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1.
目的 探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)对卡介苗(BCG)诱导巨噬细胞凋亡的调控作用。方法 Q-PCR检测活动性结核患者外周血中TRAF6的表达后利用不同感染复数的BCG感染RAW264.7细胞,在感染的不同时间通过Q-PCR和Western blot检测巨噬细胞中Caspase 3和TRAF6的表达。时间梯度试验处理组分为5组:对照组(未感染,C)、BCG感染6 h组、12 h组、18 h组和24 h组;感染复数试验处理组分为5组:对照组(未感染,C)、5 MOI组、10 MOI组、15 MOI组和20 MOI组。随后,通过小干扰RNA技术敲减RAW264.7细胞中TRAF6的表达,并结合BCG感染建立TRAF6敲减模型。TRAF6敲减实验分为4组:阴性对照组(NC)、BCG单独感染组(BCG)、TRAF6小干扰RNA单独处理组(siRNA)和TRAF6小干扰RNA与BCG共处理组(siRNA+BCG)。利用平板涂布法检测巨噬细胞菌载量变化。通过流式细胞术检测巨噬细胞凋亡率和线粒体膜电位变化。利用Western blot检测TRAF6、Caspase 3、PARP、Bcl-...  相似文献   
2.
<正>结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染引起的一种严重威胁人畜健康的传染性疾病,目前仍然是全球十大致死率疾病之一[1]。据WHO报告指出:由于这两年受到COVID-19大流行的影响,TB患者的数量大幅度下降,但由于多重耐药、共患病等因素的上升以及对TB诊断、预防和服务支出的下降,导致TB的预防和治疗现状变得更加棘手[2-3]。据不完全统计,全球目前有近四分之一的MTB潜伏感染者,这部分感染者免疫力下降后,就可能发展为活动性TB患者。由此可见,结核病发生发展与机体免疫应答功能密切相关。  相似文献   
3.
目的:探讨谷氨酰胺酶1(glutaminase 1,GLS1)在卡介苗(Bacille Calmette-Guérin,BCG)感染的巨噬细胞中对自噬的调控作用。方法:培养小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,利用小干扰RNA敲减巨噬细胞内GLS1的表达并结合BCG感染,采用免疫荧光染色、流式细胞术、ELISA和Western blot等技术检测自噬相关指标,阐明GLS1对BCG诱导的巨噬细胞自噬的调控作用,并初步探讨其机制。结果:(1)BCG感染巨噬细胞显著增加了LC3B和GLS1的蛋白表达量(P<0.01),促进了谷氨酰胺分解;(2)敲减GLS1显著增加了巨噬细胞内谷氨酰胺的含量(P<0.05),同时显著降低了巨噬细胞的自噬率以及自噬相关因子LC3B(P<0.01)、beclin-1(P<0.01)和ATG12(P<0.05)的蛋白表达量;(3)剥夺培养液中的谷氨酰胺处理细胞后,敲减GLS1对BCG感染的巨噬细胞中自噬相关因子LC3B、ATG5和ATG12的表达以及自噬流的发生无显著影响。结论:在BCG感染巨噬细胞RAW264.7过程中,敲减GLS1后可通...  相似文献   
4.
<正>结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的具有高致病性及死亡率的人畜共患传染病[1]。作为一种胞内致病菌,Mtb通过气溶胶等途径感染肺部,随后被驻留在肺泡中的巨噬细胞识别、吞噬并发生复杂的相互作用[2]。一方面,当Mtb感染巨噬细胞时,  相似文献   
5.
目前普遍认可的只有适应性免疫才能建立免疫记忆的观点正在受到挑战。越来越多的研究表明,先天免疫细胞如单核细胞、巨噬细胞和自然杀伤(NK)细胞在外源感染刺激下能够产生一种新的带有非特异性记忆的免疫反应,以应对二次同源或异源感染,这一过程被称为训练免疫。其特点是宿主对再次感染的高反应性、非特异性免疫"记忆";此外,该过程不依赖经典的T、 B细胞适应性免疫,而是由表观遗传修饰和免疫代谢驱动。训练免疫的提出是对免疫学原理的一次扩展,为免疫学机制的研究提供了新的方向。  相似文献   
6.
目的 为了评价BCG初免-单次重组腺病毒Ad5-CEAB加强的免疫策略诱导小鼠产生的免疫效应.方法 在前期工作的基础上,制备并纯化获得了高滴度的重组腺病毒Ad5-CEAB,然后以小鼠为动物模型,采用BCG初免-Ad5-CEAB加强的异源初免-加强的免疫策略对动物进行免疫,通过测定小鼠淋巴细胞抗原刺激液中IL-12和IFN-γ的含量,测定小鼠血清IgG抗体含量以及小鼠肺盥洗液中sIgA的浓度来评价BCG初免-单次重组腺病毒Ad5-CEAB加强免疫策略的免疫效应.结果 BCG初免-Ad5-CEAB加强免疫后,经抗原刺激后的小鼠淋巴细胞会分泌高水平的IL-12和IFN-y,这两种细胞因子的浓度均显著高于对照组.BCG初免-Ad5-CEAB加强后,还可以有效的刺激小鼠分泌IgG抗体,血清IgG抗体浓度显著高于对照组.另外,小鼠肺盥洗液中sIgA的浓度也显著高于对照组.结论 采用BCG初免-单次Ad5-CEAB加强的异源初免-加强的免疫策略能够有效的刺激小鼠产生较强的免疫应答反应.  相似文献   
7.
8.
目的 采用基因分型方法对30株分离自西北三省的牛源分枝杆菌分离株进行鉴定.方法 从西北三省的规模化奶牛场采集结核菌素(PPD)阳性奶牛的咽拭子和鼻拭子,经分离培养后,采用16S rRNA、MPT64以及多位点PCR进行菌株分型鉴定,利用数目可变串联重复序列分析(variable-number of tandem rep...  相似文献   
9.
10.
目的 Ag85A和Ag85B是结核分枝杆菌的主要优势保护抗原,为提高编码Ag85A和Ag85B DNA疫苗的免疫原性和免疫效果,特构建真核共表达Ag85A和Ag85B抗原的真核表达载体pcDNA-Ag85A IRES-Ag85B,并利用293T细胞对其表达进行检测.方法 PCR扩增Ag85A和Ag85B基因,逐步将Ag85A和Ag85B基因定向插入至质粒pcDNA3.1(+)多克隆位点CMV启动子与加A信号BGH poly(A)之间,并将Ag85A和Ag85B基因以内部核糖体进入位点(internal ribo some entry site,IRES)序列连接,酶切和测序验证后将重组质粒转染至293T细胞中进行真核表达,48 h后提取细胞总蛋白,表达产物经SDS-PAGE分离和Western blot分析.结果 限制性内切酶酶切及测序结果表明,重组质粒pcDNA-Ag85AIRES-Ag85B基因序列和阅读框架正确.将重组质粒转入293T细胞后,利用Ag85A和Ag85B特异性抗体Western blot检测证实两种抗原可在同一载体中各自独立表达.结论 成功构建了能够同时独立表达结核分枝杆菌Ag85A和Ag85B抗原基因的真核表达载体pcDNA-Ag85A IRES-Ag85B,为下一步研究它们的免疫原性和免疫效果奠定了基础.  相似文献   
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