间充质干细胞在新型冠状病毒肺炎治疗中的作用

新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)是由新型冠状病毒(severe acute re-spiratory syndrome coronavirus-2,SARS-CoV-2)感染引起的以肺为主要靶器官的全身多器官损伤性传染性疾病[1-2].其病理生理机制涉及炎症、缺氧、发热、电解质平衡紊乱、休克等多个基本病理过程[3].免疫细胞过度活化、细胞因子风暴、过度氧化应激可能是COVID-19引起急性呼吸窘迫症状(acute respiratory distress syndrome,ARDS)、脓毒症休克及多器官功能衰竭并导致死亡的主要原因[4-6].截至2021-07-28日,全球累计COVID19确诊病例超过194608040例,死亡逾4162304例,严重影响了各国人民的身心健康.《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第八版)》对COVID-19临床分型主要有四型:轻型、普通型、重型和危重型[1].轻型和普通型的致死率相对较低,重型和危重型致死率较高,是临床治疗的重点[7].     

LASIK角膜瓣蒂不同位置的神经损伤及再生的形态学研究

目的 在形态学上比较兔眼角膜瓣上方蒂和鼻侧蒂之间角膜神经损伤及再生过程的差异.方法 选用健康、纯种新西兰白兔35只,随机分为7组,每组5只,制作角膜瓣蒂位置随机一眼留在鼻侧,另一眼留在上方,分别于术后1、3 d,1、4、6、10、20周处死,每组5只兔（10只眼）.取下的角膜做组织化学染色,用氯化金染色法在光镜下观察角膜末梢神经的形态学改变.计算角膜新生神经纤维的数目,行统计学t检验分析.结果 兔角膜瓣上方蒂和鼻侧蒂在角膜神经恢复和再生过程的比较无显著性差异.均表现为术后1 d角膜瓣边缘部位的神经受到不同程度的损害;术后3 d开始修复;术后10周被切断的基质内神经发出更多新生的神经索,与相邻基质神经相互吻合,角膜瓣内神经的形态和密度基本恢复到术前水平.结论 兔角膜瓣两种位置蒂的角膜神经损伤及再生修复过程无明显差异.     

3.2 mm切口折叠人工晶状体缝线固定术

2003年3月-2004年5月，我们为4例无晶状体后囊膜患者行3．2mm切口折叠人工晶状体缝线固定术，取得较好的临床效果，现报告如下。     

超声微泡介导Ngb基因过表达对氯化钴诱导的SH-SY5Y 细胞缺氧的保护作用

用超声微泡介导技术将神经球蛋白（Ngb）导入SH-SY5Y细胞中,以氯化钴诱导细胞缺氧环境,检测Ngb对神经细胞缺氧损害的作用。当超声条件为0.8W/cm2超声能量、60s辐照时间、50%占空比20%微泡浓度时,pAcGFP1-C1-Ngb转染的细胞存活率以及转染率最高,且在此条件下微泡联合超声的细胞转染效率明显高于单纯质粒转染、质粒转染联合微泡以及质粒转染联合超声的细胞。此外,在氯化钴诱导的缺氧条件下,微泡联合超声介导pAcGFP1-C1-Ngb转染的细胞中caspase-3活力显著低于非转染的细胞。在同一缺氧时间点,微泡联合超声介导的pAcGFP1-C1-Ngb转染细胞中神经球蛋白蛋白和mRNA的表达显著高于其他方式转染的细胞。证实超声联合微泡能够增强外源性神经球蛋白基因的转染,神经球蛋白的过表达对氯化钴诱导的SH-SY5Y细胞缺氧具有保护作用。     

超声微泡介导Ngb基因过表达对大鼠视网膜急性高眼压损伤的保护研究

目的 探讨超声微泡靶向破坏(ultrasound-targeted microbubble destruction,UTMD)技术介导的脑红蛋白(neuroglobin,Ngb)过表达对大鼠急性高眼压损伤的视网膜保护作用.方法 40只SD大鼠右眼进行基因转染,即利用UTMD将携带外源性Ngb基因的重组质粒转染至大鼠视网膜组织;左眼为对照组(未转染组),即只升高眼压.在转染后48 h,采用前房加压灌注升高眼压的方法制作急性高眼压模型,术后5 min、10min、30 min、60 min分别处死各组大鼠,摘取眼球,分离视网膜.Westernblotting检测Ngb在急性高眼压时表达的变化情况,测定并比较双眼的caspase-3活性.结果 UTMD介导外源性Ngb在视网膜各层均有表达,对视网膜没有造成损伤.未转染组Ngb表达水平呈时相性变化,在高眼压缺氧5～ 10 min时明显增高,在10min时达到峰值,随后开始下降,在60 min时最低.转染组Ngb表达水平明显高于未转染组,在缺氧30 min时达到峰值,随后开始下降.随着高眼压时间的延长,caspase-3活性逐渐增加,说明死亡的视网膜神经纤维层细胞越来越多.转染组的caspase-3活性明显低于未转染组,在相同时间点,两组之间差异均有统计学意义(均为P ＜0.05).结论 UTMD能够在体内安全、有效地介导Ngb基因转染至视网膜组织中.Ngb过表达可以降低视网膜对缺血缺氧的敏感性,起到视网膜组织保护作用.     

Caspase-3在恶性脑膜瘤组织中的表达及临床意义

目的:探讨Caspase-3蛋白在恶性脑膜瘤组织中的表达及临床意义。方法:收集武汉大学人民医院病理科2006～2010年恶性脑膜瘤存档蜡块40例,另取5例因创伤行颅内减压的正常脑组织作为对照。采用免疫组织化学S-P法检测40例恶性脑膜瘤和正常脑组织中Caspase-3蛋白的表达水平,并采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文报告管理系统对Caspase-3蛋白在各组中的表达进行半定量分析,用SPSS13.0软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q)检验。结果:Caspase-3蛋白在恶性脑膜瘤组织中呈低表达,在正常对照组中呈高表达。Caspase-3蛋白在正常对照组中的表达明显高于恶性脑膜瘤组。图像分析结果显示:两组间差异有显著性意义(P<0.05)。结论:Caspase-3蛋白在恶性脑膜瘤组织中呈低表达,而在正常对照组中呈高表达。提示caspase-3蛋白表达降低使细胞凋亡受抑制可能参与了脑膜瘤的发生和发展。     

pAcGFP1-C1-Ngb真核表达载体的构建及在SH-SY5Y细胞中的表达

 目的克隆SD大鼠脑红蛋白（Ngb）基因至真核表达载体pAcGFP1-C1，构建表达质粒pAcGFP1-C1-Ngb，并转染至人SH-SY5Y细胞表达Ngb蛋白。方法提取大鼠肝脏组织总RNA,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法扩增大鼠Ngb基因,与双酶切的pAcGFP1-C1连接,从而构建pAcGFP1-C1-Ngb真核表达质粒。转染SH-SY5Y细胞,并用Western blotting的方法鉴定Ngb蛋白在SH-SY5Y细胞中的表达。结果获得SD大鼠Ngb基因全长序列和重组真核表达载体pAcGFP1-C1-Ngb。Western blotting结果显示，转染pAcGFP1-C1-Ngb后的SH-SY5Y细胞Ngb基因有稳定的表达。结论成功地克隆了SD大鼠Ngb基因、构建了pAcGFP1-C1-Ngb真核表达载体，并在人SH-SY5Y细胞中获得Ngb蛋白的稳定表达，为进一步研究Ngb基因在细胞中的功能奠定了基础。     

大鼠颅脑损伤后脑组织miR-122-5p含量变化及其对神经功能的影响

目的 探讨大鼠颅脑损伤后脑组织miR-122-5p含量变化及其对神经功能的影响。方法 将40只成年SD大鼠随机分为假手术组,TBI模型组,乱序miRNA组,miR-122-5p模拟物组。采用Feeney法制备TBI大鼠模型;乱序miRNA组造模24 h后,立体定向注射乱序miRNA 5 μl（20 μmol/L）;miR-122-5p模拟物组造模24 h后,立体定向注射miR-122-5p模拟物组5 μl（20 μmol/L）。qRT-PCR法检测大鼠脑组织miR-122-5p的表达变化;免疫印迹法法检测p53蛋白表达水平;水迷宫法检测学习记忆功能;TUNEL法检测脑组织细胞凋亡情况;流式细胞术检测脑细胞线粒体膜电位的变化。结果 与假手术组大鼠比较,模型组和乱序miRNA组大鼠脑组织miR-122-5p表达明显减少,p53蛋白显著上调,脑组织细胞凋亡数明显增多,线粒体膜电位下降显著,水迷宫测试大鼠寻找隐形平台时间显著延长;与模型组大鼠比较,miR-122-5p模拟物组大鼠miR-122-5p表达明显增加,并伴随p53蛋白低表达,细胞凋亡水平下降,神经功能障碍得到明显逆转。结论 颅脑损伤后miR-122-5p的表达下调可能导致p53蛋白的表达升高,促进神经细胞凋亡。     

糖尿病性白内障超声乳化摘出及人工晶状体植入术

我科2004年3月至2006年12月进行超声乳化摘出及人工晶状体植入术治疗44例（56眼）2型糖尿病性白内障,疗效良好,现报告如下。