三维多孔支架材料PLLA/n-HA的体外生物相容性研究

目的：研究三维多孔支架材料聚乳酸/纳米羟基磷灰石(PLLA/n-HA)的体外生物相容性,探讨其作为细胞培养材料和骨组织工程支架的可行性。方法将大鼠成骨细胞接种于PLLA/n-HA复合支架上,体外共同培养后,CCK-8法检测大鼠成骨细胞增殖活性,荧光倒置显微镜、扫描电子显微镜下观察PLLA/n-HA复合支架材料表面和孔隙内细胞粘附情况。结果 CCK-8法检测显示实验组复合支架材料上细胞的增殖与空白对照组的差异无统计学意义（P>0.05）;电镜观察到细胞在复合支架材料表面和孔隙内大量黏附、生长,并且随着共培养时间的增加,材料表面的细胞数量呈几何级增长。结论三维多孔支架材料PLLA/n-HA的生物相容性较好,可望成为一种性能良好的骨组织工程支架材料。     

大鼠股骨缺损模型中BBP增强BMP-2的骨诱导作用*

目的验证在大鼠节段性骨缺损模型中骨形态发生蛋白结合肽（BMP Binding Peptide,BBP）对于重组人骨形态发生蛋白-2（recombinent human bone morphogenetic protein-2,rhBMP-2）骨诱导作用的影响。方法 70只缺损大鼠分别分成7组,每组不同剂量的rhBMP-2＋/-1000 gBBP,4w和8w后分别摄片,动物8w后处死,股骨样本分别手工评估,采用uCT测量骨容积,随后分别采用组织学和生物力学分析。结果高剂量（10 g）rhBMP-2组术后8w可见骨愈合,骨缺损处骨完全覆盖和桥接,但低剂量（5 g和2 g）rhBMP-2组术后8w骨愈合欠佳。与单独应用rhBMP-2相比,使用低剂量的rhBMP-2复合一定量的BBP可以取得更满意的骨形成量。BBP增强rhBMP-2的骨形成活性发生于4~8w时,而在术后早期并无明显作用。单纯应用BBP仅可见骨缺损处局部的钙化,未见骨愈合。结论 BBP能显著增强rhBMP-2的骨形成活性,这种增强作用需要一定时间来产生效果;其活性发生于术后4~8w时,在术后早期并无明显作用。而且BBP本身并没有骨诱导潜力,仅仅能增强rhBMP-2的骨形成活性。BBP起到缓释作用,与rhBMP-2紧密结合后,让rhBMP-2缓慢而持久的释放。     

组织工程软骨修复兔半月板损伤

背景：半月板游离缘为无血运区，损伤不易自然愈合，需要在一定的条件促进下产生纤维组织愈合。目的：采用组织工程软骨与纤维蛋白黏合剂治疗半月板无血运区的损伤，并进行的效果比较。设计：随机分组，空白对照实验。单位：深圳市第二人民医院动物实验室。对象：①选择生后3～5d青紫兰兔10只用于纤维软骨细胞的提取。②选择健康成年青紫兰兔36只，随机分为3组，空白对照组、纤维蛋白黏合剂治疗组和组织工程软骨组，每组12只。方法：实验于2003—09／2004—03深圳市第二人民医院动物实验室完成。将10只生后3～5d幼免处死后提取纤维软骨细胞进行培养，制成软骨细胞含量约为12&;#215;10^8L^-1的组织工程软骨。将36只成年兔造成半月板(0．7&;#215;0．3)cm全层裂伤的无血运区损伤模型。空白对照组裂伤不用任何填塞处理，纤维蛋白黏合剂治疗组用纤维蛋白黏合剂注入裂口，组织工程软骨组用组织工程软骨注入裂口。3组动物分别于术后2，6，12周各处死4只，每次每组取8个半月板，行大体形态观察和组织学检查。主要观察指标：兔半月板损伤模型标本大体形态观察和组织学检查。结果：36只兔均进入结果分析。①兔半月板损伤模型标本大体观察结果：空白对照组半月板损伤裂口均未愈合，未见组织填充；纤维蛋白黏合剂组及组织工程软骨组的全部半月板伤口均已被组织填充。②兔半月板损伤模型标本组织学检查结果：空白对照组术后2～12周裂口边缘无软骨细胞增殖；纤维蛋白黏合剂组术后12周，缺损边缘有较多的成纤维细胞样细胞，与邻近组织连接较紧密，形成瘢痕组织愈合；组织工程软骨组术后12周，缺损处可见软骨陷窝及软骨囊，软骨细胞成团状。结论：组织工程软骨在受体内可成活，可形成纤维软骨样愈合，形成软骨细胞特有的生物学标志，但修复的组织与邻近正常半月板组织及正常软骨的胶原排列有明显差异。     

冻结肩病理改变及过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ激动剂治疗作用的研究

背景:冻结肩是一种以肩关节疼痛和活动受限为主要特征的疾病,目前病因不明,治疗效果欠佳。目的:研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对大鼠肩关节囊纤维化及炎症反应等病理改变的影响,以及过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ(PPAR-γ)激动剂对大鼠冻结肩的治疗作用,为临床治疗冻结肩提供新思路。方法:利用TGF-β1诱导人皮肤成纤维细胞(HSF)异常纤维化,PPAR-γ激动剂三萜类化合物(CDDO-IM)作为治疗药物,检测细胞增殖、迁移情况及细胞外基质蛋白的表达情况。向SD大鼠的肩关节腔注射TGF-β1过表达的腺病毒构建大鼠冻结肩模型。2周后,其中一半大鼠用罗格列酮灌胃饲养2周,作为罗格列酮治疗组。检测大鼠肩关节活动度,利用ELISA检测关节腔炎症因子,HE染色和免疫组织化学法检测大鼠肩关节囊组织细胞外基质蛋白的表达情况。结果:在细胞实验中,TGF-β1组的增殖率为83.6%,TGF-β1+CDDO-IM组增殖率为19.3%(P<0.01);TGF-β1组的迁移率为84.9%,TGF-β1+CDDO-IM组迁移率为44.1%(P<0.05);TGF-β1能够诱导HSF增殖、迁移及异常纤维化。动物实验成功构建了TGF-β1诱导的大鼠冻结肩模型,免疫组织化学结果提示,罗格列酮能够抑制大鼠冻结肩的炎症形成,减少基质蛋白生成,重塑纤维组织结构。结论:冻结肩的病理改变主要是纤维细胞异常增生,炎症细胞浸润,纤维结构紊乱,而PPAR-γ激动剂可以缓解大鼠冻结肩关节僵硬,减弱炎症反应,抑制异常纤维化。     

数字化技术辅助手术治疗 Pilon 骨折疗效分析

目的研究数字化技术辅助手术治疗 Pilon 骨折的疗效。方法选取30例 Pilon 骨折患者,随机分为 A 组和 B 组（各15例）。A 组采用数字化技术辅助手术,将患者计算机断层扫描（CT）数据导入Mimics10．01软件进行三维重建,选择合适术式行模拟复位手术,再进行手术治疗;B 组则采用传统的非数字化技术辅助手术。术后第2天,采用放射学疗效评价标准（Burwell-Charnley 标准）评估患者术后骨折复位情况;术后6个月、12个月,采用临床疗效评价标准（Olerud-Molander 主观评分标准）评估患者术后踝关节功能恢复情况。结果术后第2天,A 组解剖复位及功能复位例数多于 B 组,差异有统计学意义（P＜0．05）;术后6个月、12个月,A 组踝关节功能评分高于 B 组,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论数字化技术辅助手术治疗 Pilon 骨折可使骨折块更好复位,术后踝关节功能恢复更好。     

纳米复合材料的制备及其在骨科中的改性应用

纳米材料因其独特的理化性质已经被应用于医学领域,包括组织工程修复、靶向给药、基因治疗、影像学检查等方面,单一的纳米材料往往不能满足技术要求,通过各种方法制备得到无机/有机、有机/有机、无机/无机纳米复合材料,不仅能保留原材料的独特理化性质,也能展现出独特的生物学特性。运用各种方法对纳米材料进行复合或改性,提高材料的生物相容性、力学性能及骨传导性等,是目前骨组织支架修复材料的研究热点。本文就纳米复合材料的制备方法及其在骨科领域的改性研究作一综述。     

Caspase-6,8在骨关节炎软骨细胞中的表达及意义

目的探讨Caspase-6,8在骨关节炎软骨细胞中的表达及意义。方法用免疫组化SP法、原位末端标记技术(TUNEL)等方法检测Caspase-6,8在22例骨关节炎患者关节软骨细胞中的表达和软骨细胞凋亡情况,并探讨基因表达与细胞凋亡之间的关系。结果在软骨细胞中Caspase-6,8的表达实验组阳性率均高于对照组(P<0.05);实验组软骨细胞凋亡程度与Caspase-6,8的表达均呈正相关(P<0.05)。结论Caspase-6,8的表达与骨关节炎发生发展有密切关系。     

Caspase-3、XIAP在骨关节炎中的表达及意义

目的探讨Caspase-3、XIAP在骨关节炎软骨细胞中的表达及意义。方法用免疫组化SP法、原住末端标记技术（TUNEL）等检测Caspase-3、XIAP在22例骨关节炎患者关节软骨细胞中的表达和软骨细胞凋亡情况。结果在软骨细胞中Caspase-3的表达实验组阳性率高于对照组（P〈0．01）；实验组软骨细胞凋亡程度与XIAP的表达呈负相关（P〈0．05），与Caspase-3的表达呈正相关（P〈0．01）。结论Caspase-3、XIAP基因的表达与骨关节炎发生发展有密切关系。     

不同孔径纳米羟基磷灰石人工骨修复兔桡骨缺损效果比较

目的:纳米级的羟基磷灰石材料与人体内组织成分更为相似,具有更佳的生物性能。评价不同孔径的多孔纳米羟基磷灰石人工骨的骨缺损修复能力,从而筛选出适合的孔径以达到骨传导功能与生物力学性能的良好统一。方法:实验于2005-10/2006-10在深圳市第二人民医院中心实验室完成。①实验材料:纳米羟基磷灰石人工骨以硝酸钙和磷酸二氢铵为原料,采用溶胶-絮凝法制备粉体,运用压力成型、木模成型和浸渍成型分别制得孔隙分布均匀的孔径分别为50～150μm、100～250μm和300～500μm的多孔纳米羟基磷灰石人工骨。②实验动物:雄性新西兰大白兔60只随机分为植入50～150μm孔径材料组、植入100～250μm孔径材料组、植入300～500μm孔径材料组、空白对照组,每组15只。实验过程中对动物处置符合动物伦理学要求。③实验方法:制备双侧桡骨骨缺损动物模型,然后用3种不同孔径的纳米羟基磷灰石人工骨材料植入骨缺损处进行修复,空白对照组不植入任何材料。④实验评估:术后4,8和12周分别行大体标本观察、X射线片观察、扫描电镜观察及生物力学测试,比较各组材料修复骨缺损的能力。结果:实验动物均进入结果分析。①X射线片检查结果:术后4周、8周、12周,植入100～250μm孔径材料组X射线评分高于植入50～150μm,300～500μm孔径材料组,差异有显著性意义(P<0.05)。②生物力学检测结果:术后4周、8周、12周,植入100～250μm孔径材料组生物力学强度高于植入50～150μm,300～500μm孔径材料组,差异有显著性意义(P<0.05)。③扫描电镜观察结果:植入100～250μm孔径材料组成骨效果明显优于植入50～150μm,300～500μm孔径材料组和空白对照组。结论:纳米羟基磷灰石人工骨具有良好的成骨能力,但其骨修复能力受孔径因素的影响,孔径100～250μm的纳米羟基磷灰石人工骨材料成骨能力较好。     

骨软骨瘤和骨恶性肿瘤cyclinD1和CDK4的表达及意义

目的研究骨软骨瘤和骨恶性肿瘤组织中cyclinD1和CDK4表达及其临床病理意义.方法骨肿瘤组织脱钙后常规石蜡包埋切片ABC免疫组化法.结果15例骨软骨瘤cyclinD1和CDK4表达均阴性,45例骨恶性肿瘤cyclinD1和CK4表达阳性率分别为44%(20/45)和60%(27/45).组织学分级1级和无原发灶外转移骨恶性肿瘤cyclinD1和CDK4阳性率明显低于组织学分级Ⅲ级和原发灶外转移病例,其中分级之间均存在显著差异(P＜0.05);骨恶性肿瘤中cyclinD1和CDK4表达存在密切正相关(P＜0.05).结论cyclinD1和CDK4表达与骨恶性肿瘤生物学行为和预后存在较密切关系,骨恶性肿瘤的分子发病机制可能涉及到CDK4/.cyclinD1调节通路异常,检测骨良性病变cyclinD1和CDK4的表达可能对预防和早期发现骨恶性肿瘤有一定临床意义.