乙型肝炎病毒C抗原基因定域表达于细菌外膜及其对膜的效应

乙型肝炎的发病过程近年来认为是特异性抗体或淋巴细胞参与的针对肝细胞膜表面靶抗原的免疫攻击的结果。靶抗原是乙肝病毒C抗原(HBcAg),但分泌于胸膜的HBcAg对膜的结构与功能有何效应尚须研究。原核细胞的分泌蛋白是以与真核细胞相似的机理合成和分泌的。作者利用带有大肠杆菌外膜脂蛋白信     

乙型肝炎患者血中转化生长因子β1

目的分析急性乙型肝炎（ＡＨＢ）和慢性乙型肝炎（ＣＨＢ）患者血清中有生物活性的ＴＧＦβ１蛋白水平和ＨＢＸ蛋白阳性率．方法ＡＨＢ和ＣＨＢ患者各２４例，用Ｐｒｏｍｅｇａ免疫分析试剂盒检测血清中ＴＧＦβ１浓度，并用自产的抗ＨＢＸ单克隆抗体ＥＬＩＳＡ检测血清中ＨＢＸ蛋白的存在．结果ＡＨＢ组和ＣＨＢ组的ＴＧＦβ１水平（μｇ／Ｌ）分别为２３６±７７和１９７±８９，均明显高于对照组８０±３４，Ｐ＜００１），但两组之间区别不大．血清中ＨＢＸ阳性率ＡＨＢ组为２５０％，ＣＨＢ组达５００％，ＨＢＸ阳性的慢性肝炎患者１５例中有１０例（８３％）ＴＧＦβ１血清水平高于中位值．结论ＡＨＢ和ＣＨＢ患者血清中ＴＧＦβ１水平明显升高，ＣＨＢ组有半数患者血清呈ＨＢＸ蛋白阳性，而这些ＨＢＸ阳性患者中８３％显示有较高的ＴＧＦβ１血清水平     

大肠杆菌合成的HBcAg转化为HBeAg的研究及其应用

乙型肝炎e抗原(HBeAg)是乙型肝炎病毒(HBV)感染的血清学标志之一,同时又是乙型肝炎诊断上的一种重要的生物制剂。HBV感染之后,血清中最早出现的是乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和HBeAg。HBeAg的出现表明HBV仍进行活跃地复制,此时传染性最强。HBeAg一般在HBsAg消失之前消失,如果持续阳性达8至10周以上,说明已经转变成慢性肝病。HBeAg相应抗体抗-HBe的出现,表明病毒复制已经停止,传染     

乙型肝炎病毒X基因的表达产物对HLA-DR表达的效应

为了解ＨＢＶＸ基因表达产物对ＨＬＡ ＤＲ表达的效应 ,构建带Ｘ基因的重组表达载体 ,研究其在体外肝癌细胞中的表达及其对ＨＬＡ ＤＲ表达的影响。用野生型ＨＢＶＸ基因与真核载体质粒构建重组表达载体质粒 ｐＷＨＸⅡ转染ＨｅｐＧ2细胞。用ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈ ｅｒｎ印迹、ＥＬＩＳＡ及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹等分析鉴定目的基因ＤＮＡ片段与其在转染细胞中的表达产物ＨＢＶＸ蛋白。将带重组质粒 ｐＷＨＸⅡ的ＨｅｐＧ2细胞和带有ＨＢＶ全基因组的 2 .2 .15细胞 ,在相同条件下用间接免疫荧光分析和免疫酶细胞化学技术检测 ,均清晰地显示在肝细…     

慢性乙型肝炎和肝硬化中乙型肝炎病毒X抗原表达的分析

用基因工程技术由大肠杆菌合成重组乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｘ抗原（ＨＢｘＡｇ）并制备兔抗－ＨＢｘＩｇＧ以检测ＨＢｘＡｇ，合成一对以ＨＢＶＸ基因序列为模板的引物，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增ＨＢＶＤＮＡ。免疫组织化学和血清学方法分别用以分析肝病患者肝组织中的ＨＢｘＡｇ和血清标本中的ＨＢｘＡｇ、抗－ＨＢｘ。发现ＨＢｘＡｇ在慢性活动性肝炎（ＣＡＨ）患者肝组织中检出率为７２．７％，在肝炎后肝硬化（ＬＣ）中为９２．６％，而乙型肝炎核心抗原（ＨＢｃＡｇ）在ＬＣ中检出率为４７．８％。在ＣＡＨ、慢性迁延性肝炎和ＬＣ的血清中ＨＢｘＡｇ的阳性率分别为４４．４％、６６．６％和３３．３％，与ＨＢｅＡｇ的阳性率相似，而且在这些ＨＢｘＡｇ阳性的血清中可检出ＨＢＶＤＮＡ的存在，ＨＢｘＡｇ的表达与ＨＢＶ复制紧密相关，ＨＢｘＡｇ可能是一慢性ＨＢＶ感染的重要标志物。     

乙型肝炎病毒X基因的蛋白产物对HLA-DR表达的效应

目的 了解HBVX基因蛋白产物对HLA-DR表达的效应。方法 用野生型HBVX基因与真核载体质粒构建重组表达载体质粒pWHXⅡ转染HepG2细胞。用PCR、Southern印迹，ELISA及Western印迹等分析鉴定目的基因DNA片段与其在转染细胞中的表达产物HBVX蛋白，将带重组质粒pWHXⅡ的HepG2细胞的和带有HBV全基因组的2.2.15细胞，在相同条件下用间接免疫荧光分析和免疫酶细胞化学技术检测。结果 在转染的HepG2细胞和2.2.15细胞表面均清晰地显示有HLA-DR表达，而对照组即不带质粒或只带载体质粒的HepG2细胞则用同法不能在其表面检出HLA-DR的存在。结论 证明HBVX蛋白能在无炎症和外界因素存在下，单独诱导HLA-DR的表达，提示HBVX蛋白有参与乙肝免疫反应机制的可能性。     

原发性肝癌患者外周血中甲胎蛋白mRNA的意义

目的由于ＰＣＲ技术的应用,血循环中癌细胞的检测近有很大进展．本文用ＲＴＰＣＲ检测肝癌（ＨＣＣ）和其他慢性肝病患者外周血中ＡＦＰｍＲＮＡ,藉以反映ＨＣＣ细胞的存在,并与其他血清标记物比较．方法ＨＣＣ患者２２例,肝硬变和慢性乙型肝炎患者各１０例,健康成人受试者（对照）５例．取患者和对照的外周血,分离单核细胞,提取总ＲＮＡ并作电泳鉴定,用合成的两对引物进行巢式ＲＴＰＣＲ扩增ＡＦＰｍＲＮＡ,同时分析血清ＡＦＰ和乙肝标记物．结果ＡＦＰｍＲＮＡ在１３例ＨＣＣ（５９１％）,２例肝硬变（２００％）患者外周血中测到,其余标本均为阴性．ＡＦＰｍＲＮＡ阳性的１３例患者肿瘤均大于５ｃｍ,为晚期患者．在该１３例患者中仅有６例（４６１％）在血清中测到ＡＦＰ,但有１２例（９２３％）ＨＢｓＡｇ,抗ＨＢｅ,抗ＨＢｃ全阳性,而ＡＦＰｍＲＮＡ阴性的５例该３标记物全阴性．结论ＲＴＰＣＲ扩增ＡＦＰｍＲＮＡ是检测ＨＣＣ和肝硬变患者循环肝癌细胞的敏感方法．患者外周血中的ＡＦＰｍＲＮＡ有可能作为肿瘤转移和复发的标记对ＨＣＣ诊断、随访观察和疗效评定有较大临床意义．     

转化生长因子-β1在肝细胞性肝癌中表达增强

目的转化生长因子－β１（ＴＧＦβ１）在细胞生长的负性调节上有重要作用,是肝细胞生长和增殖的强抑制物但肝癌（ＨＣＣ）患者肝组织中ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达高．现检测ＨＣＣ患者外周血中ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达,血清ＴＧＦβ１水平,以及肝组织中ＴＧＦβⅡ型受体（ＴＧＦβＲⅡ）的表达．方法ＨＣＣ患者外周血分离单个核细胞（ＰＢＭＣ）,提取总ＲＮＡ,用反转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）技术扩增ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ．血清ＴＧＦβ１水平测定用Ｐｒｏｍｅｇａ公司产的试剂盒．肝组织ＴＧＦβＲⅡ表达的分析用原位杂交法．结果ＨＣＣ患者２０例ＰＢＭＣＴＧＦβ１ｍＲＮＡ用ＲＴＰＣＲ检测阳性率达７０％,对照组阴性．ＨＣＣ患者４０例血清ＴＧＦβ１水平（２７５８ｍｇ／Ｌ±８１０ｍｇ／Ｌ）明显高于对照组（８２７ｍｇ／Ｌ±３７２ｍｇ／Ｌ）．原位杂交表明,ＴＧＦβＲⅡ在ＨＣＣ细胞的胞质中有弱表达．结论ＨＣＣ患者ＴＧＦβ１基因在转录水平和翻译水平上均显示表达增强．ＰＢＭＣ有可能代替肝组织用以检测ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ的表达应用于基础与临床的研究．     

肝细胞癌患者外周血AFP-mRNA的临床价值

目的 寻求早期诊断肝细胞癌微量转移的方法。方法 建立巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,对44例原发性肝细胞癌(PHCC)患者外周血单个核细胞(PBMC)中甲胎蛋白信息核糖核酸(AFP-mRNA)进行了检测,并与慢性肝病患者和正常人进行对照。结果 44例PHCC中有27例检出AFP-mRAN,阳性率61．4％;10例肝硬化中2例阳性,占20％;肝炎及正常对照组均为阴性。结论 采用巢式RT-PCR法检测PHCC患者PBMC中AFP-mRNA是早期发现肝细胞癌微量转移的重要方法。