伊短菌素A标品的制备及HPLC定量分析

目的 制备伊短菌素A标品并建立其定量分析方法。方法 发酵液经过预处理后,采用阳离子吸附树脂富集和反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离纯化,制备得到伊短菌素A。通过质谱、核磁共振谱等确证化学结构,高效液相色谱法测定样品纯度。定量分析方法采用XAqua C₁₈(250 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱,流动相：0.1%TFA水溶液-甲醇(90:10,V/V);流速：1 mL/min,检测波长：272 nm,柱温：35℃,进样量：20μL。结果 制备了高纯度的伊短菌素A标品。优化定量条件下伊短菌素A在15～1200 mg/L范围内浓度与峰面积线性关系良好;加标回收率在92.61%～107.33%;测定峰面积的相对标准偏差为0.163566%(n=6),<1.0%;检测限和定量限分别为16.74 ng和55.79 ng。结论 本文所建立的制备方法操作简单,易放大生产。定量方法简单快速,准确度和重现性良好。适用于伊短菌素A的定量分析。