维生素逆转胃癌的癌前病变——初期临床干预试验

为探索逆转胃癌的癌前病变以预防其发病,本文观察叶酸加维生素B_(12)、合成β-胡萝卜素及天然β-胡萝卜素对56例中重度萎缩性胃炎牯膜病理和DNA甲基化水平的作用。结果:①叶酸加维生素B_(12)对胃牯膜萎缩和肠化的逆转率达77.7％,高于文献统计:②天然β-胡萝卜素显著逆转不典型增生(P=0.04),推测与其所含异构体有关;③血浆叶酸、隐黄素、α-胡萝卜素水平与胃癌癌前病变呈显著负相关:④α-胡萝卜素可使胃粘膜DNA甲基化水平显著提高(P<0.01～0.0001)。本文提示某些维生素可能通过提高胃粘膜细胞DNA甲基化水平,调节某些基因的活性,因而具有逆转胃癌癌前病变的作用。     

Hemo-Quant试验——一种新的特异灵敏的粪便隐血定量法

本文介绍粪便隐血灵敏和特异的荧光测定法,应用热草酸试剂使无荧光的血红素转变为有荧光的原卟啉等,通过三步抽提,去除粪中主要干扰物粪卟啉及叶绿素,进行荧光测定。     

重组IL-2痘苗病毒表达载体pMJ601的构建与鉴定

ＩＬ 2的全身大剂量用药虽能产生有效的抗肿瘤作用但毒性反应严重而限制了它的临床应用[1,2 ] 。随着基因治疗技术的发展 ,肿瘤的基因治疗尤其是免疫基因治疗已成为引人注目的领域 ,被认为是肿瘤生物治疗较有潜力的策略之一。基因治疗的方法使肿瘤局部释放ＩＬ 2 [1～ 3] 可避免上述危及生命的并发症。近年来 ,众多研究已用ｅｘｖｉｖｏ和 /或ｉｎｖｉｖｏ法ＩＬ 2基因治疗消化道肿瘤如结肠癌[1,4 ] 、肝细胞癌[2 ] 和胰腺癌[3] 。要使肿瘤细胞局部分泌高浓度的ＩＬ 2 ,需构建高效表达ＩＬ 2基因的载体系统。为此 ,我们构建重组ｈＩＬ 2基因…     

痘苗病毒真核表达载体pMJ601的转化与鉴定

目的 对痘苗病毒表达载体ｐＭＪ６０１进行转化与鉴定,为进一步实施痘苗病毒为载体的基因治疗作必要的准备。方法 利用感受态细胞的制备及转化、质粒抽提、琼脂糖凝胶电泳、限制性内切酶酶切等多种基因工程技术对质粒ｐＭＪ６０１进行转化及鉴定。结果 琼脂糖凝胶电泳清楚地显示了ｐＭＪ６０１质粒３条带和Ｂａｍ ＨＩ或Ｈｉｎｄ Ⅲ酶切后的线性条带。结论 痘苗病毒表达ｐＭＪ６０１的转化与鉴定,为痘苗病毒载体系统的基因治     

重组人白介素-2痘苗病毒对MKN45胃癌细胞感染性及白介素-2蛋白表达

目的　体外研究表达人白介素 2 (hIL 2 )的重组痘苗病毒 (vacciniavirus ,VV)对MKN45胃癌细胞的作用。方法　应用分子病毒学同源重组技术构建能表达hIL 2的重组VV(VMJ6 0 1hIL 2 )。用DNA杂交技术鉴定VMJ6 0 1hIL 2 ,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)检测VMJ6 0 1hIL 2基因产物。用VMJ6 0 1hIL 2体外感染MKN45胃癌细胞株 ,探讨其对体外胃癌细胞的作用。结果　VMJ6 0 1hIL 2对体外MKN45胃癌细胞株有较强的感染性 ,VMJ6 0 1hIL 2感染的MKN45胃癌细胞能分泌具有生物活性的hIL 2蛋白。结论　VMJ6 0 1hIL 2的构建与鉴定 ,进一步为胃癌的免疫基因治疗打下了坚实的基础。     

重组单纯疱疹病毒-胸苷激酶和人白介素-2基因痘苗病毒真核表达载体的构建

目的 松建含单纯疱疹病毒-胸苷激酶（HSV-tk）和人白介素-2（hIL-2）基因的痘苗病毒真核表达载体pMJ601,为进一步实施胃癌的基因治疗作必要的准备。方法 利用目的的基因与载体的连接、感受态细胞的制备及转化、质粒抽提、琼脂糖凝胶电泳、酶切、DNA序列分析等多种基因工程技术,将纯化回收的HSV-tk和hIL-2分别与pMJ601进行连接、转化并鉴定。结果 分别用BamH I-HindⅢ和Sal I-BamH I酶切位点,将HSV-tk与hIL-2DNA成功地克隆到pMJ601真核表达载体。结论 重组HSV-tk hIL-2基因PMJ601的构建,为进一步研究胃癌的基因治疗打下坚实的基础。     

慢性HCV感染与机体细胞免疫功能关系的探讨

目的:探讨慢性丙型肝炎病毒感染患者HCV RNA增殖状态与T细胞亚群功能及血浆中IL-2和SIL-2R活性的关系。方法:以间接免疫荧光法、ELISA法和RT-PCR分别检测75例慢性HCV感染患者(其中HCV RNA阳性47例,HCV RNA阴性28例)外周血T细胞亚群、IL-2、sIL-2R的水平和HCV RNA。结果:慢性HCV感染患者周围血CD_3~ 、CD_4~ 淋巴细胞亚群,CD_4~ /CD_3~ 比值及IL-2水平均显著低于正常对照组(P<0.01),而sIL-2R明显升高(P<0.01);血清HCV RNA阳性患者T细胞亚群,CD_4~ /CD_3~ 比值及IL-2水平显著低于HCV RNA阴性患者(P<0.01)。结论:慢性HCV感染患者存在机体细胞免疫功能低下,HCV RNA阳性患者较阴性患者更甚,提示细胞免疫功能受抑可能是HCV持续增殖的原因。     

粪便肿瘤型M2丙酮酸激酶在胃肠道肿瘤检测中的意义

肿瘤型M2丙酮酸激酶（M2-PK）是近年发现的一种新型肿瘤标志物。目的：评价粪便肿瘤型M2-PK在胃肠道肿瘤和癌前状态的检测以及肿瘤分期中的意义。方法：以酶联免疫吸附测定（ELISA）检测34例胃癌、31例结直肠癌、19例胃肠道息肉、26例慢性萎缩性胃炎和19例对照者的粪便肿瘤型M2-PK值，胃癌和结直肠癌患者同时行传统外周血肿瘤标志物癌胚抗原（CEA）、糖链抗原（CA）19-9和CA24-2水平检测。结果：胃癌组和结直肠癌组的粪便肿瘤型M2-PK检测值和阳性率均较对照组显著增高（P〈0．01），胃肠道息肉组的检测值亦较对照组显著增高（P〈0．05）。随着肿瘤临床病理分期的进展和转移的发生，粪便肿瘤型M2-PK检测值逐渐增高（胃癌组：P〈0．05；结直肠癌组：P〈0．01）。胃癌组和结直肠癌组粪便肿瘤型M2-PK检测的阳性率均显著高于血清CEA、CA19．9和CA24．2（P〈0．01）。结论：粪便肿瘤型M2-PK对胃肠道肿瘤和癌前状态之一的胃肠道息肉的诊断有一定临床意义。     

人胃癌组织DNA甲基化酶、去甲基化酶与肿瘤相关基因的表达

目的 探讨胃癌组织中甲基化酶、去甲基化酶基因与肿瘤相关癌基因和抑癌基因的关系。方法 取28例胃癌手术标本的癌区、癌旁、正常组织，分别以RT—PCR法和定量RT—PCR法检测DNA甲基化酶1(DNMT1)、去甲基化酶mbd2、甲基化结合蛋白MeDP2和p16^INK4A、c—myc等基因的转录水平，以相关分析等统计学处理研究各基因表达之间及分别与病理组织学之间的关系。结果 癌组织平均DNMT1和mbd2 mRNA分别明显高于和低于正常组织。胃癌组织中c—myc的表达增强，而MeCP2和p16^INK4A无明显变化。在正常组织中，MeCP2与mbd2，p16^INK4A与MeCP2、mbd2，c—myc与MeCP2的转录水平表现出一定的相关性，而当肿瘤发生后仅发现c—myc与mbd2的表达呈负相关。以上各基因与肿瘤生物学行为均无相关性。结论 肿瘤相关基因mRNA的表达与甲基化酶DNMT1无关，而与甲基结合蛋白有关。     

表达HSV-TK痘苗病毒真核表达载体pMJ601的构建与鉴定

目的：构建含自杀基因（HSV－TK）的痘苗病毒真核表达载体pMJ601，为进一步实施胃癌的基因治疗作必要准备。方法：利用目的基因与载体的连接，感受态细胞的制备及转化、质粒抽提、琼脂糖 凝胶电泳、酶切等多种基因工程技术将胶纯化回收的HSV－TK与p MJ601进行连接、转化及鉴定。结果：克隆在X－pPNT质粒上的HSV－TK DNA成功地被克隆到经BamH I-HindⅡ双酶切的pMJ601载体上。结论：重组HSV－TK痘苗病毒真核表达载体pMJ601的构建，为胃癌自杀基因的基因治疗打下坚实的基础。