用多引物聚合酶链反应检测鼠疫耶尔森菌

目的建立多引物检测鼠疫耶尔森菌（鼠疫菌）的PCR（M-PCR）方法.方法合成4对引物,分别来源于质粒和染色体DNA上F1、pla、Hms、Inv基因,对164株鼠疫菌进行扩增.结果在164株鼠疫菌中,有152株菌4种基因扩增均阳性,仅云南省12株Hms基因扩增为阴性.结论采用M-PCR方法检测鼠疫菌DNA具有较好的敏感性、特异性和稳定性,其可作为检测与鉴别鼠疫菌和疫情监测方面快速诊断的方法.     

胶体金免疫层析试纸条对云南鼠疫现场材料的检测

目的评价检测鼠疫抗原及抗体胶体金免疫层析试纸条(G ICA及RG ICA)对现场材料的检测效果。方法采用G ICA分别对采自云南省的607份血清标本(查鼠疫抗体)及572份鼠脏器标本(查鼠疫抗原)进行检测,同时以血凝试验(IHA及R IHA)与酶联试验(ELISA及F1-ELISA)作为对照。结果(1)在对607份血清标本的检测中,G ICA、IHA及ELISA三种方法的符合率中度,而G ICA的敏感性比IHA与ELISA分别高111%和90%;(2)在对572份鼠脏器标本的检测中,RG ICA、R IHA及F1-ELISA三种方法的符合率中度,而RG ICA的敏感性比R IHA与F1-ELISA分别高100%和14.3%。结论检测鼠疫的G ICA及RG ICA特异性强、灵敏度高、简便快速,有较大的推广应用价值。     

2007年云南省梁河县鼠疫疫源地室内鼠密度和蚤指数调查

目的 调查与分析云南省梁河县鼠疫疫源地室内鼠密度和蚤指数,评估鼠疫发生的潜在危险.方法 根据历史鼠疫监测资料,2007年8-9月在云南省梁河县选择30个鼠疫疫源村,对每个村的全部住户进行编号后,随机抽取20户,放置鼠笼和粘蚤纸用于捕获鼠和蚤,计算鼠密度、染蚤率、蚤指数、中位数.结果 黄胸鼠和臭鼷鼱分别捕获133和33只,平均每村捕鼠5只,平均鼠密度为2.8%(166/6000).染蚤鼠101只,染蚤率为60.8%(101/166).收集鼠体蚤344匹,其中印鼠客蚤296匹.缓慢细蚤48匹.鼠体蚤指数为2.1(344/166).捕获地面游离蚤315匹,地面游离蚤指数为0.026(315/11 888).平均每村5.5匹.其中,猫栉首蚤指明亚种和印鼠客蚤占了地面游离蚤总数的97.8%(308/315).地面游离蚤和鼠体蚤的蚤种构成不一致(精确概率法,P<0.01),鼠体蚤和鼠密度呈现正相关(r=0.68,P<0.01),地面游离蚤与鼠密度和鼠体蚤间均无相关关系(r=-0.17、0.32,P均>0.05).使用诱饵油炸猪皮3600个笼·夜,共捕获105只鼠,使用诱饵油条2400个笼·夜,捕获46只鼠,油炸猪皮的捕鼠效果明显优于油条(χ2=5.59,P<0.05).结论 梁河县鼠疫疫源村室内鼠以黄胸鼠为主,印鼠客蚤和猫栉首蚤指明亚种分别是鼠体蚤和地面游离蚤的优势种.勐宋、邦读村和汤加屯仍有发生鼠疫的可能性.     

云南省香格里拉县鼠疫媒介蚤调查结果分析

目的 分析云南省香格里拉县小型兽类体表寄生蚤的构成和分布,为探讨滇西北高海拔地区是否存在喜马拉雅旱獭鼠疫疫源地提供科学依据.方法 2011年6-7月,在香格里拉县6个乡镇,海拔2500～4900m区间4种景观带开展现场调查;分别采用夹线法、笼日法、圈套、吊杆扣和挖洞等方法捕获小兽,梳捡体蚤,分类计数.结果 从4目7科(亚科)14属21种425只小兽体表捡获寄生蚤334匹(3科7亚科15属26种);其中以迪庆额蚤和方叶栉眼蚤数量居多,分别占33.53％和13.17％;首次从云南省喜马拉雅旱獭体表和獭洞捡获青藏高原旱獭鼠疫疫源地主要媒介蚤种斧形盖蚤和谢氏山蚤,且为主要寄生蚤,分别占11.38％和6.59％.结论 迪庆额蚤为此次调查检获的优势种,从空间分布来看,不同海拔垂直梯度和4种景观都有分布,特新蚤指名亚种分布无论从景观还是海拔高度都未呈现集中优势,这与玉龙和剑川两块鼠疫疫源地有明显区别,而喜马拉雅旱獭体外寄生蚤斧形盖蚤和谢氏山蚤的客观存在,为推测当地存在喜马拉雅旱獭鼠疫疫源地提供了极有价值的线索.     

丽江市家犬中致病性耶尔森菌流行病学调查

目的 了解丽江市鼠疫疫源地内家犬中携带致病性耶尔森菌的流行情况及其病原学特征。方法 选择丽江市古城区和玉龙县各2个乡镇,逐户采集犬肛拭子及血液标本。肛拭子经4 ℃冷增菌后,采用耶尔森选择培养基对小肠结肠炎耶尔森菌、鼠疫耶尔森菌和假结核耶尔森菌三种致病性耶尔森菌进行分离;对所分菌株再进行生化鉴定、生物分型、血清分型和毒力基因型检测;对血液标本进行鼠疫F1抗体的检测。结果 共采集467份肛拭子,分离到4株小肠结肠炎耶尔森菌,未分离到鼠疫耶尔森菌及假结核耶尔森菌;4株小肠结肠炎耶尔森菌中,2株为O∶3血清型和非1A生物型,毒力基因齐全为致病株;另2株为1A生物型血清型未定,毒力基因阴性为非致病株;467份血液标本中26份为F1抗体阳性,其中1份阳性标本与1份分离到小肠结肠炎耶尔森菌的肛拭子来自同一只家犬。结论 丽江市家犬中携带小肠结肠炎耶尔森菌,且有致病性菌株;此外,在一只家犬中,发现存在着鼠疫耶尔森菌与小肠结肠炎耶尔森菌共感染的现象。     

云南省丽江市古城区鼠疫疫源地噬菌体的分离及鉴定

目的 调查丽江市古城区野鼠鼠疫疫源地宿主动物携带鼠疫噬菌体情况,并探讨其流行病学意义,为野鼠鼠疫疫源地宿主动物的防制提供科学依据.方法 2017年9月于丽江市古城区5个乡镇共13个野鼠鼠疫疫源地的鼠疫流行自然村采用5 m夹线法进行捕鼠,以鼠疫疫苗株EV76为饲养菌(即鼠疫噬菌体的宿主菌),采用双层平板法分离鼠疫噬菌体,...     

云南大理州255对夫妇婚育特征分析

1992年云南省制定的妇女生育健康及发展规划(Women’s Reproductive Health and Development Program，WRHD)已实施十年，人们的生育需求如何，值得评估。为此对云南省大理州255名已婚妇女及其丈夫的婚育特征进行了调查，以期为大理州计划生育工作、生育健康服务提供参考数据。     

平均分布细胞进行鼠疫杂交瘤株克隆化的实验研究

目的 探讨在建立了分泌抗鼠疫F1抗原的单克隆抗体杂交瘤株后,对其进行克隆化的实验方法. 方法 对我课题组融合成功的5株杂交瘤株,采用初步计数后取约100个细胞,平均分布于96孔细胞培养板进行克隆化,用间接ELISA法检测培养孔上清的抗体.结果 用该方法进行克隆化,在96孔板中单克隆生长孔平均为26孔、多克隆为15孔,在1～2次克隆后,上清抗体检测均达到100%,与有限稀释法无差异. 结论 采用计数100个细胞进行克隆化的方法是可行的.     

云南部分地区鼠类及媒介昆虫自然感染立克次体调查

  目的  了解云南地区宿主动物和媒介自然感染立克次体的情况。  方法  采用鼠夹和鼠笼捕鼠,采集鼠体表的恙螨和耕牛体表的蜱虫,对鼠脾脏、恙螨和蜱虫提取DNA,应用巢式PCR扩增立克次体groEL基因,基因序列测定后与其它已知序列进行同源性分析。  结果  从410份样品中扩增出立克次体groEL片断19份（阳性率4.63%）,其中恙虫病东方体（Ot）阳性率2.68%（11/410）,斑点热立克次体（SFGR）阳性率1.22%（5/410）,莫氏立克次体（Rm）阳性率0.49%（2/410）,立克次体共生菌（Re）阳性率0.24%（1/410）。与其它已知序列进行同源性分析,检出11株Ot的相似性为93.6%~100%,分别与GenBank中已知立克次体序列的最高相似性在96.1%~100%;检出5株SFGR相似性为92.1%~99.5%,分别与GenBank中已知序列的最高相似性在98.9%~100%;检出Rm 2株,均与Wilmington株的相似性达100%;检出Re 1株,与Re（EU435143）的相似性最高为98.9%。  结论  云南地区宿主动物及媒介中存在多种立克次体感染,应加强立克次体病的监测与防制工作。     

无血清培养液在分泌鼠疫F1McAb杂交瘤细胞中的初步应用

目的应用ADCF无血清细胞培养液对分泌鼠疫F1McAb的杂交瘤细胞进行静止培养,初步了解该瘤株在ADCF中的生长情况,为今后采用无血清培养液体外培养法生产单克隆抗体提供依据。方法通过将杂交瘤细胞直接转入ADCF培养液培养、驯化培养和优化条件后培养,观察细胞在各种培养条件下的生长情况,进行活细胞计数和抗体效价检测。结果用ADCF培养鼠疫F1杂交瘤细胞,细胞直接转入不能较好的生长;通过驯化、在放过含血清培养液的原瓶中能较好的贴壁生长,在新瓶中不能稳定地贴壁生长和增殖;在经含血清的培养液优化后的培养瓶中,细胞能贴壁生长和增殖。结论ADCF培养液可用于分泌鼠疫F1McAb的杂交瘤细胞的培养。