胰岛素自身抗体电化学发光法的建立与应用

目的 在国内建立胰岛素自身抗体(IAA)的电化学发光检测法,并初步评价其应用价值。方法 胰岛素原采用磺基吡啶钌衍生物(Sulfo-tag)和生物素标记后,与血清IAA孵育结合。Meso Scale Discovery(MSD)链霉亲和素电化学发光平板捕获标记的抗原抗体复合物后,采用MSD电化学发光仪进行检测,以IAA指数≥0.005作为阳性阈值。通过优化检测条件后,采用微量平板放射免疫法比较两种方法的相关性和一致性。选取2016至2018年于中南大学湘雅二医院代谢内分泌科门诊或住院的新诊断1型糖尿病(T1DM)患者(55例)及其一级亲属(216名),以及健康志愿者(健康对照组,413名)为研究对象,检测其血清样本,初步评价电化学发光法检测IAA的临床应用价值。结果 优化条件包括：(1)生物素标记的胰岛素原和磺基吡啶钌衍生物标记的胰岛素原的最适浓度均为800 ng/ml;(2)酸化血清的方式为水浴30℃静置孵育45 min;(3)在反应体系中先加入35 μl稀释后的抗原,再加入15 μl Tris-HCl缓冲液,然后与酸化血清混匀孵育过夜能获得更高的信噪比(S/N)。电化学发光法间隔3个...     

双能X线骨密度仪测量双侧前臂骨面积、骨矿含量和骨矿密度的比较

目的比较健康人优势和非优势前臂的骨面积（Ａｒｅａ）、骨矿含量（ＢＭＣ）和骨矿密度（ＢＭＤ）。方法采用双能Ｘ线骨密度仪测量５５例１６～７３岁（平均年龄５２岁）健康志愿者双侧前臂（优势臂均为右臂）的Ａｒｅａ、ＢＭＣ和ＢＭＤ。结果右前臂各部位Ａｒｅａ、ＢＭＣ显著高于左前臂（Ｐ＜０．００１和Ｐ＜０．０５）,除桡骨远端１／３段ＥＭＤ右前臂显著高于左前臂外（Ｐ＜０．０１）,其余部位ＢＭＤ左右侧无差别。结论优势臂的Ａｒｅａ和ＢＭＣ均高于非优势臂,而ＢＭＤ两者差别不大。     

基于弥散张量成像的脑结构网络增龄性变化研究

目的基于弥散张量成像及纤维束追踪技术构建大脑结构网络,研究大脑结构网络增龄性变化。方法分别构建30例青年人和30例老年人的脑结构网络。运用图论分析方法,计算脑结构网络的全局以及局部网络拓扑参数,定量分析年龄对大脑网络全局特性及局部特性变化的影响。结果研究显示人脑结构网络具有小世界属性,脑网络全局特征参数与年龄具有强相关性(P<0.05),平均节点度、局部效率以及全局效率随年龄增长呈明显下降趋势,而平均聚类系数和平均最短路径长度呈上升趋势。脑网络局部特性与大脑全局特性的变化具有一致性,其中右侧楔前叶、左侧颞中回、双侧前扣带和旁扣带脑回、双侧内侧和旁扣带脑回、左侧梭状回、左侧舌回、左侧距状裂等脑区存在显著老化现象。结论大脑网络信息传输效率随年龄的增长而降低,整体机能随年龄增长呈下降趋势,但在局部脑区有着不同的老化机制。     

两种分泌型人谷氨酸脱羧酶65片段DNA疫苗的构建与鉴定

目的:构建和鉴定分泌型人谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decarboxylase,GAD)65片段DNA疫苗.方法:从人GAD65质粒中扩增出GAD190-315和GAD490-570两个片段的cDNA,分别与hIL-2信号肽cDNA基因拼接,将拼接后的片段克隆入pBudCE4.1真核表达载体,测序鉴定,并用Western印迹检测融合基因的表达.结果:核酸序列测定表明克隆的融合基因序列与报告序列一致,开放阅读框正确,Western印迹检测显示这两种人GAD65片段分泌表达.结论:两种分泌型人GAD65片段DNA疫苗均成功构建,为1型糖尿病的预防提供了实验基础.     

不同胰岛自身抗体阳性1型糖尿病临床特征分析

目的探讨单独或合并锌转运体8自身抗体(ZnT8A)、谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)及蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A)阳性患者的1型糖尿病(T1DM)患者临床特征。方法采用放射配体检测法检测中南大学湘雅二医院1999—2009年收治的539例T1DM患者的ZnT8A、GADA及IA-2A,并将其分成三个亚组进行比较。结果(1)单一ZnT8A阳性组较抗体阴性组病程更长,胰岛素用量更大,收缩压更低,合并代谢综合征比例更少。单一ZnT8A阳性组较单一GADA阳性组BMI、WHR及空腹C肽值更高(P<0.05),而糖化血红蛋白水平更低(P<0.05);(2)多个抗体阳性组起病年龄显著低于抗体阴性组(P<0.05);1个抗体阳性患者的空腹C肽及餐后2 h C肽显著低于抗体阴性组(P<0.05);3个抗体阳性患者较1个抗体阳性患者的起病年龄更小(P<0.01),BMI更低(P<0.05),病程更短(P<0.05)。(3)合并任意两种抗体阳性中"GADA阳性与IA-2A阳性"组餐后C肽最低(P<0.01),空腹C肽也较低,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论单独或合并ZnT8A,GADA及IA-2A的T1DM临床特征分析对临床具有重要的指导意义。     

羧基肽酶-H抗体与LADA患者胰岛β细胞功能关系的横断面研究

目的：探讨羧基肽酶-H自身抗体（CPH—Ab）与成人隐匿性自身免疫性糖尿病（LADA）患者胰岛β细胞功能的关系,以进一步明确其对LADA的诊断价值。方法：选择临床初诊2型糖尿病（T2DM）患者545例,采用放射配体法检测血清CPH—Ab和谷氨酸脱羧酶抗体（GAD-Ab）滴度,以筛出的CPH-Ab阳性患者为病例组,以GAD—Ab阳性患者和抗体阴性的T2DM患者为对照组,比较3组研究对象的胰岛β细胞功能（以空腹和餐后2hC肽值表示）,分析CPH-Ab与成人隐匿性自身免疫性糖尿病（LADA）患者胰岛β细胞功能的关系。结果：CPH—Ab阳性患者的空腹C肽介于GAD-Ab阳性与两种抗体（GAD-Ab和CPH—Ab）均阴性的T2DM患者之间（P〈0.05）,以病程分层后三者的C肽值仍具有统计学意义（均P〈0．05）,而以BMI分层无明显差异（均P〉0．05）。经以年龄、起病年龄、病程、性别等为协变量校正后,3组间的空腹C肽和餐后2hC肽值仍存在显著性差异（均P〈0,001）,其中CPH—Ab^＋组仅空腹C肽低于Ab—T2DM组（P〈0,05）,而GAD—Ab^＋组空腹和餐后2hC肽均低于Ab^-T2DM组（P〈0．05和P〈0．01）。胰岛素缺乏患者在CPH-Ab^＋组、GAD-Ab^＋组和Ab—T2DM组的比例分别为27．6％（8／29）,48．1％（8／52）和13．5％（54／400）,三者间差异有统计学意义（P〈0.001）。多元线性逐步回归分析提示,GAD-Ab,BMI和空腹血糖对T2DM患者的空腹C肽和餐后2hC肽均有影响（均P〈0．05）,而CPH-Ab与二者均无统计学相关（均P〉0．05）。结论：CPH抗体对LADA患者胰岛β细胞功能的影响不如GAD-Ab显著,CPH-Ab对LADA患者胰岛功能衰减的作用需前瞻性研究。     

蛋白酪氨酸磷酸酶抗体对成人隐匿性自身免疫性糖尿病的诊断价值

目的探讨蛋白酪氨酸磷酸酶抗体（IA-2A）对成人隐匿性自身免疫性糖尿病（LADA）的诊断价值。方法采用放射配体法检测2027例初诊2型糖尿病（T2DM）患者的IA．2A和谷氨酸脱羧酶抗体（GAD-Ab）,分析IA-2A在初诊T2DM患者中的分布及其与临床特征的关系。结果初诊T2DM患者中IA-2A阳性检出率低于GAD-Ab阳性检出率（2．2％7）S10．6％,P〈0．01）。联合GAD-Ab和IA-2A检测,可使LADA阳性检出率达11．5％。IAm2A在低体重、低c肽水平患者中阳性检出率高;随着起病年龄增大,IA-2A阳性检出率下降（P〈0．05）。与T2DM组比较,单独IA-2A阳性患者使用胰岛素治疗的比例高（P〈0．05）。高滴度IA-2A阳性LADA患者具有起病年龄小（P〈0．01）、体重轻、高血压比例低、空腹C肽低、合并GAD-Ab阳性和使用胰岛素比例高（P〈0．05）等特点。结论IA-2A检测对LA—DA具有辅助诊断价值,与GAnAb联合检测可提高LADA诊断的敏感性。     

谷氨酸脱羧酶抗体和蛋白酪氨酸磷酸酶抗体检测的标准化研究

目的研究谷氨酸脱羧酶抗体(GAD—Ab)和蛋白酪氨酸磷酸酶-2抗体(IA-2A)检测的标准化，为合理选择检测方法及准确判定结果提供依据。方法应用国际糖尿病免疫学会(IDS)推荐的WHO单位制，采用放射配体法检测125名健康人的GAD—Ab和IA-2A以确定阳性判断标准，通过检测IDS第3次糖尿病自身抗体标准化检测方法评估(DASP 2003)工作组提供的100名健康对照及50例新发1型糖尿病患者血清，验证其灵敏度与特异性。并采用新一代的ELISA试剂盒检测41例已知抗体滴度的标本，对比ELISA与标化后放射配体法的一致性。结果GAD—Ab的阳性阈值为18．5U／ml，IA-2A为2．7U／ml。DASP 2003反馈结果显示，本室GAD—Ab检测的灵敏度82％，特异性98％；IA-2A检测的灵敏度64％，特异性100％；受试者工作特征(ROC)曲线分析显示，本室GAD-Ab曲线下面积(AUC)以及统一按95％特异性标化后的灵敏度(AS95)分别为0．946％及86％，IA-2A分别为0．824％及68％。在52个回报结果的实验室中综合排名第15位。ELISA试剂盒与标化后的放射配体法检测GAD—Ab的一致率82．9％，Kappa值0．656；检测IA-2A的一致率75．6％，Kappa值0．514；结果判定不一致者多集中在阳性边缘水平的标本中。结论经标准化后的GAD—Ab和IA-2A放射配体法灵敏度和特异性明显提高；新一代ELISA试剂盒检测GAD—Ab和IA-2A可应用于临床，但对于检测结果阴性而临床可疑者，建议采用放射配体检测法核实。     

大鼠骨量与骨生物力学特性之间的相关性

目的　观察骨质疏松模型大鼠骨量与骨强度之间的关系。方法　采用扇形束双能 Ｘ 线吸收法（ Ｄ Ｘ Ａ）测量５０只 Ｓ Ｄ 大鼠全身、股骨和腰椎（ Ｌ４ Ｌ６）骨量（骨矿含量和密度）。采用三点弯曲试验测量股骨抗弯和压缩试验测量椎体（ Ｌ４）抗压力学特性。结果　鼠体重和鼠全身骨量及股骨骨量与股骨抗弯系数、弹性弯距和最大弯距呈显著正相关（ｒ＝ ０５５２～０８２６, Ｐ＜ ０００１）;鼠体重与股骨的弹性应力（ｒ＝－ ０３６０, Ｐ＜ ００５）和抗弯强度（ｒ＝ － ０３３８, Ｐ＜ ００５）呈显著负相关;腰椎骨矿密度与椎体弹性载（ｒ＝０３２５, Ｐ＜ ００５）和最大载（ｒ＝ ０３４０, Ｐ＜ ００５）呈显著正相关,与弹性应力、抗压强度和弹性模量相关无显著性（ｒ＝ ０１５３～０２７５, Ｐ＞ ００５）。结论　大鼠股骨和全身骨量与抗弯系数、弹性弯距和最大弯距显示高度相关性