弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体的构建及筛选

目的 构建弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体，建立基因敲除突变株，为进一步探讨SAG3功能和弓形虫侵入宿主细胞机制提供可行的研究方法。方法 用基因克隆方法将SAG31．53kb和2．81kb两个同源序列分别插入TUB5／CAT质粒中，构建置换型打靶载体，氯霉素乙酰转移酶(CAT)抗性基因作为筛选标记，采用电转移转染细胞方法进行基因打靶，建立突变型的弓形虫株，采用PCR、酶切分析和Southern Blot杂交方法筛选鉴定。结果 构建了弓形虫RH株5’SAG3-T15135／CAT-3’SAG3置换型载体，获得了敲除SAG3基因的弓形虫突变株，建立基因敲除突变株，获得了阳性的筛选克隆，经鉴定证明基因打靶结果准确。结论 通过构建基因打靶载体，可有目的地敲除弓形虫膜抗原基因，为进一步研究弓形虫侵入机制，探讨弓形虫病防治提供可行的方法。