有机结合 共同发展——从血清脂蛋白谱研究谈中西医结合体会

在整体观和平衡观的基础上 ,创立双梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳法 ,应用于同步分离血清脂蛋白及其亚组分 ,检测血清脂蛋白谱 (SLPG) ,以及“内脾虚”的基础和临床研究 ,并逐步建立了新的理论体系。SLPG较理想地表达了血清脂蛋白动态平衡的状态 ,是中西医结合认识血脂代谢和“脾气散精”功能的新指标。实践提示 ,有机结合和共同发展应是现代中西医结合研究面临的主要任务之一。     

血清脂蛋白谱的检测

在整体观和平衡观的基础上 ,创立双梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳法 ,应用于同步分离血清脂蛋白及其亚组分和检测血清脂蛋白谱 (SLPG)。SLPG较理想地表达了血清脂蛋白动态平衡的状态 ,是中西医结合认识血脂代谢的新指标。     

补肾益气方对流产大鼠胎盘孕酮生成通路的影响

目的:探讨补肾益气方对流产大鼠胎盘孕酮生成通路中相关重要上游因素低密度脂蛋白受体(LDLR)、细胞色素P450链裂解酶(P450scc)、3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)的影响及其与孕酮(P)分泌的关系。方法:溴隐亭皮内注射法建立流产大鼠模型,分别于孕1-8 d、1-11 d灌服补肾益气方药,黄体酮肌注作为阳性对照组,采用放免法测定大鼠血清P水平;RT-PCR技术检测LDLR、P450scc、3β-HSD在不同组动物胎盘中的mRNA表达。结果:模型组LDLR、P450scc、3β-HSD mRNA表达较正常对照组明显降低;中药组及黄体酮组不同程度提高模型大鼠胎盘LDLR、P450scc、3β-HSD mRNA表达,表达强度随孕天和给药时间逐渐升高,与血P有显著相关性。结论:补肾益气方清热益气、固肾安胎,能调控胎盘滋养细胞LDLR、P450scc、3β-HSD基因表达,促进孕激素合成分泌增加,从而达到保胎维持妊娠的目的。     

人单核源性泡沫细胞疾病模型的建立

目的建立人单核源性泡沫细胞的疾病模型,为动脉粥样硬化（AS）的发生发展机制及其防治研究提供新途径。方法采用密度梯度离心法分离冠心病患者外周血单核细胞,以80nmol/L佛波酯（PMA）诱导48h使之转化为巨噬细胞,然后与80mg/L氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）共孵育48h,使之转化为泡沫细胞。结果经PMA诱导后,光镜下观察发现单核细胞已转化为形态典型的巨噬细胞。与ox-LDL共孵育48h后,油红O染色和透射电镜观察发现细胞内出现了大量的红染颗粒或脂质空泡。高效液相色谱检测发现细胞内胆固醇（TC）明显增加,其中胆固醇酯（CE）含量大于TC的60%,符合泡沫细胞的定义。结论从离体细胞培养方面探寻并建立了人单核源性泡沫细胞的疾病模型,该模型的病生特性与人类AS疾病接近,具有制备方法简易、细胞材料来源广等优点。     

一种检测血清β脂蛋白谱的新方法

目的建立一种分离血清β脂蛋白(βLp)亚组分的新方法———二阶双梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳(s-DGPAGE)法。方法在不同浓度梯度凝胶中匹配一定的pH梯度,借助浓度梯度的分子筛作用和pH梯度的聚焦作用,促进βLp亚组分分离,通过凝胶成像系统和光密度扫描仪完成βLp谱的记录和量化分析。血清βLp的分离采用一阶DGPAGE。结果s-DGPAGE法能将血清βLp分离出4种亚组分,分别命名为βLp1、βLp2、βLp3和βLp4,并可量化出各亚组分在βLp和血清脂蛋白整体中的相对含量。结论s-DGPAGE法能检出血清βLp的不均一组成,反映机体血清βLp的动态平衡状态,是一种简便实用的新方法。     

体外氧化修饰高密度脂蛋白对人单核细胞源性泡沫细胞内胆固醇流出的影响

目的探讨体外氧化修饰后的高密度脂蛋白（ox-HDL）对人外周血单核细胞源性泡沫细胞内胆固醇流出的影响。方法采用一次性密度梯度超速离心法从血浆中分离低密度脂蛋白（LDL）及高密度脂蛋白（HDL）,分别以Cu2+诱导法将其氧化修饰成ox-LDL及ox-HDL。采用密度梯度离心法和塑料吸附法从人外周血中分离出单核细胞,以50nmol/L佛波酯（PMA）刺激48h使之转化为巨噬细胞。细胞分为对照组（ox-LDL组）、阳性对照组（HDL组）及实验组（ox-HDL组）,对照组仅加入终浓度为80mg/L的ox-LDL;HDL组和ox-HDL组分别先加入终浓度均为50mg/L的HDL和ox-HDL共孵育1h后,再分别加入终浓度为80mg/L的ox-LDL,并于实验的0、6、12及24h测定细胞内总胆固醇（TC）、游离胆固醇（FC）及蛋白（Pro）含量。观察不同时间点各组细胞内TC/Pro比值的变化,并比较ox-HDL与HDL对细胞内TC/Pro比值影响的时效关系。结果成功地由体外氧化修饰了LDL及HDL并制备出理想的泡沫细胞模型。在实验的6、12及24h,ox-HDL组细胞内TC/Pro比值均较HDL组细胞高,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论体外氧化修饰后的HDL导致其胆固醇逆向转运（RCT）功能与效率的降低。     

血清LDL-C直接法测定值与间接换算值的偏差

目的 观察直接法测定血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量与其间接换算值的偏差.方法 血脂测定方法按照标准化的要求进行.LDL-C用直接法测定和根据Friedewald公式换算,收集586例被检者血脂水平.结果 在三酰甘油(TG)低于400 mg/dl (4.52 mmo/L)的血样中,直接法测定LDL-C的水平基本高于其间接换算值,偏差的范围为-59 mg/dl(-0.67 mmol/L) ～ 48 mg/dl (0.54 mmol/L),差值的均值为 15.47 mg/dl (0.17 mmol/L)(P＜0.001).结论 LDL-C含量直接测定与间接换算存在偏差,检测LDL-C含量需注意方法的偏差,建议采用统一的方法.     

血清脂蛋白谱的应用

血清脂蛋白谱 (SLPG)较理想地表达了血清脂蛋白动态平衡 (SLDB)的状态。 10余年的中西医结合研究资料表明 ,SLPG具有非常重要的意义 ,值得推广应用。     

直接法和公式法检测血清LDL-C含量的偏差和分析

目的:观察和分析直接法测定血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量与Friedewald公式换算值之间的关系。方法:采集1330例送检者的血脂水平,其血清三酰甘油均低于400mg.dL-1(4.52mmol·L-1)。测定LDL-C采用选择性水解法和根据Friedewald公式换算。结果:两种方法检测LDL-C值随非高密度脂蛋白胆固醇(non-HDL-C)水平的线性变化而波动,其偏差超过直接法检测值10%以上的占所有血样的40.76%。结论:直接法和Friedewald公式法检测血清LDL-C含量存在明显的偏差,可能与两种方法的系统误差有关。     

豚鼠左心室不同区域细胞Iks电流对缺血反应的差异

目的：研究缺血时豚鼠左心室心内、外膜细胞及M细胞缓慢激活延迟整流钾通道电流（Iks)的变化特性。方法：利用全细胞膜片钳技术观察豚 鼠左心室心内、外膜细胞及M细胞Iks变化，利用不同成分浴槽液模拟细胞正常及缺血环境，观察Iks尾电流锋值的变化情况。结果：缺血时，三层细胞Iks均小于正常状态；指令电压小于0mV时，三层细胞Iks同步减小，减少率无显性差异，P＞0．05。指令电压≥0mV时，M细胞Iks减少程度明显高于心内、外膜细胞，P＜0．05；而心内、外膜细胞减少率无显性差异，P＞0．05。结论：缺血时左心室心内、外膜细胞及M细胞Iks减弱，而M细胞Iks减弱更为明显，这可能会增加心室壁电活动不均一性，诱发心律失常。