卡介苗配用腺苷接种提高巨噬细胞抗结核杆菌效能的研究

目的　通过腺苷 (ADO)改善卡介苗 (BCG)初次免疫接种效果 ,提高巨噬细胞抗结核杆菌毒力株效能。方法　将BALB/C小鼠随机分BCG组、ADO组和对照组。对BCG、ADO两组分别一次性皮内注射卡介苗 0 1ml。对ADO组腹腔注射ADO 30mg/(kg·d) ,对BCG组、对照组腹腔注射生理盐水 0 1ml/d ,共 5d。 6周后 ,三组均经血管接种人型结核分枝杆菌标准毒力株 1× 10 6CFU ,BCG组、ADO组于结核杆菌感染后第 10、2 0天和 30天分批取材 ,对照组于第 30天取材。将肺、脾用多聚甲醛固定 ,石蜡包埋 ,HE染色与抗酸染色 ,进行原位细胞凋亡检测。结果　对照组结核杆菌感染后第30天 ,肺组织大部分实变 ,以中性粒细胞浸润为主 ,结核结节多 ,肺实变与肺泡隔重度增宽处弥漫分布大量菌体 ;BCG组于感染后第 10～ 30天肺泡隔增宽 ,逐渐加重至肺大部分实变 ,间质内以淋巴细胞浸润为主 ,结核结节较少 ,肺内大量菌体 ;而ADO组肺实变和肺泡隔重度增宽的面积较小 ,间质内以单核细胞浸润为主 ,结核结节很少 ,肺内菌体明显减少。结论　ADO促进BCG诱导的免疫记忆性反应中能引起单核 巨噬细胞的数量增多和杀菌能力的增强     

磁转联合脂质体实现高效细胞转染

目的优化体外培养细胞的外源基因转染方案。方法采用磁性微粒联合脂质体，将重组人绿色荧光蛋白表达载体（pAAV-IRES-GFP）外源DNA定向转染COS-7细胞，荧光显微镜下观察外源基因的表达，比较不同转染条件及DNA载量的细胞转染效果。结果DNA与Combimag按1：1的比例混合转染可以得到很高的转染效率，过高的DNA载量使转染效率减低。结论利用磁转结合脂质体可使低剂量的DNA达到快速、简便和高水平的转染。     

人乳头瘤病毒16 E6转染冻融人外周血树突状细胞疫苗体外抗宫颈癌作用

目的：制备来源于人外周血并转染人乳头瘤病毒（HPV）16 E6基因的冻融树突状细胞（DC）疫苗，检测其细胞形态。转染情况及体外诱导的免疫效应。方法：细胞因子扩增人外周血DC，低温-70℃冻存；Lipofectamine转染HPV16 E6制备DC疫苗。动态形态学观察，免疫细胞化学检测E6分子表达，体外诱导并测定细胞毒性T淋巴细胞活性。结果：转染E6基因的人外周血冻融DC呈形态迥异的多突起状，免疫细胞化学染色显示E6蛋白表达阳性；MTT法检测人宫颈癌细胞株（CaSKIi细胞）的杀伤活性明显高于对照组（P〈0．01），与新鲜DC疫苗比无统计学意义（P〉0．05）。结论：转染历基因的人外周血冻融DC疫苗保持了功能成熟DC的形态特征，且内源性表达E6蛋白，并在体外诱导出高效特异性的抗宫颈癌免疫反应，为宫颈癌的主动特异性免疫治疗提供了理想的疫苗和实验依据。     

Paeoniflorin ameliorates ischemic neuronal damage in vitro via adenosine A1 receptor-mediated transactivation of epidermal growth factor receptor

Aim:

Paeoniflorin from Chinese herb Paeoniae Radix has been shown to ameliorate middle cerebral artery occlusion-induced ischemia in rats. The aim of this study was to investigate the mechanisms underlying the neuroprotective action of PF in cultured rat cortical neurons.

Methods:

Primary cultured cortical neurons of rats were subjected to oxygen-glucose deprivation and reoxygenation (OGD/R) insult. Cell survival was determined using MTT assay. HEK293 cells stably transfected with A₁R (HEK293/A₁R) were used for detailed analysis. Phosphorylation of the signaling proteins was evaluated by Western blot or immunoprecipitation. Receptor interactions were identified using co-immunoprecipitation and immunofluorescence staining.

Results:

Paeoniflorin (10 nmol/L to 1 μmol/L) increased the survival of neurons subjected to OGD/R. Furthermore, paeoniflorin increased the phosphorylation of Akt and ERK1/2 in these neurons. These effects were blocked by PI3K inhibitor wortmannin or MEK inhibitor U0126. Paeoniflorin also increased the phosphorylation of Akt and ERK1/2 in HEK293/A₁R cells. Both A₁R antagonist DPCPX and EGFR inhibitor AG1478 not only blocked paeoniflorin-induced phosphorylation of ERK1/2 and Akt in HEK293/A₁R cells, but also paeoniflorin-increased survival of neurons subjected to OGD/R. In addition, paeoniflorin increased the phosphorylation of Src kinase and activation of MMP-2 in HEK293/A₁R cells. Both Src inhibitor PP2 and MMP-2/MMP-9 inhibitor BiPs not only blocked paeoniflorin-induced phosphorylation of ERK1/2 (and Akt) in HEK293/A₁R cells, but also paeoniflorin-increased survival of neurons subjected to OGD/R.

Conclusion:

Paeoniflorin promotes the survival of cultured cortical neurons by increasing Akt and ERK1/2 phosphorylation via A₁R-mediated transactivation of EGFR.     

血小板衍化生长因子B在糖尿病大鼠肾皮质中的表达

本研究以半定量RT-PCR法测定了糖尿病及对照Wistar大鼠肾皮质血小板衍化生长因子B(PDGFB)mRNA水平,发现糖尿病大鼠为对照组2.5倍,提示PDGFB在糖尿病肾病中起一定作用。     

镜像视觉反馈和肌电生物反馈对脑卒中偏瘫患者上肢功能的影响

目的研究镜像视觉反馈(MVF)、任务导向训练和肌电生物反馈(EMGBF)对脑卒中偏瘫患者上肢功能的恢复的作用。方法 90例脑卒中偏瘫患者采用随机数字表法分为对照组(n=30)、EMGBF组(n=30)和MVF组(n=30)。所有患者均接受常规康复治疗和任务导向性训练,EMGBF组在此基础上加EMGBF,MVF组在EMGBF组的基础上加MVF,共8周。治疗前后进行Fugl-Meyer运动功能评定(FMA)、Carroll手功能评定(UEFT),并测定偏瘫上肢相关肌电积分。结果治疗后,所有患者上肢FMA评分,UEFT评级和上肢肌肉肌电积分均较治疗前改善(P0.05)。组间比较,EMGBF组各项指标均优于对照组(P0.05),MVF组优于其他两组(P0.05)。结论镜像视觉反馈结合肌电生物反馈可以更有效地促进脑卒中偏瘫患者上肢功能的改善。     

热变性对血细胞流式细胞术分析结果的影响

目的 初步探讨热变性对外周血细胞在流式细胞术分析结果中的影响,从而提高流式-荧光原位杂交（Flow-FISH）技术的应用.方法 收集5例非骨髓造血干细胞疾病患者肝素抗凝外周血标本,以CD45-Alexa Fluor（R）647标记细胞表面抗原,高温变性后,采用流式细胞术分析热变性前后外周血有核细胞的散射光信号和荧光信号变化.结果 热变性后,外周血粒细胞的侧向散射光明显缩小;单核细胞不易通过散射光被区分和设门.所有细胞CD45表达强度均减弱,以淋巴细胞为著;通过侧向散射光和CD45设门虽能大致区分各群细胞,但不及未热变性细胞清晰.结论 热变性后,外周血细胞在流式细胞术中的散射光信号和荧光信号均发生了变化,按照常规FSC/SSC和CD45/SSC方法设门进行细胞亚群分析的结果不精确,利用系列特异性荧光抗体标记是一种有前景的方法.     

广州市一个社区高血压综合防治

目的探讨在多重心血管危险因子的中重度高血压病人中实施社区综合干预对心脑血管事件发生的影响.方法在广州荔湾区2个卫生服务站收治中重度高血压病人,分为治疗组(n=70)和对照组(各70人,常规治疗并无特殊方案),治疗组接受钙拮抗剂和利尿剂治疗,并接受健康教育等非药物治疗以及定期随访,对照组按高血压病系统管理,定期随访鼓励坚持服药等.结果治疗组患者基础收缩压(179.4±14.1)mm Hg,舒张压(101.3±8.1)mm Hg,总胆固醇(6.4±1.5)mmol/L,甘油三酯(1.7±1.1)mmol/L,血尿酸(438.0±110.3)μmol/L,血糖(6.2±1.3)mmol/L.治疗3年后收缩压(138.0±9.1)mm Hg,舒张压(78.8±5.5)mm Hg,总胆固醇(5.3±1.2)mmol/L,甘油三酯(1.6±0.9)mmol/L,血尿酸(342.9±94.9)μmol/L,血糖(5.2±1.3)mmol/L较治疗前有显著性下降(P<0.01),也较对照组有显著性下降(P<0.01),两组血压控制率分别为71%(治疗组),16%(对照组).治疗组有1例因心脑血管病入院及死亡(1.4%),对照组有12例因心脑血管病入院(17%),4例死亡(5.7%),治疗组明显减少心脑血管死亡及入院率(P<0.01).结论良好血压控制及健康教育可以显著减少心脑血管疾病的发生和死亡.饮食治疗是控制高血脂等心脑血管危险因子的基础,应该全面推行高血压社区综合防治,以控制迅速增加的高血压患病率以及心脑血管并发症.     

肿瘤细胞诱导T细胞下调表达腺苷脱氨酶

目的 蛋白质组学分析鉴定与肿瘤细胞共培养T细胞的表达差异蛋白.方法 双向电泳分离有/无肿瘤细胞共培养的T细胞蛋白,PDQuest软件分析筛选肿瘤细胞诱导表达异常的蛋白点,用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MAL-DI-TOF MS)对酶解消化样品进行肽质量指纹图谱(PMF)分析,结合数据库搜索鉴定蛋白质.结果 PDQuest分析有/无肿瘤细胞共培养的T细胞蛋白双向电泳图谱,70余个蛋白点表达水平差异显著,其中与肿瘤细胞共培养的T细胞有一明显表达下调的蛋白点,质谱分析结合数据库检索表明该蛋白点为腺苷脱氨酶.结论 肿瘤细胞诱导T细胞下调表达腺苷脱氨酶.     

沙眼衣原体相关抗体在筛查输卵管性不孕中的应用探讨

目的通过研究沙眼衣原体抗体IgG（CT-IgG）与衣原体热休克蛋白60-IgG抗体（chsp60-IgG）两种沙眼衣原体相关抗体与输卵管病变的关系,探讨更准确的输卵管性不孕不育的初筛指标。方法收集经腹腔镜确诊的输卵管性不孕不育症患者空腹血清标本55例,健康人空腹血清标本116例,采用酶联免疫吸附法和免疫比浊法分别对两组衣原体相关抗体CT-IgG与chsp60-IgG进行检测。计算CT-IgG和chsp60-IgG单个指标,两者联合共3种筛查方法的阳性预测价值、阴性预测价值、灵敏度、特异度,阳性似然比、阴性似然比和约登指数（Youden）等。结果两组沙眼衣原体抗体IgG检测阳性率分别为54．55％和7．76％,两组chsp60-IgG检测阳性率分别为40．00％和22．41％。两种衣原体抗体联合检测在两组人群中的阳性率分别为87．27％和24．1％。CT-IgG在两组中的OR值为14．3,CT-IgG和chsp60-IgG两者联合检测在两组中的OR值为21．6,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论CT-IgG和chsp60-IgG联合检测在预测输卵管性不孕中具有较高的筛查价值。