中药治疗糖尿病的体会

中药治疗糖尿病的体会北京市政五公司门诊部赵继敏糖尿病是一种常见的代谢内分泌疾病，多见于中年以后，青少年及儿童亦有。临床表现为三多一少属（多食、多饮、多尿、体重下降），以及血糖、尿糖增高。在中医属于“消渴”、“消瘅”的范畴。我在二十多年的临床工作中通...     

ALCAM基因1沉默对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制

目的 探讨活化白细胞黏附分子(ALCAM)基因沉默对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,并对其分子机制进行初步研究.方法 将ALCAM 和对照shRNA转染至胃癌细胞SGC-7901中,建立稳定细胞系,分别采用实时荧光定量(RT-PCR)技术和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测转染后SGC-7901细胞中ALCAM mRNA和蛋白水平;采用CCK-8法检测转染后SGC-7901细胞的增殖情况;采用流式细胞术检测转染后SGC-7901细胞凋亡情况.采用胃癌肿瘤模型分析ALCAM基因沉默对肿瘤生长的影响.结果 ALCAM shRNA稳定细胞系ALCAM mRNA(1.01 ±0.26)和蛋白质的表达水平(1.66 ±0.23)低于对照 shRNA组细胞ALCAM mRNA(0.12 ±0.06)和蛋白质水平(0.23 ±0.09),差异有统计学意义(P<0.05).与对照shRNA稳定细胞系比较,ALCAM shRNA 稳定细胞系细胞增殖活性下降(P<0.05)、凋亡水平升高(P<0.05)、荷瘤小鼠肿瘤生长速度减缓(P<0.05).ALCAM下调并不影响总蛋白激酶B(AKT)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达,而降低了AKT和mTOR磷酸化水平,抑制了mTOR活性,此外,ALCAM蛋白敲低提高了Caspase-3蛋白的表达水平,激活了凋亡信号通路.结论 ALCAM基因沉默能够降低胃癌细胞中ALCAM的表达水平,抑制胃癌细胞的增殖,增加细胞凋亡.     

PBL教学模式在病理生理实验教学中的应用

目的:探讨在病理生理学实验教学中开展以问题为基础的学习教学方法(Problem-Based Learn-ing,PBL)的必要性。方法:以08级临床医学系七年制大三医学生作为研究对象,分为实验组和对照组,实验组实施PBL教学,对照组实施传统教学。实验课结束之后,学生独立书写实验报告,由教师进行评分,对比两者期末考试成绩,并对学生进行问卷调查。结果:PBL组实验报告成绩和期末考试成绩均高于传统教学组。调查结果实验班认可率高于对照班,P<0.05。结论:病理生理学实验中开展PBL教学,对提高学生学习兴趣,培养问题意识、提高分析问题、解决问题的能力,发挥其主观能动性,培养其临床思维具有重要的意义,是培养高素质优秀医学人才的重要途径之一。     

TSA对食管癌细胞系EC9706细胞周期作用及分子机制的探讨

目的 研究去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(TSA)对食管癌细胞 EC9706细胞周期的作用及机制.方法 将浓度为0.5、1.0、1.5 μmol/L TSA作用EC9706细胞24 h,用MTT观察不同浓度 TSA 对 EC9706细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞生长及周期;Western Blot检测TSA对食管癌细胞周期相关基因的表达.结果 1.0 μmol/L 浓度的TSA 对EC9706 细胞有明显的生长抑制作用,并呈现一定的量效关系,在1.0 μmol/L浓度之上可明显诱导食管癌细胞EC9706细胞周期阻滞,明显增强p21、p27基因的表达,明显降低 CCND1、CDK4D基因的表达.结论 一定剂量的TSA可抑制食管癌EC9706细胞的生长,通过调控多个细胞周期相关基因诱导食管癌细胞细胞周期阻滞,细胞阻滞的发生与p21、p27基因表达的增加及CCND1、CDK4D基因表达的减少相关.     

人食管癌组织中DNA聚合酶β基因突变特点分析

目的：探讨人食管癌DNA聚合酶beta(polβ)基因突变的特点。方法：对75例人食管癌组织及4例正常对照组织中提取总RNA,进行RT→PCR,对PCR产物克隆后以Sanger‘s法测序。结果：人食管癌标本的polβ基因突变率36％(27／75)。突变形式包括：①A：G转换,突变频率为66．7％(18／27),375位的A→G(Ⅱe→Val)、466位G→A(Gly→Glu)、660位A→G(Arg→Gly)、670位A→G(Glu→Gly)、740位A→G(Lys未改变);②T：C转换,突变频率18．5％(5／27),454位T→C(Phe→Ser)、665位T→C(Gly未改变);③G：T颠换,突变频率18．5％(5／27),462位G→T((Ylu→提前终止于116aa);④A：T颠换,突变频率18．5%(5／27),613位A→T(Lys→Ⅱe)、737位A→T(Pro未改变);⑤G：C颠换,突变频率7．4％(2／27),648位G→C(Gly→Arg);⑥177-234位的58bp缺失,移码及提前终止,突变频率为37％(10／27)。结论：人食管癌组织polβ基因突变具有以下特点：①标本突变率达36％(27／75);②有以A：G转换和G：T颠换为热点等多种突变形式;③2种提前终止可产生2种截短的polβ蛋白,1种具有116氨基酸长度;另一种58bp的缺失者仅有26氨基酸长度。     

新型冠状病毒肺炎流行病学特点 和治疗药物研究进展

严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）于2019 年12 月在中国武汉被发现。由 于该病毒具有较强的传染性,爆发了以湖北省为中心,借助春运快速波及至全国的新型冠状病毒肺炎 (COVID-19）疫情。认清疫情变化规律和了解临床针对性的药物研发进展,对疫情控制具有重要意义。该文 从SARS-CoV-2 的特性、COVID-19 疫情的流行病学表现、治疗药物研发和应用等进行综述。     

曲古霉素A对食管癌细胞系EC9706细胞凋亡的作用及机制

目的探讨曲古霉素A（TSA）对食管癌细胞系EC9706细胞凋亡的影响及机制。方法用AnnexinV-FITC和PI进行双染色,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测TSA对食管癌细胞凋亡相关基因表达的影响。结果 1.0μmol/L的TSA诱导EC9706细胞凋亡率增加（P〈0.05）,且呈浓度依赖性;0.5μmol/L的TSA作用48 h后细胞凋亡率增加（P〈0.05）,呈时间依赖性。TSA处理的EC9706细胞Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少;TSA诱导EC9706细胞caspase-8及caspase-9裂解活化,且随作用时间延长逐步升高。结论一定量的TSA可以诱导EC9706细胞凋亡,凋亡原因与Bax表达增强、Bcl-2减少以及凋亡细胞中caspase-8及caspase-9介导的caspase-3活化有关。     

原代脐静脉内皮细胞与脐静脉内皮细胞株的生物学特性比较

目的:建立高效脐静脉内皮细胞(human umbilicalvein endothelial cell,HUVEC)体外培养方法,与HUVEC株生物学特性进行对比研究,为组织工程及相关医学基础研究提供更好的细胞来源.方法:在新鲜脐静脉内灌注2.5 g/L胰蛋白酶消化获得内皮细胞,内皮细胞培养基(endothelial cellmedium,ECM)进行培养;RPMI1640培养HUVEC株.比较两组细胞形态;免疫组化、RT-PCR检测vWF,CD144的表达;Western Blot检测两组冻存复苏后细胞vWF,CD144蛋白水平的表达.结果:原代HUVEC体外生长2～3 d可铺满单层,细胞呈梭形、饱满,漩涡状排列生长,传代后可见管腔样结构;HU-VEC株胞质多颗粒,细胞单薄.免疫组化原代HUVEC的vWF和CD144表达明显高于HUVEC株[vWF分别为(142.7±3.3),(113.6±0.7);CD144分别为(118.6±0.5),(74.2±0.4);P<0.01].在mRNA水平,原代HUVEC基因CD144(577 bp)的表达量为HUVEC株的(3.15±0.12)倍(P<0.05);vWF(434 bp)表达量为HUVEC株的(6.15±0.37)倍(P<0.05).蛋白水平冻存复苏的原代HUVEC的CD144(135ku)表达量为HUVEC株的(2.07±0.31)倍(P<0.05);vWF(210 ku)表达量为HUVEC株的(5.38±0.23)倍(P<0.05).结论:脐静脉灌注胰蛋白酶消化法配合ECM培养可迅速获取大量内皮细胞,其生物学特性明显优于HUVEC株,是组织工程及相关医学基础研究更好的细胞来源.     

重组突变型DNA聚合酶β表达载体pcDNA3.1—polβ的构建

目的：构建含突变型polβ基因重组表达载体。方法：从食管癌标本中提取总RNA,反转录合成cDNA,克隆入pCDNA3．1质粒。以通用鉴定引物PCR扩增、小量提取质粒酶切鉴定重组质粒,并进行测序。结果：测序结果证实重组载体中的外源片段序列与所选取的标本完全相符。结论：成功构建了含突变型polβ基因重组表达载体,可应用于下游研究。