以深部淋巴结肿大为主要特征的艾滋病一例

患者男，42岁，因腹痛、恶心、呕吐10d在当地医院诊治。胃镜检查示：浅表性胃炎。上腹部CT示：后腹膜及后纵隔多发肿大淋巴结，部分融合成团，中心液化，考虑恶性可能，不排除淋巴结结核。于2006年7月18日转入我院。体检：体温37．6℃，浅表淋巴结未及肿大，心肺听诊正常，腹平软，未及包块，中上腹有深压痛，无反跳痛，肝脾肋下未及，移动性浊音阴性，肠鸣音活跃，双下肢无水肿，病理征阴性。     

抗Ⅲ型前胶原肽单克隆抗体的制备及初步应用

制备出两株分泌抗ＰⅢＰ（Ⅲ型前胶原肽）单克隆抗体的杂交瘤细胞株。竞争抑制ＥＬＩＳＡ试验表明：两株单抗与ＰＣＩ（Ⅰ型前胶原）及ＣⅢ（Ⅲ型胶原）无交叉反应。Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ示两株单抗钧针对ＰⅢＰ构象决定簇。应用所制备的单抗对人肝细胞癌组织及大鼠、小鼠成纤维母细胞进行免疫定位。结果显示两种成纤维母细胞呈明显膜阳性；肝癌细胞浆内呈粗颗粒状染色，提示肝癌细胞具有合成Ⅲ型前胶原的能力。     

细菌内快速构建两种用于肝纤维化基因治疗的重组复制缺陷型腺病毒

目的 :在大肠杆菌内快速构建两种分别含有人肝细胞生长因子 (hepatic growth factor,HGF)和非分泌型人尿激酶型纤溶酶原激活剂 (urokinase- type plasm inogen activator,u PA) c DNA片段的重组复制缺陷型腺病毒。方法 :分别将人 HGF和 u PA c DNA片段与穿梭载体 p Track- CMV连接 ,线性化后与骨架载体 Ad Easy- 1在大肠杆菌 BJ5 183内同源重组获得腺病毒载体 p Ad HGF和 p Adu PA,经 2 93细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒 Ad HGF和 Adu PA;将 Ad HGF和 Adu PA分别体外感染肝细胞株 L0 2 ,以 Northern印迹法和 Western印迹法检测两种病毒在肝细胞中的表达。 结果 :连接、重组后通过酶切和测序法筛选出病毒质粒 p Ad HGF和 p Adu PA;经 2 93细胞包装 ,3d后均观察到绿色荧光蛋白明显表达 ,Cs Cl梯度离心纯化最终分别获得 4× 10 1 0 efu/ m l滴度的重组病毒 Ad HGF和 6× 10 1 0 efu/ ml Adu PA;两种病毒体外感染肝细胞 3d后 ,HGF和u PA表达均明显增加。结论 :细菌内同源重组制备复制缺陷型腺病毒 ,纯化过程简单 ,重组腺病毒在肝细胞中均高效表达 ,为肝细胞移植基因治疗肝纤维化提供了新的手段     

原发性肝癌治疗进展

原发性肝癌（以下简称“肝癌”）是我国最常见的恶性肿瘤之一，近年来肝癌治疗的研究取得很大进步，新技术、新方法不断涌现，使得肝癌治疗效果得到明显改观。     

血清MIA检测在恶性黑素瘤诊断中的临床价值

探讨血清黑素抑制蛋白（ｍｅｌｏｎｏｍａ－ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＭＩＡ）在恶性黑素瘤诊断中的价值。方法：采用ＥＬＩＳＡ方法,检测不同临床分期的黑素瘤及其他恶性肿瘤患者,以及正常人血清ＭＩＡ浓度。结果正常成人（ｎ＝２０）和肺癌（ｎ＝１０）、肝癌、（ｎ＝１２）结肠癌（ｎ＝１２）患者血清ＭＩＡ浓度全部低于正常（６．５ｎｇ／ｍｌ）水平,黑素瘤患者血清ＭＩＡ浓度明显升高,阳性     

多功能腹膜检查针对良恶性腹水的鉴别诊断

目的评价多功能腹膜检查针在良恶性腹水鉴别诊断中的价值。方法回顾比较327例住院腹水患者用多功能腹膜检查针进行活检、刷检及活检刷检前后腹水细胞学检查结果。结果327例腹水患者最终均已明确诊断,多功能腹膜检查针检查活检前细胞学、腹膜活检、腹膜刷检,及活检刷检后腹水细胞学检查,良性腹水各项检查结果均为良性,特异度均为100%。恶性腹水189例中,经活检前细胞学检查明确诊断者101例,灵敏度53.4%;经活检明确诊断者171例,灵敏度90.5%;经刷检明确诊断者157例,灵敏度83.1%;经活检刷检后细胞学明确诊断者170例,灵敏度90.0%;而多功能腹膜活检针三项检查综合确诊者177例,灵敏度93.7%。有6例为刷检未明确诊断,而在活检及活检刷检后细胞学明确诊断者;7例仅在活检中明确诊断;6例仅在刷检后细胞学明确诊断。活检、刷检及活检刷检后的细胞学检查的诊断灵敏度均明显高于活检前腹水细胞学检查(χ2=64.241、38.288、62.064,P<0.001);活检和刷检相比,活检诊断灵敏度明显高于刷检(χ2=4.518,P<0.05);活检刷检后细胞学检查灵敏度与单一刷检相比明显升高(χ2=3.831,P<0.05),而活检和活检刷检后细胞学检查无统计学差异;单一活检、单一活检刷检后细胞学检查和多功能腹膜检查针三项检查综合相比无显著性差异。多功能腹膜检查针对良恶性腹水的诊断灵敏度达93.7%,准确度达96.3%。结论多功能腹膜检查针对良恶性腹水鉴别诊断具有较大的价值。     

脱氧核糖核酸甲基化对肝细胞核因子4α表达的影响

目的 探讨DNA甲基化对肝细胞核因子4α(HNF4α)表达的影响,及其在转化生长因子-β1 (TGF-β1)调节HNF4α表达过程中所起的作用.方法 用实时RT-PCR方法检测6种人肝癌细胞株(HepG2、Huh-7、Hep3B、SMMC-7721、BEL-7405、FOCUS)、20份人肝癌和相应癌旁组织中HNF4αP1 mRNA的表达.用亚硫酸盐测序法(BSP法)检测6种人肝癌细胞株中HNF4αP1启动子区甲基化程度.用5-脱氧杂氮胞苷(5-AZA-CdR)处理FOCUS细胞株,用BSP法检测HNF4αP1启动子区甲基化程度,用实时RT-PCR法检测HNF4αP1 mRNA的表达.用TGF-β1处理6种人肝癌细胞株,用实时RT-PCR法检测HNF4αP1 mRNA的表达.分别用5-AZA-CdR、TGF-β1、5-AZA-CdR联合TGF-β1处理FOCUS细胞株,用实时RT-PCR法检测HNF4αP1 mRNA的表达.采用f检验进行统计学分析.结果 在20份人肝癌和癌旁组织中,13份肝癌组织的HNF4αP1 mRNA相对表达量低于癌旁组织(f=2.350,P＜0.05).HepG2、Huh-7、Hep3B中的HNF4αP1 mRNA相对表达量较高,SMMC-7721、BEL-7405、FOCUS中则相对较低.HepG2、Huh-7、Hep3B中HNF4αP1启动子区甲基化程度较低,SMMC-7721、BEL-7405、FOCUS中则较高.随着5-AZA-CdR浓度上升(分别为0、0.1、1.0、2.5 μmol/L),FOCUS的HNF4αP1启动子甲基化程度逐渐降低(分别为61％、46％、32％、27％),而HNF4αP1 mRNA相对表达量则逐渐增加(分别为[(9.661±0.336)×10-7、(2.001±0.432)×10-6、(3.689±0.714)×10-6、(4.732±2.451)×10-6].经TGF-β1刺激后,启动子区甲基化程度较低的HepG2、Huh-7、Hep3B的HNF4αP1 mRNA相对表达量下调(t=12.994、8.441、9.032,P均＜0.01),启动子区甲基化程度较高的SMMC-7721、BEL-7405、FOCUS的HNF4αP1 mRNA相对表达量变化差异均无统计学意义(P均＞0.05).经5-AZA-CdR处理的FOCUS细胞株的HNF4αP1 mRNA相对表达量[(4.972±0.035)×10-6]高于空白对照组[(1.411±0.104)×10-6],差异有统计学意义(t=13.212,P＜0.01).经5-AZA-CdR联合TGF-β1处理的FOCUS细胞株的HNF4αP1 mRNA相对表达量[(1.181±0.132)×10-6]低于单用5-AZA-CdR处理组[(4.972±0.035)×10-6],差异有统计学意义(t=13.873,P＜0.01).结论 肝癌组织中HNF4αP1表达水平下调.DNA甲基化可调控HNF4αP1在人肝癌细胞株中的表达.HNF4αP1启动子区甲基化可抑制TGF-β1对HNF4αP1表达的调节作用.     

肝细胞核因子4α对肝肿瘤细胞功能基因表达的影响

目的利用AdEasy系统构建共同表达人肝细胞核因子4α（HNF4α）和绿色荧光蛋白（GFP）的复制缺陷型重组腺病毒——AdHNF4α，体外感染人肝肿瘤细胞株，观察HNF4α表达上调对肝肿瘤细胞的肝细胞功能基因表达的影响。方法通过逆转录（RT）-PCR方法获取目的基因HNF4αcDNA片段，利用腺病毒载体AdEasy系统构建腺病毒质粒pAdHNF4α，经293细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒AdHNF4α；将AdHNF4α体外感染人肝肿瘤细胞株HepG2和Hep3B，通过RT—PCR、Western印迹法检测HNF4α在上述细胞中的表达；同时观察外源导人HNF4α对肝肿瘤细胞的肝细胞功能基因表达的影响。结果连接、重组后通过酶切和测序法筛选出病毒质粒pAdHNF4α；经293细胞包装，4d后观察到GFP明显表达，反复扩增最终获得约1×10^10efu／ml滴度的重组腺病毒AdHNF4α；AdHNF4α体外感染人肝肿瘤细胞72h后，有约90％以上的细胞表达GFP，HNF4αmRNA表达明显上调，蛋白表达分别增加3．4倍（HepG2）和5．2倍（Hep3B）；同时肝细胞相关功能基因包括载脂蛋白、细胞色素P450家族、谷氨酰胺合成酶、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶及葡萄糖-6-磷酸酶mRNA表达均明显上调，且肿瘤细胞凋亡率也明显增加。结论利用重组腺病毒载体可将外源HNF4α基因导入肝肿瘤细胞并维持高效表达，同时正常肝细胞重要功能基因表达亦增强，肿瘤细胞生物学特性明显改善，这将为基因修饰移植肝细胞研究提供新思路。