抗CD3单克隆抗体重、轻链可变区基因的克隆及序列分析

目的：抗CD3单克隆抗体（WuT3)可变区基因克隆及序列分析。方法；采用RT-PCR技术，从WuT3杂交瘤细胞总RNA中扩增VH，VL片段，经酶切后通过链接反应构建重组克隆载体，测序鉴定。结果：通过国际联机检索发现VH，VL基因与Ig同源，分别符合小鼠IgVH,Vк基因特征。VH基因属于鼠重链VH第ⅡB亚类，全长363bp，可编码121个氨基酸；VL基因属于鼠к轻链第Ⅲ亚类，全长330bp，可编码110个氨基酸，结论：成功获得WuT3单抗的重，轻链可变区基因。     

抗人CD25分子单链抗体基因的构建、表达及初步鉴定

目的:构建和表达抗人CD25分子单链抗体(scFv)蛋白,并测定其生物学活性。方法:用RT-PCR方法从能分泌特异性抗CD25单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞中分离纯化抗体VH和VL基因。用重叠延伸PCR方法将VH和VL拼接在一起,构建抗CD25分子scFv的基因。将scFv基因克隆至pMD18T,用限制性内切酶切以及测序鉴定。将scFv基因连接到pBAD/gⅢA表达载体,转化Top10表达菌。阳性克隆用左旋阿拉伯糖诱导4 h,SDS-PAGE电泳检测蛋白纯度,竞争抑制ELISA实验检测其活性。结果:scFv基因长度约为700 bp。通过DNA序列测定和分析,构建出VL-(GGGGS)3-VH(但其中349位G突变为A,使Linker其中一位Gly→Ser)。其VH隶属于小鼠Ig重链可变区Ⅲ(C)亚类,全长351 bp,可编码117个氨基酸;其VL隶属于小鼠Igκ轻链可变区Ⅳ亚类,全长318 bp,可编码106个氨基酸。TOP10中表达的scFv抗体加上同时融合表达的两个标签6×His和C-mycMr约为31 000,结果符合scFv的Mr。竞争抑制细胞ELISA实验显示表达的scFv具有活性。结论:此scFv基因的表达产物具有一定的特异结合活性。为抗CD25 scFv的临床应用打下了基础。     

母体免疫接种肺炎球菌多糖疫苗

预计每年有 4 0 0万以上的 5岁以下儿童死于肺炎 ,大多数发生于发展中国家。鉴于肺炎球菌病的高负荷 ,人们对将母体免疫接种作为预防幼儿大量死亡的方法日益关注。　　作者以巴布亚新几内亚南部高地省塔里市妊娠 2 8～ 38周的妇女为研究对象 ,试验组孕妇注射 2 3价肺炎球菌多糖 ( Pnc PS)疫苗(由法国巴斯德梅里厄血清和疫苗公司提供的Pneumo- 2 3) ,疫苗含 1、2、3、4、5、6 B、7F、8、9N、9V、1 0 A、1 1 A、1 2 F、1 4、1 5B、1 7F、1 8C、1 9A、1 9F、2 0、2 2 F、2 3F和 33F型 PS。对照组为未免疫孕妇。母体于免疫前及分娩时采…     

含流感病毒M基因的DNA质粒诱导的抗甲型流感病毒保护性免疫

作者检测了含有Ａ ＰＲ 8 34流感病毒株Ｍ1和Ｍ2基因的表达质粒ｐＭＥ1 8Ｓ Ｍ的保护效力。　　ｐＭＥ1 8Ｓ Ｍ由表达质粒ｐＭＥ1 8Ｓ和流感病毒Ｍ区ｃＤＮＡ构建而成。Ｍ基因来源于流感病毒株Ａ ＰＲ 8 34,以ｐＭＥ1 8Ｓ空载体质粒作为阴性对照质粒。用于攻击的病毒Ａ ＷＳＮ 33(Ｈ1Ｎ1 )及Ａ ＰＲ 8 34(Ｈ1Ｎ1 )从感染的ＭＤＣＫ细胞中收获 ,并用空斑形成试验滴定对雄性ＢＡＬＢ ｃ小鼠 ( 6～ 8周龄 )鼻腔或肌肉注射途径免疫 3次 2 0 μｇＰＭＥ1 8Ｓ Ｍ ,每次间隔 2周。对阳性对照小鼠肌肉注射9.0× 1 0 7ＰＦＵ的灭活流感病毒Ａ ＰＲ 8 …     

抑制mll-af9融合基因表达对急性单核细胞白血病细胞THP-1增殖的影响

本研究探讨siRNA(small interfering RNA)对人急性单核细胞白血病细胞系THP-1的mll-af9融合基因的影响.选择THP-1细胞特有的m11-af9融合基因为靶基因,设计并合成siRNA片段.以人急性单核细胞白血病细胞系THP-1为靶细胞,应用脂质体转染方法,将siRNA导入细胞,通过流式细胞仪检测siRNA转染效率,用RTPCR法比较转染前后mll-af9 mRNA表达水平的变化,以MTT法检测细胞增生抑制率,流式细胞术检测细胞周期的改变和细胞凋亡水平.结果表明siRNA转染效率为(69.1±1.8)%,转染siRNA后THP-1细胞生长受到明显抑制,m11-af9融合基因表达量大幅度减少,细胞周期发生了明显的变化,主要表现为G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,并使细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞凋亡水平增高,而对照组siRNA转染后则无上述改变.结论利用siRNA靶向干扰mll-af9融合基因的表达可以有效抑制人急性单核细胞白血病细胞THP-1的增殖.     

中试防龋DNA疫苗pGJA-P/VAX免疫小鼠的实验研究

目的：评价中试防龋DNA疫苗pGJA-P/VAX诱导小鼠体内特异性免疫应答的效果。方法：分别由武汉生物制品研究所中试制备和实验室采用德国Qiagen公司去内毒素质粒大量提取试剂盒手工提取防龋DNA疫苗pGJA-P/VAX;两种方法制备的质粒分别于0周,2周经肌肉、鼻腔免疫小鼠,并以鞭毛蛋白作为黏膜佐剂与质粒同时经鼻腔免疫小鼠,PBS及空载体pVAX1作为对照。免疫前开始每两周收集小鼠血清和唾液样本,ELISA定量检测血清及唾液中特异性抗体含量。结果：中试质粒和手提质粒肌注时均能够诱导血清特异性IgG,但诱导唾液特异性sIgA的能力较为有限。在与黏膜佐剂鞭毛蛋白同时滴鼻时,中试质粒可诱导较为明显的血清特异性IgG和唾液特异性sIgA。在相同的免疫条件下,中试质粒诱导的特异性抗体水平低于手提质粒组,但二者无显著性差异。结论：中试防龋DNA疫苗pGJA-P/VAX能够诱导小鼠体内特异性体液免疫应答。     

3A1-柔红霉素对急性T细胞白血病的效果与安全性初探

应用单克隆抗体３Ａ１－柔红霉素结合物（３Ａ１－ＤＭ）临床治疗８例急性Ｔ淋巴细胞白血病患者。经初步验证，鼠源性单克隆抗体制备的导向药物输入人体内未发生严重过敏反应与毒副作用。疗程完毕后，以骨髓象为标准评价临床治疗效果，获完全缓解者３／８例（３７．５％），部分缓解４／８例（５０％），无效１／８例（１２．５％）例，总有效率达８７．５％。初步验证了微量导向药物在临床治疗中的效果。     

Q热氯仿∶甲醇残基(CMR)疫苗与I期细胞疫苗(Q-Vax)的效力及免疫原性比较

Q热是由专性吞噬溶酶体菌伯氏考克斯体引起的急性发热性疾病 ,常因呼吸道吸入由家畜及宠物产生的传染性气溶胶而得病。氯仿 :甲醇残基 ( CMR) Q热疫苗 ,在啮齿动物及家畜中的初步研究显示 ,CMR抽提的 相株疫苗能安全有效地保护动物抵抗专性吞噬溶酶体病原菌的攻击。在开始人类志愿者的 期临床试验之前 ,作者在非人灵长动物猕猴中比较了 CMR疫苗与已批准上市的澳大利亚 Q热细胞疫苗 ( Q- Vax)的效力 ,已证实 Q- Vax能对人类志愿者提供安全的保护作用。　　将伯氏考克斯体 相 Henzerling株接种于无特定病原体 ( SPF)的鸡胚卵黄囊中…     

两种免疫避孕疫苗的效果比较

鼠类在全世界造成重大危害,现有的灭鼠方法尚不能尽如人意。而所谓的“化学避孕剂”合成类固醇除了需频繁投药外,还因其可能使非目标动物直接或通过食物链接触药物而不为生态学所接受,但是免疫避孕药物则能克服这些缺点。