胆源性胰腺炎与胆道感染的关系

目的　研究胆石性胰腺炎病人胆道感染情况。方法　观察 4 9例病人临床、生化指标和胆汁细菌学检查。结果　年龄、血糖和ALT 3项指标在胆汁细菌培养阴性组和阳性组中结果明显不同 (P <0 .0 5 )。 2 2例阳性胆汁有 32种细菌 ,包括 1 2种革兰氏阳性细菌、1 8种革兰氏阴性细菌和 2种厌氧菌。最常见的微生物是埃希氏大肠杆菌 (2 5 % ) ,其次是肠球菌 (2 1 .9% )和链球菌 (1 2 .5 % )。结论　急性胆石性胰腺炎与胆汁感染有关 ,应该早期应用抗革兰氏阴性杆菌和革兰氏阳性球菌抗生素     

胚胎干细胞源性肝干细胞在治疗性肝再生中的应用

目的： 应用治疗性肝再生模型进行胚胎干细胞(ESC)源性肝干细胞肝内移植, 观察其在肝组织替代、体内的生长分化及成瘤性等情况，为ESC移植在难治性肝病治疗中的临床应用提供实验依据。方法： 倒千里光碱+70%肝部分切除建立BALB/c小鼠的治疗性肝再生模型。用荧光示踪剂CFDA SE 标记移植细胞，将经淤胆血清“病理微环境”筛选体系筛选出的ESC源性肝干细胞经门静脉移植入治疗性肝再生模型小鼠肝内。然后荧光显微镜下观察，检测移植细胞体内分布、整合与肝细胞替代、体内生长分化等情况。2周后行白蛋白荧光免疫组化(双荧光染色)、血清白蛋白水平检测其功能状况。并通过观察其体内成瘤性对筛选出的ESC源性肝干细胞的安全性进行评估。结果： CFDA SE标记的ESC源性肝干细胞肝内移植1周，受体小鼠肝实质内可见散在绿色荧光分布。2周后，肝实质内绿色荧光分布区域明显扩大，且可见类似肝索样结构排列。共焦白蛋白荧光免疫组化(双荧光染色)结果表明，受体小鼠肝组织内可见标记细胞表达白蛋白阳性信号（呈黄色荧光），血清白蛋白水平则无明显差异（P>0.05）。6周内未见畸胎瘤形成，而将未分化的ESC移植入小鼠腋区皮下6周后则可见畸胎瘤形成。结论： 经淤胆血清“病理微环境”筛选体系筛选出的ESC源性肝干细胞移植入治疗性肝再生模型小鼠肝内后可有效整合入宿主肝板、在肝内能进一步生长分化并部分表达肝细胞功能。其安全性较好，6周内未见畸胎瘤形成。     

转γ-干扰素基因大鼠肝细胞模型的建立

目的：使用多聚阳离子脂质体载体（ｌｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ）在体外建立转γ干扰素（ＩＦＮγ） 基因的大鼠肝细胞模型。方法：利用ｌｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ在体外将ＩＦＮγ基因转染大鼠肝细胞。分别以ＲＴＰＣＲ 和ＥＬＩＳＡ方法检测所转ＩＦＮγ基因在大鼠肝细胞的转录和表达情况。结果：以ｌｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ为载体的ＩＦＮγ基因转染大鼠肝细胞后,可被有效的转录并产生具有生物活性的ＩＦＮγ。结论：ＩＦＮγ基因可被成功转染入大鼠肝细胞并可有效表达。这可能为细胞因子的免疫治疗提供一种新途径。     

应用无创机械通气治疗30例急性肺水肿临床分析

目的观察急性心源性肺水肿患者接受无创双水平正压通气治疗后的疗效。方法对临床上经过常规药物治疗急性心源性肺水肿症状仍不能缓解的30例病人,运用无创双水平正压通气治疗,观察治疗前后呼吸频率（RR）、心率（HR）、平均动脉压（MAP）及动脉血气中氧饱和度（SaO2）、氧分压（PaO2）、pH、二氧化碳分压（PaCO2）、乳酸（LAC）的变化。结果与治疗前比较,除PaCO2通气前后无差异外（P〉0.05）;患者RR较前明显减慢,HR明显减慢,MAP下降,pH上升,酸中毒明显改善,且与治疗前相比,PaO2、SaO2明显升高,通气前与通气后2h相比有统计学意义（P〈0.01）。结论采用无创双水平正压通气治疗急性心源性肺水肿疗效显著,能明显纠正低氧状态、改善心功能,防止病情恶化,提高抢救成功率。     

大鼠原位肝移植术后胆道并发症的影响因素

目的 研究大鼠原位肝移植术后胆道并发症的各种影响因素,为建立更稳定的大鼠原位肝移植模型提供实验依据.方法 雄性SD大鼠87只,完全随机法分组,其中移植组48只、非移植组36只、假手术组3只,实验共分胆管-胆管重建移植组、胆管-十二指肠重建移植组、胆管-胆管重建+肝动脉结扎非移植组、胆管-胆管重建非移植组、胆管-十二指肠重建+肝动脉结扎非移植组、胆管-十二指肠重建非移植组和假手术组7组.各手术处理组以出现明显胆道并发症或移植后14 d作为观察时间终点.通过肝脏大体标本肉眼观察、病理学检测和血清学分析等判断胆道并发症的发生率及其严重程度并进行各组间比较.结果 移植组总胆道并发症发生率为69.6%,明显高于非移植组(25.0%)和假手术组(0%),差异有统计学意义(均P<0.05).在移植组和非移植组中,胆管-十二指肠重建组的胆道并发症发生率明显高于胆管-胆管重建组(90.9%比50.0%,38.9%比11.1%,均P<0.05).非移植组中,结扎肝动脉组的胆道并发症高于不结扎肝动脉组(38.9%比11.1%,P<0.05).结论 经典"二袖套法"大鼠原位肝移植模型尚不完善,仍需进一步改进.就大鼠原位肝移植模型而言,胆管-十二指肠重建方式并非理想的选择.     

淤胆血清“病理微环境”诱导胚胎干细胞向肝细胞分化

目的:探讨淤胆血清"病理微环境"培养体系诱导胚胎干细胞(ESC)向肝细胞分化的可行性。方法:将小鼠ESC细胞系E14在无白血病抑制因子培养基中培养,使其自发分化为拟胚体,加入FGF-4和HGF初步诱导,然后置于5％淤胆鼠血清"病理微环境"筛选培养液中继续培养2周,然后进行细胞形态学观察,白蛋白和CK8/18免疫组化染色,白蛋白与转甲状腺蛋白RT-PCR检测,细胞糖原染色及尿素合成功能分析。结果: 经初步诱导分化的ESC置于5％淤胆血清"病理微环境"筛选培养液中培养,初期细胞生长受抑制,2周后分化为肝细胞样细胞,细胞呈现良好的均质性;免疫组化染色显示白蛋白和CK8/18表达;RT-PCR显示有白蛋白、转甲状腺蛋白等的mRNA转录;细胞有糖原和尿素合成功能。结论:采用含淤胆血清的病理微环境培养体系从经FGF-4和HGF初步诱导的胚胎干细胞中有效筛选出了具有功能的肝细胞,细胞有较好的均质性,为临床肝细胞替代治疗、获取丰富供体细胞来源提供了新思路。     

热休克蛋白对树突状细胞成熟的影响研究

目的:探讨热休克蛋白(HSP)对树突状细胞(DCs)成熟的影响,同时对其形态学动态变化进行研究。方法:从肝癌组织中提取HSP(gp96 )抗原肽复合物;肝癌细胞进行热休克处理诱导其表面表达HSP,再用DiI荧光标记;将两种HSP与DCs混合培养,动态观察DCs捕获抗原和成熟过程中的形态学变化。流式细胞仪检测不同情况下热休克蛋白对DCs成熟表型的影响。结果:使用DiI标记的方法良好地显示了DCs摄取抗原的形态学变化;DCs通过直接接触、包绕、形成囊泡和伸出伪足且末端形成囊泡4种方式摄取抗原;热休克蛋白可促进DCs成熟表型的表达。结论:DiI是适合DCs形态学研究的良好的荧光标记物;DCs捕获抗原有4种不同方式;不同热休克蛋白均可促进DCs成熟,但提取的热休克蛋白作用更显著。     

70%肝切除对大鼠胎肝细胞脾内移植后增殖能力的影响

研究70％肝切除对大鼠胎肝细胞脾内移植后增殖影响。分离孕3周SD大鼠胚胎肝细胞，将其移植入70％肝切除大鼠脾内，分别于移植后7天和30天应用流式细胞仪分析肝切除大鼠残肝细胞的细胞周期，用图像分析法检测脾内移植肝细胞面积密度。与对照组比较，胎肝细胞移植后7天，肝切除鼠残细胞S期细胞比例明显增加（P＜0．05），Gz/M期细胞比例明显减少（P＜0．01）。而其牌内移植 胎肝细胞面积密度则显著升高（P＜0．05）；30天后，残 细胞再生状态与移植胎肝细胞的面积密度与对照组比较均无显著性差异。研究表明，70％肝切除的肝再生有利于大鼠肝细胞脾内移植后的增殖。     

不同浓度丁酸钠体外诱导树突状细胞分化的细胞表型研究

目的 探讨不同浓度丁酸钠诱导对体外培养树突状细胞(DC)细胞表型的变化规律.方法 通过粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)体外诱导的人外周血单个核细胞来源的DC,按不同丁酸钠浓度和不同诱导时间分组培养,流式细胞仪检测各组DC的细胞表型.结果 在丁酸钠诱导下,各组DC表面的成熟标志均显著下调,丁酸钠浓度越高下调越明显,随着培养时间的延长,各组DC表面的成熟标志均显著下调;但是细胞的凋亡率也同时上升.结论 丁酸钠在体外可以显著抑制DC的成熟过程,以丁酸钠浓度为0.75mmol/L和培养48h为最佳的诱导浓度和时间.     

酸性微环境下大蒜素增强大鼠自然杀伤细胞的功能活性

目的 观察体外酸性培养环境下大蒜素对自然杀伤(NK)细胞功能活性的影响,并探讨其机制.方法 以pH 5.6、pH 6.5和pH 7.2的完全RPMI 1640培养基对大鼠脾脏CD3-NKR-P1+NK细胞进行悬浮培养,并给予30 mg/L浓度的大蒜素进行处理.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养液中干扰素(IFN)-γ的分泌水平,流式细胞仪检测NK细胞的增殖和凋亡率,乳酸脱氢酶法检测NK细胞的功能活性.结果 酸性培养环境下大鼠脾脏NK细胞的增殖能力明显下降,NK细胞功能活性明显受阻.在pH 7.2、pH 6.5和pH 5.6三种不同的培养条件下,大蒜素对NK细胞增殖率的影响表现为随培养环境的pH降低反而升高,以pH 5.6、培养16 h时达最高33.3%.与之相对应,NK细胞分泌的IFN-γ达(64.59±0.09)ng/L,较培养4 h时升高28%,且对小鼠淋巴瘤Yac-1细胞的杀伤活性也达到最高水平.结论 大蒜素可通过提高NK细胞IFN-γ分泌水平明显改善酸性培养环境下NK细胞的功能活性.

Abstract：

Objective To investigate the role of allicin on rat nature killer (NK) cell activity in vitro under acidic microenvironment, and its possible mechanism. Methods CD3- NKR-P1+ NK cells isolated from the rat spleen were cultured in the complete RPMI 1640 medium ( pH 5. 6, pH 6. 5, or pH 7. 2 respectively), and treated with allicin at final concentration of 30 mg/L. Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) was used to determine supernatant interferon (IFN)-γ levels. The percentage of NK cells proliferation and apopotosis was analyzed by flow cytometry. NK cell cytotoxicity toward YAC-1 tumor cells was detected by LDH release assay. Results Proliferation and cytotoxicity of NK cells were significantly suppressed by acidic microenvironment in vitro. Under the cultured condition of acidic pH below 7. 2, allicin seemed to promote NK cells proliferation, which reached to highest level of 33% at pH 5. 6 cultured for 16 h. Correspondingly, at pH of 5. 6, allicin induced a marked increase of IFN-γ concentration in the supernatant from (50. 07 ± 0. 38) (cultured for 4 h) to (64. 59 ± 0. 09) ng/L ( cultured for 16 h). The cytotoxicity of NK cells toward YAC-1 tumor cells was also found strongest under the condition of pH 5. 6 cultured for 16 h. Conclusion Allicin favored to enhance the cytotoxicity of NK cells under the acidic cultured condition, which might be related to the increase of IFN-γ production.