(快速尿素酶试验、13C-呼气试验)进行比较评价.结果:以快速尿素酶试验、13C-尿素呼气试验联合检测阳性为Hp感染的临床诊断标准,HpSA试验诊断准确率90.7%.粪便抗原试验的敏感度为87.9%,特异度为95.2%,阳性预测值为96.7%,阴性预测值为83.3%.经配对资料x2检验,HpSA检测与联合检测结果差异无统计学意义(x2=0.8,P＞0.05,x0.052=3.84).HpSA试验与13C-尿素呼气试验检测结果差异无统计学意义(x2=0.36,P＞0.05),HpSA试验与快速尿素酶试验检测结果差异有统计学意义(x2=4.92,P＜0.05).结论:粪便标本HpSA试验诊断儿童幽门螺杆菌感染有较高的准确率、敏感度和特异度,为新的简便易行的非侵入性方法.     

儿童抗核抗体不同稀释度检测结果分析

目的比较不同血清稀释滴度对儿童抗核抗体间接免疫荧光分析(ANA-IIF)结果的影响,探讨降低血清起始稀释度必要性。方法以间接免疫荧光法检测110例健康儿童系列稀释度血清标本抗核抗体(ANA),并与特异性ANA线性免疫(ANA-LIA)结果相比较;同时分析一组ANA-IIF阴性的临床患儿标本ANA-LIA结果。结果健康组标本随着稀释度从1∶80、1∶40、1∶20逐步减低,ANA-IIF阳性检出率有所上升,分别为7.3%、9.1%、10.9%,但差异无统计学意义(P0.05),弱阳性分别为7.3%、15.5%、31.8%,差异有统计学意义(P0.01)。110例健康体检儿童中8例标本检测出特异性ANA,阳性率为7.3%。8例IIF法稀释度1∶80阳性者中,特异性ANA阳性者2例;稀释度1∶40、1∶20新增的4例荧光ANA阳性标本中,有1例特异性ANA阳性。若视ANA-IIF(1∶80)或ANA-LIA任一阳性为ANA阳性,ANA阳性率从7.3%上升到12.7%。29例ANA-IIF(1∶80)为阴性的自身免疫肝病相关自身抗体检测患儿临床标本中,特异性ANA-LIA检测出5例阳性(17.2%)。结论降低儿童血清起始滴度并不能明显提高ANA-IIF阳性检出率,反而增加了非特异的弱阳性,因此,临床实验室不需改变儿童ANA常规标本稀释滴度,联合特异性ANA-LIA的检测有利于ANA的发现。     

妊娠糖尿病患者外周血γδ T细胞的改变及临床意义

目的比较分析妊娠糖尿病(GDM)患者及健康孕妇外周血中γδ T细胞的组成变化,为探讨γδ T细胞在GDM发病中的作用和意义提供线索。方法采用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离GDM患者(病例组)及健康孕妇(对照组)外周血单个核细胞(PBMC),加入荧光标记鼠抗人T细胞抗原抗体(TCR)γδ单克隆抗体(McAb)及鼠抗人CD3 McAb双染,流式细胞术分析γδ T细胞所占比例。结果病例组PBMC中γδ T细胞的比例为(6.89±3.22)%,占CD3+T细胞的(10.87±4.91)%,对照组为(4.26±1.64)%,占CD3+T细胞的(8.21±0.35)%,病例组显著高于对照组,且差异具有统计学意义(P0.05);初诊组GDM患者外周血PBMC中γδ T细胞的比例为(8.79±2.33)%,占CD3+T淋巴细胞的(12.27±5.45)%,显著高于对照组,且差异具有统计学意义(P0.05)。结论 GDM患者γδ T细胞在外周血PBMC及CD3+T细胞中的比例增高,提示疾病发生影响和改变了T细胞亚群的分布。     

127例乙肝表面抗体ELISA检测与化学发光法的比较

目的 探讨浓度处于5～100mIU/ml的乙肝表面抗体(HBsAb)ELISA定性检测与化学发光法的符合情况.方法 采用10种国产主流HBsAb ELISA试剂对127例经用化学发光法检测已知HBsAb浓度的标本进行检测,分析ELISA检测OD值与抗体浓度的相关性,并以试剂盒临界值为准分别比较不同OD值段ELISA结果 与化学发光法结果 的符合率.结果 10种同产HBsAb ELISA试剂盒OD值与化学发光定最值均呈正相关(P<0.01);ELISA法检测结果 与化学发光的阴阳符合率比较显示,5～10mIU/ml样本符合率较低,只有37.5%,在大于100mIU/ml时可达99.4%,在10～30mIU/ml,30～100mIU/ml分别为75.3%和90.7%;OD值存0～0.05,0.05～0.105、0.105～0.21、0.21～0.3、0.3～0.5、大于0.5分别为73.4%、65.3%、60.5%、72.0%、86.5%、92.2%.结果 显示阴阳结果 符合率在较高在大于0.5时最高,在介于0.105～0.21的符合率最低;处于试剂盒临界值±20%处的标本的符合率普遍偏低,最低只有42%,最高亦不超过80%.结论 虽然10种国产ELISA试剂之间的检测结果 没有统计学差异,但是对于浓度介于5～10mIU/ml标本符合率低.而且在接近试剂盒临界值时与化学发光结果 符合率则很低,但是随着OD值的增高符合率也逐渐升高.考虑到乙肝表面抗体的特殊临床意义,如何选取一个更为科学客观的结果 判断临界值值得进一步探讨.     

肠道病毒71型VP1基因的扩增、克隆、表达及蛋白分析

目的 对肠道病毒71型VP1基因片段进行扩增、克隆、生物信息学分析、原核表达、纯化,初步证实重组表达产物的生物学活性。方法 根据GenBank中EV71序列设计一对特异性引物,以EV71患者咽拭子标本中提取病毒核糖核酸为模板,RT-PCR扩增EV71 VP1基因,酶切后插入表达载体pET28a。构建pET28a-EV71 VP1原核表达载体。转化E.coli DH5α,IPTG诱导表达,使用SDS-PAGE及Western blot分析表达结果,利用软件对测序结果进行生物信息学分析。纯化蛋白并包被反应板,用ELISA分别检测EV71阳性与COX A16阳性患者VP-1IgG抗体,进行统计学分析。结果 目的基因经BLAST比对,同源性与GenBank登录号为JQ766207.1 EV71 VP1一致性达99%。EV71 VP1蛋白相对分子质量约为32×103,主要以包涵体形式存在。生物信息学分析得出,EV71 VP1蛋白为亲水性蛋白,无跨膜区,不具有N-端信号肽序列,存在三级结构。ELISA结果显示EV71阳性患者OD值为(2.425±0.521),COX A16阳性患者OD值为(1.205±0.314),健康对照组OD值为(0.353±0.128)。EV71 VP1蛋白检测敏感性和特异性分别为84%和88%。结论 成功构建了pET28a-EV71 VP1表达载体;通过对手足口患者血清进行ELISA初步分析,得出目的蛋白有较高的敏感性和特异性,初步证实具有生物学活性,可进一步用于EV71诊断及疫苗的相关研究。     

大鼠脑出血后神经干细胞移植的实验研究

目的探讨脑出血后大鼠胚胎神经干细胞移植治疗的可行性.方法从14d胚龄的大鼠胚胎脑组织中分离、培养神经干细胞,通过荧光免疫组化技术研究其特性.制作大鼠脑出血模型,分别于3d和7 d时将未分化的神经干细胞注入血同侧的尾状核内.分别记录模型制作后2 h和移植后2 h、4周的大鼠运动功能.移植4周后处死大鼠,观察移植后干细胞在体内生长情况.结果实验中分离、培养的神经干细胞体外能够被诱导分化成神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞.出血后7 d干细胞移植组的大鼠运动功能的改善显著好于3 d组和对照组.结论神经干细胞移植治疗能够显著改善脑出血动物的运动功能,是一种很有发展前途的方法,值得进行更深入的研究.     

反复呼吸道感染儿童血清中白介素2,4,8及受体2的检测

目的　观察反复呼吸道感染 (RRI)患儿血中部分细胞因子的状况 ,了解患儿机体的免疫功能状态。方法　采用ELISA双抗体夹心法对 70例RRI患儿及 2 0例正常儿童血清中的IL2、IL4、IL8、IL2R进行检测。结果　RRI患儿血清中IL2R比正常组明显上升 (P <0 0 1) ,IL2比正常组明显下降 (P <0 0 1) ,IL4比正常组明显上升 (P<0 0 5 )。IL2与IL2R成直线相关 (r=0 2 92 ,P <0 0 5 )。结论　RRI患儿机体体液免疫功能紊乱 ,TH1/TH2细胞因子偏移与儿童RRI的发病有关。