芒果苷抑制中波紫外线诱导人成纤维细胞提前衰老的相关研究

【摘要】 目的 研究芒果苷是否对反复亚毒性剂量中波紫外线（UVB）诱导的人二倍体成纤维细胞的早衰起抑制作用及其可能的机制。 方法 实验分成空白对照组（不做处理）,UVB-应激诱导的提前衰老（SIPS）组（单纯照光）,芒果苷4.0 mg/L组（单纯加药）,UVB + 芒果苷1.0 mg/L组、UVB + 芒果苷2.0 mg/L组、UVB + 芒果苷4.0 mg/L组（UVB照射联合药物处理）。成纤维细胞经5次UVB 10 mJ/cm2照射后,用细胞计数法（CCK8法）检测细胞增殖活性,β半乳糖苷酶染色（SA-β-Ga1）计算衰老细胞百分比,流式细胞仪测定细胞周期,蛋白印迹检测衰老相关蛋白p53、p21、p16含量,实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测基质金属蛋白酶1（MMP1）、基质金属蛋白酶3（MMP3）、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA和衰老相关基因p53、p21、p16 mRNA表达。采用单因素方差分析进行数据统计分析。 结果 UVB + 芒果苷1.0 mg/L组、UVB + 芒果苷2.0 mg/L组、UVB + 芒果苷4.0 mg/L组以及UVB-SIPS组细胞增殖活性（A450）依次为0.322 9 ± 0.011 3、0.336 1 ± 0.016 3、0.342 6 ± 0.014 4、0.288 2 ± 0.020 7（F = 110.08,P < 0.05）,β半乳糖苷酶染色阳性率依次为（88.83 ± 4.54）%、（46.33 ± 5.51）%、（32.17 ± 6.05）%、（93.67 ± 3.75）%（F = 283.54,P < 0.05;与UVB-SIPS组比较,除UVB + 芒果苷1.0 mg/L组外,其他两组均P < 0.05）;G1期细胞阻滞率依次为（72.19 ± 3.42）%、（60.99 ± 2.70）%、（49.80 ± 2.10）%、（82.09 ± 0.89）%（F = 156.01,P < 0.05）。与UVB-SIPS组相比,UVB + 各浓度芒果苷组细胞MMP1和MMP3 mRNA表达降低（F = 69.41、106.41,均P < 0.05）,Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA表达增加（F = 66.41、46.81,除UVB + 芒果苷1.0 mg/L组P > 0.05外,其他各组均P < 0.05）,衰老相关基因p53、p21、p16 mRNA表达降低（F = 265.60、151.82、329.85,均P < 0.05）,衰老相关蛋白p53、p21和p16的合成减少（F = 160.51、158.53、75.38,均P < 0.05）,各指标检测值的变化与芒果苷浓度之间呈一定依赖性。 结论 芒果苷可能通过下调p53、p21、p16基因的表达来抑制UVB诱导的人二倍体成纤维细胞的早衰。     

沉默miRNA-23a对UVB诱导成纤维细胞慢性光损伤的影响

【摘要】 目的 探讨沉默miRNA-23a对UVB照射所致成纤维细胞慢性光损伤的影响。 方法 将成纤维细胞分为空白对照组、UVB光损伤组、miRNA-23a 沉默组、UVB光损伤 + miRNA-23a沉默组。SA-β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）化学染色测定老化程度,流式细胞仪检测细胞周期,实时PCR法检测p53、p16、p21 mRNA的表达,免疫印迹法检测p53、p16、p21的蛋白表达量。 结果 UVB光损伤组与UVB光损伤 + miRNA-23a沉默组的SA-β-Gal细胞蓝染阳性率分别为（94.60 ± 2.58）%、（48.18 ± 3.70）%,两组间差异有统计学意义（P < 0.05）。G1期阻滞率分别为（85.06 ± 1.52）%、（57.48 ± 2.01）%,两组间差异有统计学意义（P < 0.05）。UVB光损伤 + miRNA-23a沉默组的p53、p16、p21 mRNA及蛋白表达量与UVB光损伤组相比,差异均有统计学意义（P < 0.05）。 结论 沉默miRNA-23a对UVB诱导成纤维细胞衰老有抑制作用,而miRNA-23a对下游衰老相关信号分子的抑制可能是其机制之一。