旋毛虫钙网蛋白的表达和生物学特性鉴定

目的 克隆表达旋毛虫钙网蛋白(TsCRT),并对其生物学特性进行鉴定。方法 通过RT-PCR扩增TsCRT基因,构建重组质粒pMD19T-TsCRT,测序正确后亚克隆至表达载体pQE80L,构建重组表达载体pQE80L-TsCRT,转化大肠埃希菌BL21(DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过Western blot、qPCR和免疫荧光试验(IFT)鉴定rTsCRT的反应原性及其在不同虫期的表达与组织定位,通过动物免疫试验观察rTsCRT的免疫原性。结果 成功构建重组表达载体pQE80L-TsCRT,转化DE3后经IPTG诱导表达相对分子质量为47×10³的rTsCRT蛋白。用纯化的rTsCRT免疫小鼠3次,血清抗体效价达1∶10⁵。Western blot显示,rTsCRT可被抗rTsCRT血清和旋毛虫感染小鼠血清识别。qPCR检测显示,TsCRT在旋毛虫肌幼虫、肠道感染性幼虫、成虫和新生幼虫期均有转录和表达。IFT试验显示,TsCRT主要定位在旋毛虫的表皮和胚胎中。结论 TsCRT在旋毛虫不同虫期均有表达,重组...     

智能手机在新生儿领域的应用进展

智能手机在新生儿科等领域的应用取得了长足进步。智能手机具有便携、成本低、操作简单、应用处理程序强大等优势, 结合相应的医疗应用程序可实现快速、准确监测新生儿疾病, 对新生儿科各种疾病的早期防治具有重要意义。本文将对基于智能手机的各种辅助技术在新生儿领域的应用进行综述。     

旋毛虫新生幼虫可溶性抗原的免疫蛋白组学分析

目的 鉴定能被旋毛虫感染血清识别的新生幼虫蛋白，为抗新生幼虫疫苗筛选候选抗原。方法 从感染旋毛虫的BALB/c小鼠肠道收集成虫，培养后收集新生幼虫，制备新生幼虫可溶性性抗原，通过蛋白质免疫印迹（Western blotting）筛选出能被旋毛虫感染小鼠血清识别的新生幼虫可溶性抗原蛋白带进行液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）鉴定，并与Uniprot数据库中的旋毛虫数据进行比对，利用生物信息学在线网站分析所鉴定的旋毛虫蛋白的理化性质，使用WEGO在线软件对匹配的蛋白进行基因本体（GO）分类。收集旋毛虫肌幼虫、肠道感染性幼虫（感染后6 h）、成虫（感染后2 d）和新生幼虫等不同发育期的虫体，提取虫体总RNA，反转录为cDNA。qPCR扩增旋毛虫C型凝集素（CTL）、钙网蛋白（CRT）、锌指蛋白（ZFP）和丙酮酸激酶（PK）基因，以甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）基因为内参，以肌幼虫的相对转录水平为对照，比较4个旋毛虫基因在不同发育期的相对转录水平。不同发育期相对转录水平的比较采用单因素方差分析。结果 Western blotting结果显示，新生幼虫可溶性抗原的11条蛋白条带中有4条被...