火把花根片在小鼠骨髓移植模型中减轻急性移植物抗宿主病的实验研究

目的探讨火把花根片在小鼠骨髓移植模型中减轻急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease,aGVHD)的效果及可能的作用机制。方法建立小鼠异基因骨髓移植GVHD模型,预处理为放疗8．0Gy,分为：对照组(n=10)异基因骨髓细胞(2×10~6)加脾T淋巴细胞(2×10~6)移植组；火把花根片组(n=20)异基因骨髓细胞(2×10~6)加脾T淋巴细胞(2×10~6)移植加火把花根片预防组。比较受鼠生存时间和GVHD发生情况,受鼠外周血象中白细胞、血球压积等恢复情况和骨髓细胞中嵌合体H-2D~b阳性细胞百分比以评价造血重建。在移植后不同时间点分别采用流式细胞仪检测受鼠的脾细胞中CD4~+和CD8~+以及CD25和CD69的表达。结果移植后对照组受鼠均于25天内死于GVHD,火把花根片组GVHD的发生率为20%(4/20),与对照组小鼠相比,存活率和时间明显增高和延长(P＜0．01)；存活的火把花根片组小鼠(n=4)40天时骨髓细胞中的H-2D~b阳性细胞百分比达(93．38±4．32)%。移植后10天开始,火把花根片组小鼠CD4~+和CD8~+T细胞比例明显低于对照组(P＜0．...     

续断对成骨细胞增殖、分化、凋亡和细胞周期的影响

在动物实验的基础上,探讨续断对成骨细胞增殖、分化、凋亡、细胞周期和Ⅰ型前胶原αmRNA表达影响.根据文献方法培养大鼠成骨细胞株UMR-106/01,采用3H-Tdr法检测细胞增殖,PNPP法、RIA法、茜素红染色法以及定量RT-PCR法分别检测碱性磷酸酶活性、骨钙素活性、矿化结节形成和Ⅰ型胶原αmRNA的表达,从而了解续断对成骨细胞增殖、分化的影响;FCM法检测细胞周期.结果显示续断中、高剂量能显著促进成骨细胞的增殖、增加碱性磷酸酶的表达及矿化结节形成的数量,促进成骨细胞骨钙素和Ⅰ型前胶原mRNA的表达(P＜0.01,P＜0.05),和雌激素组比较差异无显著性.续断高剂量组细胞增殖率、S期细胞比率和细胞增殖指数等均显著高于空白对照组(P＜0.01,P＜0.05),和雌激素组比较差异也无显著性.细胞凋亡率和G0-G1期细胞比率显著低于空白对照组(P＜0.01,P＜0.05).表明续断能有效促进成骨细胞的分化、增殖,防止成骨细胞凋亡,可能是该药促进骨折愈合、防治骨质疏松的机制之一.     

嗅神经髓鞘细胞移植促进大鼠横断脊髓轴突再生的研究

目的;观察嗅神经髓鞘细胞（OECs)对脊髓轴突再生的促进作用。方法：将分离,纯化与体外培养2周的SD大鼠OECs,移植于12只成年SD大鼠第10胸椎横断模型的脊髓两断端;8只对照动物注入DMEM／F12培养基,移植后2周和8周进行神经嗜银染色与髓磷脂碱性蛋白（MBP）组织化学和神经生长因子受体（NGFR）免疫组织化学研究。结果：OECs移植组2周后脊髓两端在形态学上呈现初步愈合现象,组织学观察显示,移植OECs与损伤脊髓组织整合良好,再生轴突长入断端组织,8周时再生轴安全检查明显增多,OECs与再生轴突均呈MBP和NGFR阳性表达。对照组两断端液化坏死,未见再生轴突。结论：OECs移植可保护损伤的脊髓并促进宿主脊髓轴突再生。     

Influences of olfactory ensheathing cells transplantation on axonal regeneration in spinal cord of adult rats

Objective: To observe whether offactory ensheathing cells could be used to promote axonal regeneration in a slmntaneously nonregenerating system. Methods: After laminectomy at the lower thoracic level, the spinal cords of adult rats were exposed and completely transected at T10. A suspension of ensheathing cells was injected into the lesion site in 12 adult rats, and control D/F-12 (1:1 mixture of DMEM and Ham‘s F-12) was injected in 12 adult rats. Six weeks and ten weeks after cell transplantation, the rats were evaluated by climbing test and motor evoked potentials (MEPs) monitoring. The samples were procured and studied with histologiel and immounohistochemical methods. Results: At the 6th week after cell transplantation,d the rats in both the transplanted and control groups were paraplegic and the MEPs could not be recorded. At the 10th week after cell transplantation, of 7 rats in the control group, 2 rats had muscles‘ contraction of the lower extremities, 2 rats had hips and/or knees‘ active movement; and 5 rats‘ MEPs could be recorded in the hind limbs in the transplanted group ( n = 7). None of the rats in the control group had functional improvement and no MEPs recorded ( n = 7 ). Numerous regenerating axons were observed through the transplantation and continued to regenerate into the denervated host tract. Cell labelling using anti-Myelin Basic Protein (MBP) and anti-Nerve Growth Factor Receptor (anti-NGFR) indicated that the regenerated axons were derived from the appropriate neuronal source and that donor cells migrated into the denervated host tract. But axonal degeneration existed and regenerating axons were not observed within the spinalcords of the adult rats with only D/F-12 injection. Conclusions: The axonal regeneration in the transected adult rat spinal cord is possible after eusheathing cells transplantation.     

麻疹疫苗注射对哮喘患儿白细胞介素4、5的下调作用及其意义

目的　研究麻疹疫苗 (麻苗 )反复注射治疗对哮喘患儿的免疫影响。方法　采用生物素 亲合素双抗夹心酶联免疫 (ABC ELISA)法测定麻苗反复注射治疗前后 13例哮喘患儿 (麻苗治疗组 )血浆及外周血单个核细胞 (PBMC)培养上清液中白细胞介素 4 (IL 4 )、IL 5与血清总IgE水平 ,荧光酶联免疫法在发玛西亚CAP系统中检测血清嗜酸粒细胞阳离子蛋白 (ECP)水平 ,并与 12例对照治疗组哮喘患儿及 17例正常对照组小儿比较。结果　麻苗治疗后IL 4、IL 5、血清总IgE、血清ECP水平及嗜酸性粒细胞 (EOS)计数显著降低 (P <0 .0 5 )。血浆及PBMC培养上清液IL 4与血清总IgE水平呈正相关 (r =0 .75 3,0 .737　P <0 .0 0 1) ;血浆及PBMC培养上清液IL 5与外周血EOS计数呈正相关 (r=0 .6 87,0 .6 4 5　 P<0 .0 1) ,同时与血清ECP水平呈正相关 (r=0 .6 36 ,0 .4 0　P <0 .0 1,P <0 .0 5 )。结论　麻苗反复注射是通过下调哮喘患儿IL 4、IL 5水平 ,进而降低血清总IgE水平及EOS的增殖与活化     

CD40L表达在异基因造血干细胞移植中GVHD发生的意义

目的：初步探讨在异基因造血干细胞移植（HSCT）中发生移植物抗宿主病（GVHD）患者DC40L表达的变化以及意义。方法：HSCT治疗重型β-地中海贫血（n=12）和遗传性溶血性贫血（n=1）成功植入的儿童患者，其中脐血移植（UCBT）8例，异基因外周血造血干细胞移植(allo-PBSCT)5例，在移植前、移植后发生GVHD时采用流式细胞仪检测和比较外周血中CD40L和CD40的表达。结果：3例UCBT无GVHD，其余均发生了Ⅰ-Ⅳ度急性GVHD。急性GVHD发生时CD4^ CD40L^ 和CD8^ CD40LT细胞表达明显升高，allo-PBSCT者更明显；慢性GVHD发生时患者的CD40L^ 、CD25^ 和CD69^ 在CD4^ 和CD8^ T细胞上的表达亦增加。CD19^ CD40^ B细胞的表达在UCBT和allo-PBSCT的3个月内则一直处于低于正常的水平。结论：CD40L高表达与GVHD的发生相关，提示CD40-CD40L共刺激途径在GVHD的发生中可能起着重要作用。     

CIK/NK细胞对荷骨肉瘤NOD/SCID小鼠肺转移瘤的杀伤作用

目的制备骨肉瘤U-2OS细胞NOD/SCID小鼠肺转移模型,探讨CIK/NK细胞对肺转移瘤的杀伤作用。方法 60只NOD/SCID小鼠随机分为3组(每组20只),A组:每只鼠经尾静脉接种U-2OS细胞2×106(0.2 ml)后24 h,输注CIK/NK细胞(2×107/0.2 ml);B组:每只鼠经尾静脉接种U-2OS细胞2×106(0.2 ml)后24 h,注射生理盐水0.2 ml;C组:每只鼠经尾静脉注射生理盐水0.2 ml后24 h,注射生理盐水0.2 ml。比较各组小鼠生存时间及肺部肿瘤负荷情况。结果 B组接种U-2OS细胞后29 d内小鼠全部死亡,其中16只肺部出现肉眼可见瘤块;A组接种U-2OS细胞后60 d内小鼠死亡8只,肺部均发现肉眼可见瘤块,余12只肺部均无瘤块。A组平均生存时间显著高于B组,差异有统计学意义(P<0.05),而与C组比较差异无统计学意义(P>0.05)。B组小鼠死亡时体重明显低于A组,而肿瘤细胞比例明显高于A组(P<0.05)。结论 CIK/NK细胞在NOD/SCID小鼠体内有肯定的抗骨肉瘤肺转移瘤效果。     

ICU嗜麦芽窄食单胞菌致下呼吸道感染的危险因素及耐药性分析

目的了解ICU嗜麦芽窄食单胞菌（Xan）致下呼吸道感染的危险因素有其耐药特征,为临床治疗提供实验依据。方法常规的方法对2004年1月至2007年12月ICU患者的下呼吸道标本进行培养分离,VITEK.TWO全自动微生物鉴定仪进行鉴定,K-B法进行药敏试验,用WHONET5.0进行数据统计。结果Xan对12种抗菌素的敏感率分别为氨曲南13.6%、阿米卡星21.3%、哌拉西林/三唑巴坦31.8%、替卡西林/棒酸36.4%、头孢哌酮/舒巴坦40.9%、环丙沙星47.0（31）%、头孢匹肟51.5%、氯霉素57.6%、头孢他啶60.6%、左氧氟沙星74.2%、复方新诺明75.8%及米诺环素100.0%;在感染者中所有的患者均有基础疾病且曾使用过广谱抗菌素,90.9%（60/66）接受侵入性检查或治疗。结论Xan对多种抗菌素耐药,其感染与患者的基础疾病、是否接受广谱抗菌素治疗及侵入性检查等有关。     

脐血与骨髓间充质干细胞的成骨细胞定向诱导及其成骨活性比较

目的:研究脐血与成人骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)的定向分化为成骨细胞的条件及其成骨活性,比较两种不同MSCs定向成骨细胞诱导后的成骨活性。方法:采用标准Ficoll-Hypaque技术分离脐血和成人骨髓MSCs,以地塞米松、β-磷酸甘油和维生素C为辅剂定向诱导成骨细胞,碱性磷酸酶、骨矿化结节和I型胶原作为成骨细胞鉴定与活性评价的指标。结果:两种MSCs的细胞形态和生物学特性无明显差异。定向成骨细胞诱导后,成骨细胞标志性产物碱性磷酸酶、骨钙素、上清钙、骨矿化结节和I型胶原均得到了稳定的表达,并显著高于未诱导MSCs,而且两种细胞的成骨活性差异无显著性意义。结论:脐血和成人骨髓MSCs在适当的条件下均可向成骨细胞定向转化,两种细胞均可作为骨组织工程的种子细胞。     

环氧乙烷灭菌物品对生物治疗细胞致畸性研究

目的 观察经环氧乙烷灭菌处理的物品感染生物治疗细胞后对其的致畸性.方法 将分离诱导的3种细胞分别接种至环氧乙烷灭菌处理保存的不同时间及高温高压灭菌的玻璃培养瓶中进行培养,分别将脐血诱导的NK/CIK细胞、人骨髓间充质下细胞和脐血CD34~+细胞,接种至环氧乙烷灭菌保存至培养瓶中,分别为1d(A组)、3个月(B组)、>6个月(C组);接种至高温高压蒸汽灭菌的玻璃培养瓶中D组为对照组;培养10 d,观察细胞的生长状况、形态、染色体断裂、断片、裂隙及核内染色体复制情况,计算染色体畸变率.结果 A、B组的NK/CIK细胞的诱导率明显低于C、D两组,差异有统计学意义(P<0.05),染色体断裂、断片及裂隙数量均明显高于C、D两组,差异有统计学意义(P<0.05),而C组与D组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 经环氧乙烷灭菌处理保存至1 d和3个月的物品对细胞产生明显的损伤作用,>6个月的物品对细胞未造成明显损伤作用;环氧乙烷对细胞会产生致畸致突变作用,建议采用保存至>6个月的灭菌物品,从而保证生物治疗的安全有效实施.