新发病重症肌无力患者外周血IL-18、TGFβ-1水平与糖皮质激素疗效的研究

目的探讨糖皮质激素（GC）对新发病重症肌无力（MG）患者外周血白介素18（IL-18）、转化生长因子β-1（TGFβ-1）水平及临床疗效的影响。方法采用ELISA法检测26例新发病重症肌无力患者GC治疗前、治疗2月后和30名健康对照组血清IL-18、TGFβ-1水平,肌无力严重程度和临床疗效判定采用临床绝对和相对记分法。结果 MG患者外周血清IL-18、TGFβ-1水平均高于健康对照组（P〈0.05）;GC治疗2月后MG患者IL-18水平显著下降（t=8.92,P〈0.01）,TGFβ-1水平升高（t=-6.66,P〈0.05）;GC治疗前后预后差的全身型MG患者IL-18水平始终高于预后好的眼肌型MG患者（P〈0.05）,MG患者IL-18、TGFβ-1变化值与临床相对评分无明显相关性（r=0.301、r=-0.386,P〉0.05）。结论 GC可通过抑制IL-18、提高TGFβ-1血清分泌水平而有效调节MG患者细胞免疫功能。     

臭苜蓿根提取物对脂多糖诱导急性炎症中核因子-κB表达的影响

目的探讨核因子-κB（NF-κB）在LPS诱导急性炎症中的表达及臭苜蓿根提取物的干预作用。方法通过脂多糖干预RAW264．7细胞系建立炎症细胞模型,免疫细胞化学法检验NF-κB的表达及分布变化。结果免疫细胞化学法结果显示干预时,巨噬细胞胞核被染为棕色,NF-κB集中分布在细胞核且表达增强。臭苜蓿根提取物干预时NF—κB多分布在胞质未被激活。结论臭苜蓿根提取物通过抑制NF-κB的激活发挥抗炎作用。     

褪黑素对脑出血大鼠基质金属蛋白酶表达及神经功能的影响

目的观察褪黑素对脑出血大鼠神经功能缺损及血肿周围组织基质金属蛋白酶(MMP)表达的影响。方法将SD雄性大鼠85只,随机分为正常组10只、假手术组25只、模型组25只、褪黑素组25只;后2组建立脑出血模型,后3组随机于12h、1、2、4和7d处理,每个时间点5只。修正神经功能缺损评分(NSS)对各组大鼠进行神经功能评估;透射电子显微镜观察出血侧皮质微血管形态;RT-PCR技术定量分析脑组织MMP-2、MMP-9mRNA表达。结果褪黑素组1⁷dNSS低于模型组(P<0.05);褪黑素组和模型组12h7dNSS低于模型组(P<0.05);褪黑素组和模型组12h⁴dMMP-2mRNA水平均逐渐升高,褪黑素组7dMMP-2mRNA明显低于模型组(P<0.05);模型组MMP-9mRNA 2d显著升高,褪黑素组MMP-9mRNA峰值1d出现,7d再次升高,并明显高于模型组(P<0.05)。结论褪黑素能够改善脑出血大鼠神经功能,对脑出血具有保护作用,其机制可能与褪黑素通过调控MMP-2和MMP-9转录,减轻血管源性脑水肿相关。     

NADPH氧化酶对HSV-1感染的小胶质细胞MMP-9激活的影响

目的 探讨NADPH氧化酶在单纯疱疹病毒1型(HSV-1)诱导的小鼠小胶质细胞(BV2)基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达中的作用. 方法 应用0.5、1.0mmol/LNADPH氧化酶特异性抑制剂Apocynin作用HSV-1诱导的BV2细胞,采用明胶酶谱分析细胞培养上清中MMP-9活性;RT-PCR检测NADPH氧化酶亚基p47phox及MMP-9 mRNA的表达;Dihydroethidium(DHE)测定细胞内活性氧簇(ROS)的产生量. 结果 与正常对照组比较,HSV-1诱导的BV2培养上清中MMP-9活性增加,p47phox、MMP-9 mRNA的表达增高,细胞内ROS水平增高约两倍以上,差异均有统计学意义(P＜0.05);0.5 mmol/L Apocynin作用后可使上述变化减轻,但仍高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 NADPH氧化酶在HSV-1激活小胶质细胞MMP-9表达中可能起重要作用.     

Mg对单纯疱疹病毒性脑炎小鼠水孔蛋白-4表达的影响及血脑屏障通透性的研究

目的 研究镁剂对单纯疱疹病毒性脑炎(Herpes simplex encephalitis,HSE)后水孔蛋白-4(aquaporin-4,AQP4)表达、血脑屏障(BBB)通透性及神经功能的影响.方法 小鼠脑内接种HSV-1病毒,治疗组静脉注射硫酸镁,对照组仅注射等量生理盐水.采用免疫组化技术对感染侧脑组织AQP4蛋白进行检测.通过检测渗出到脑血管外的伊文斯蓝(Evans Blue,EB)的含量来定量观察BBB的通透性.HSV-1病毒感染后5d对小鼠进行神经功能评分.结果 造模后第3天,脑组织AQP4的表达增加,第5天时更加明显(P<0.01),与血脑屏障通透性增高相一致,给与硫酸镁治疗后,血脑屏障通透性及AQP4的表达均明显降低(P<0.01),伴随着神经功能的改善.结论 镁剂能抑制AQP4蛋白的表达,保护BBB,改善脑炎后神经功能.     

电针结合安脑丸对脑梗死大鼠模型的神经保护作用

目的 在短暂性大脑中动脉栓塞缺血再灌注(transient middle cerebral artery occlusion infarction/reperfusion,tMCAO I/R)模型大鼠中证实电针结合安脑丸治疗对其具有神经保护作用,并对脑梗死后神经保护的机制进行初步探索.方法 SD大鼠随机分为假手术组、模型组、安脑丸组和电针结合安脑丸组.线栓法制作SD大鼠左侧短暂性大脑中动脉栓塞模型.mNSS评分法对各组大鼠各个时间点进行行为学评分.实时荧光定量PCR技术对各组大鼠各个时间点Bcl-2 mRNA转录水平进行分析.免疫组化法观察脑梗死后10 d各组大鼠脑组织Caspase-3阳性细胞表达,Western blot分析各组大鼠脑组织Caspase-3蛋白表达水平.TUNEL原位细胞凋亡检测脑梗死后10 d各组大鼠梗死区边缘神经元细胞凋亡数量.结果 假手术组(正常)mNSS评分为0,未见脑梗死,偶见生理性凋亡细胞.安脑丸组和电针结合安脑丸组在4、7、10 d mNSS评分明显低于模型组(均P<0.05),其中,电针结合安脑丸组更低(P<0.05).实时荧光定量PCR的检测结果 显示脑梗死后Bcl-2 mRNA转录水平升高,安脑丸组和电针结合安脑丸组与模型组相比升高更明显(均P<0.05),其中,电针结合安脑丸组较安脑丸组更高(P<0.05).免疫组化及Western blot的检测结果 都显示,脑梗死后10 d安脑丸组和电针结合安脑丸组大鼠脑组织Caspase-3阳性细胞表达数及蛋白表达水平要明显低于模型组(均P<0.05),其中电针结合安脑丸组较安脑丸组更低(P<0.05).TUNEL检测结果 显示梗死后10 d安脑丸组和电针结合安脑丸组的神经元细胞凋亡数量明显低于模型组(均P<0.05),电针结合安脑丸组较安脑丸组更低(P<0.05).结论 中药安脑丸治疗 tMCAO I/R模型大鼠,可减少大鼠脑梗死区边缘神经元细胞凋亡数量,改善神经功能,结合电针治疗效果更为显著.其神经保护作用机制可能与针药结合治疗后上调了Bcl-2 基因表达,抑制Caspase-3的表达有关.     

miR-150靶向调控血管内皮生长因子影响脑梗死后神经康复和血管新生

目的 ：探讨miR-150对脑缺血大鼠血管结构的保护作用及促进血管生成的作用机制。方法 ：SD大鼠被分为4组（n=15）：假手术（Sham）组、中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）组、MCAO+miR-150组和MCAO+模拟物阴性对照（miR-NC）组。除Sham组外,其余组采用电凝法建立大鼠大脑MCAO模型。MCAO+miR-NC组和MCAO+miR-150组分别注射PEG脂质体包埋miR-NC或miR-150(2.4 mg/kg,iv)。建模后第14天,观察MCAO大鼠神经功能、神经损伤和血管生成的变化。建立缺氧葡萄糖剥夺（oxygen-glucose deprivation,OGD）脑微血管内皮细胞（brain microvascular endothelial cells,BMECs）模型,研究miR-150促进血管生成的作用及其可能机制。荧光素酶活性测定证实miR-150与血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的结合位点。结果 ：体内实验结果表明,MCAO大鼠脑梗...     

TLR4-P38MAPK信号通路在LPS诱导BV2细胞中的表达及意义

目的观察LPS诱导小胶质细胞后信号通路Toll样受体4(TLR4)-p38蛋白激酶(p38MAPK)的表达及意义。方法体外培养BV2小胶质细胞,分为对照组、LPS诱导组(LPS刺激12h及24h)及SB203580干预组(LPS+SB203580诱导12h及24h),应用ELISA法检测各组TNF-α、IL-6水平,RT-PCR法检测各组TLR4mRNA和p38MAPK mRNA的表达变化。结果 LPS诱导组细胞分泌TNF-α、IL-6水平显著提高,诱导24h后细胞上清液含量分别为(513.67±14.05)pg/mg和(396.84±15.41)pg/mg。给予SB203580抑制剂后TLR4mRNA和p38MAPK mRNA表达明显减弱,细胞分泌TNF-α、IL-6含量表达与感染组比较也明显降低。结论 LPS刺激小胶质细胞可引起TLR4-p38MAPK信号通路的活化并释放炎性细胞因子,而SB203580则对其有明显的抑制作用,证明TLR4-p38MAPK信号通路与小胶质细胞的炎性活化密切相关。     

骨髓间充质干细胞移植对脑缺血大鼠突触可塑性影响的实验研究

目的：探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对脑缺血大鼠神经功能恢复及突触可塑性的影响。方法：采用大鼠大脑中动脉缺血模型，分为假手术组、模型组、PBS组和MSCs组，研究脑缺血24h后移植MSCs的大鼠神经功能缺损评分（NSS）；分别测定梗死灶周围脑组织突触素（SYN）和脑源性神经营养因子（BDNF）mRNA的表达；电镜及免疫电镜下观察突触结构的变化。结果：与模型组及PBS组大鼠相比，MSCs组的NSS评分较低，SYN及BDNF mRNA的表达则明显较高；电镜检查示MSCs组大鼠突触界面曲率较大，突触后致密物质的厚度增加，突触间隙宽度变窄，突触活性带长度增加；免疫电镜示BrdU阳性细胞和宿主脑神经元形成非成熟的突触样结构。结论：MSCs移植可能通过神经营养效应调节脑缺血周围神经细胞的可塑性改善脑缺血大鼠的神经功能。