新生期树鼩接种人乙型肝炎病毒的长期实验观察

目的 观察新生期树鼩接种HBV后体内HBV感染标志物的长期动态.方法 6只树鼩于新生期接种人HBV DNA阳性血清,每4-6周抽血1次和每6～12周做肝活体组织检查1次,应用巢式聚合酶链反应(nPCR)、荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)、Southern blot、酶联免疫吸附试验和免疫组织化学染色等方法动态观察血清和肝组织中HBV感染标志物的消长,用电镜寻找肝组织内的HBV颗粒和用光镜观察肝组织病理变化.结果 新生期树鼩接种后48周,3只动物(1、2和6号)血清和肝组织标本经多对引物进行的nPCR,均稳定显示HBV DNA阳性,肝组织HBVcccDNA阳性;FQ-PCR显示血清和肝组织HBV DNA的拷贝数分别为103-104/ml和每微克肝组织总DNA 107～108拷贝;Southern blot检测显示肝组织存在HBV复制中间体HBV cccDNA和HBV单链DNA;酶联免疫吸附试验检测显示血清HBsAg持续阳性;免疫组织化学染色可见数量逐步增多的HBsAg阳性肝细胞.其中的1号动物至接种后2年每微克肝组织总DNA仍可测得107～108拷贝的HBV DNA,电镜下可见疑似HBV颗粒.另3只动物除nPCR显示肝组织HBV DNA阳性条带和FQ-PCR显示低拷贝数(每微克肝组织总DNA103拷贝)HBV DNA外,其余的HBV感染标志物均为阴性或一过性阳性.结论 新生树鼩能够长期感染HBV,并且HBV能够在树鼩体内稳定复制和长期存在.     

胸腺素β10在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨人肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者组织胸腺素β10 (Thymosin beta-10,Tβ10) mRNA的表达及其临床意义.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测70例HCC患者癌组织、癌旁肝组织及18例正常肝组织中Tβ10 mRNA的表达情况,分析Tβ10 mRNA表达水平与肝癌患者的临床分期、有无术后复发、有无肝外转移、有无门静脉癌栓、肿瘤个数、肿瘤直径、血清AFP水平和病理分级等指标的关系.结果 Tβ10 mRNA在正常肝组织(1.30±0.53)及癌旁肝组织(1.21±0.50)中的表达水平明显高于在HCC组织(1.01±0.41)中的表达水平(P＜0.05),而在正常肝组织及癌旁肝组织中的表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).Tβ10 mRNA在人HCC组织中的表达与门静脉癌栓、肿瘤个数及肿瘤直径明显相关(P＜0.05),而与临床分期、肝外转移及术后复发、血清AFP 水平及分化程度无明显关系(P＞0.05).结论 Tβ10 mRNA在HCC组织中低表达,可能与HCC的发生、发展的早期阶段有关.     

正肝方影响大鼠癌前病变肝组织γ-谷氨酰转移酶和谷胱甘肽S-转移酶-π阳性灶的对比研究

[目的]探讨正肝方对黄曲霉毒素B1（AFB1）诱发的大鼠癌前病变肝组织γ-谷氨酰转移酶（GGT）、谷胱甘肽S-转移酶-π（GST-P）阳性灶的影响。[方法]Wistar大鼠100只随机分为4组：模型组30只、正肝方小剂量预防（小剂量）组30只、正肝方大剂量预防（大剂量）组30只、正常大鼠对照（正常）组10只。除正常组外,先后用AFB1和2-乙酰氨基芴（2-AAF）处理各组大鼠造模。大、小剂量组在造模期间,将正肝方水剂（0．6g／ml,0．3g／ml）按10ml／kg分别灌胃;模型组用无菌蒸馏水10ml／kg灌胃。8周后处死大鼠,肝组织取材。组织化学法做肝组织GGT染色、免疫组化法做肝组织GST-P染色,电脑图像分析系统测量GGT和GST-P阳性灶的数量、大小。[结果]大剂量组大鼠肝组织GGT阳性灶为（10．91±4．25）个／cm^2,灶总面积为（2．94±1．52）mm^2／cm^2;GST-P阳性灶为（24．75±10．99）个／cm^2,灶总面积为（4．80±2．75）mm^2／cm2,均显著低于模型组（P〈0．01）。[结论]正肝方能减少AFB1诱发的大鼠癌前病变肝组织GGT和GST-P阳性灶的数量和大小,对AFB1诱发的肝癌前病变具有一定的预防作用。     

表皮型脂肪酸结合蛋白在跨种属肝癌组织中的表达

目的 应用跨种属肿瘤关键基因筛选策略,从已报道的大量肝癌相关基因中筛选、定位出影响肝癌发生和发展的关键分子.方法 结合本课题组的前期实验数据及国内外文献数据,建立肝癌差异表达分子的跨种属数据集;对首批筛选出的候选分子表皮型脂肪酸结合蛋白(E-FABP),应用RT-PCR和Western blot技术,分别验证其在人、树鼩和大鼠的肝癌、癌旁及正常肝组织中mRNA和蛋白水平的差异表达情况.实验数据以均数±标准差((x)±s)表示,采用单因素方差分析. 结果 初步建成跨种属肝癌差异表达数据集,RT-PCR检测结果显示E-FABP mRNA在人肝癌及其癌旁组织和正常肝组织中的相对表达量分别为0.87±0.14、0.64±0.12和0.67±0.07;在树鼩肝癌及其癌旁组织和正常肝组织中的相对表达量分别为0.87±0.25、0.73±0.19和0.68±0.19;在大鼠肝癌及其癌旁组织和正常肝组织中的相对表达量分别为0.97±0.22、0.78±0.16和0.80±0.13.人、树鼩和大鼠肝癌组织中的E-FABP mRNA表达水平均显著高于癌旁和正常肝组织,F值分别为20.910、3.807、4.482,P值均＜0.05,差异有统计学意义.Wesern blot检测结果显示E-FABP在人、树鼩和大鼠肝癌组织中的蛋白表达水平均较癌旁和正常肝组织显著上调.结论 跨种属肿瘤关键基因筛选策略可能有助于发现肝癌关键基因,E-FABP有可能是影响肝癌发生和发展的重要分子之一.     

凝血因子Ⅱ mRNA在人肝细胞癌中表达与临床指标的关系

目的 探讨凝血因子ⅡmRNA在人肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其与HCC临床指标的关系.方法 用荧光定量PCR技术检测55例HCC患者凝血因子Ⅱ mRNA的表达,分析目的基因表达量与临床病理指标之间的关系.结果 55例HCC中凝血因子Ⅱ mRNA的相对表达量为(1.184±0.535),凝血因子Ⅱ mRNA在癌组织与...     

正肝方对大鼠癌前病变肝组织细胞周期蛋白D1及依赖性激酶4的影响

[目的]观察正肝方对黄曲霉毒素B1（AFB1）诱发的大鼠癌前病变肝组织细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、细胞周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）的影响。[方法]Wistar大鼠100只随机分为4组：模型、正肝方小剂量、正肝方大剂量组各30只、正常组10只。除正常组外,先后用AFB1和2-乙酰氨基芴（2-AAF）处理各组大鼠造模。正肝方大、小剂量组在造模期间,将正肝方水剂（0.6、0.3 g/ml）按10 ml/kg分别灌胃;模型组用无菌蒸馏水按10 ml/kg灌胃。8周后处死大鼠,肝组织取材。分别采用免疫组化法和RT-PCR法,检测大鼠肝组织中Cyclin D1、CDK4蛋白和mRNA表达。[结果]模型组Cyclin D1、CDK4染色阳性细胞百分率（LI）和表达强度（PU）最高,Cyclin D1、CDK4mRNA表达水平也最高（P〈0.01）。正肝方能降低大鼠癌前病变肝组织Cyclin D1、CDK4蛋白和mRNA的异常高表达（P〈0.01或〈0.05）,且呈现出一定的量效关系。[结论]正肝方能通过下调Cyclin D1、CDK4异常表达,改善细胞周期G1~S期调控点失控,从而减缓肝细胞异常增生。     

正肝方对黄曲霉毒素B1诱发的肝癌前病变大鼠肝功能的影响

目的：观察正肝方对黄曲霉毒素（AFB1）诱发的肝癌前病变大鼠肝功能的影响。方法：Wistar大鼠100只随机分为4组：模型对照组30只，正肝方小剂量预防组30只、正肝方大剂量预防组30只、正常大鼠对照组10只。除正常对照组外，先后用AFB1和2-乙酰氨基芴（2-AAF）处理各组大鼠造模。正肝方大、小剂量预防组在造模期间，将不同浓度正肝方水剂（0．6g／ml，0．3g／ml）分别灌喂大鼠；模型对照组用无菌蒸馏水灌喂大鼠。8周后处死大鼠、采血，肝组织取材。采用酶动力学法测定大鼠血清ALT、AST、ALP、GGT活性，亚硝酸钠氧化法测定血清TBil，溴甲酚绿比色法测定Alb。结果：AFB，可导致大鼠血清ALT、AST、GGT、TBil水平显著升高，Alb水平下降。正肝方能有效降低AFB，导致的大鼠血清高ALT、AST、ALP、GGT、TBi1水平。结论：AFB1可导致大鼠严重肝损伤，具有很强的肝毒性。正肝方具有抗AFB。导致的肝损伤，保护肝功能的作用。     

甲状腺乳头状癌颈部Ⅱb区淋巴结转移特点及相关因素分析

目的探讨甲状腺乳头状癌颈部Ⅱb区淋巴结转移规律及相关因素分析。方法回顾性分析2006年1月至2013年1月在广西医科大学附属肿瘤医院接受患侧同期颈淋巴结清扫术的甲状腺乳头状癌患者的临床资料,共纳入能够获得Ⅱa、Ⅱb、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ及Ⅵ区淋巴结转移情况的病人资料共61例,其中3例为双侧甲状腺乳头状癌伴双侧颈部淋巴结转移,共计算64侧颈各区淋巴结转移率,并分析各个临床指标,包括性别、年龄、T分期、颈部各区淋巴结转移率等与11b区转移的相关性。结果61例病人,共64侧颈Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ及Ⅵ区淋巴结转移率分别为34．4％（22／64）、43．8％（28／64）、42．2％（27／64）、25．0％（16／64）和48．4％（31／64）,其中Ⅱa和Ⅱb区淋巴结转移率分别是25．0％（16／64）和9．4％（6／64）。多因素分析显示Ⅱa区淋巴结转移是Ⅱb区淋巴结转移的独立危险因素。结论甲状腺乳头状癌颈部Ⅱb区淋巴结转移率较低,如果出现Ⅱa区淋巴结转移则Ⅱb区应行常规清扫。     

正肝方对黄曲霉毒素B_1诱发的大鼠癌前病变肝组织胰岛素样生长因子-Ⅱ表达的影响

目的:观察正肝方对黄曲霉毒素B1(AFB1)诱发的大鼠癌前病变肝组织胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)表达的影响。方法:100只Wistar大鼠随机分为4组:模型对照组30只、正肝方小剂量预防组30只、正肝方大剂量预防组30只、正常大鼠对照组10只。除正常对照组外,先后用AFB1和2-乙酰氨基芴(2-AAF)处理各组大鼠造模。正肝方大、小剂量预防组在造模期间,将不同浓度正肝方水剂(0.6g/ml,0.3g/ml)按10ml/kg分别灌喂大鼠;模型对照组用无菌蒸馏水按10ml/kg灌喂大鼠。8周后处死大鼠,肝组织取材。分别采用免疫组化染色法和RT-PCR法,检测肝组织中IGF-Ⅱ蛋白和mRNA表达。结果:模型组肝组织IGF-Ⅱ染色阳性细胞百分率(LI)和表达强度(PU)最高,并且IGF-ⅡmRNA表达水平也最高(P0.01)。正肝方能降低大鼠癌前病变肝组织IGF-Ⅱ蛋白和mRNA的异常高表达(P0.01),且呈现出一定的量效关系。结论:正肝方能通过下调IGF-Ⅱ异常高表达,从而减弱IGF-Ⅱ通过自分泌生长刺激机制导致的AFB1启动的肝细胞异常增生。     

CCT亚基γ在人肝细胞癌组织中的表达及意义

目的:探讨CCT亚基γ在人肝细胞癌组织中的表达和意义.方法:用免疫组织化学一步法检测35例肝癌及癌旁组织、12例正常肝组织中的CCT亚基γ表达.结果:CCT亚基γ在肝癌组织的阳性表达率为88.57%(31/35),在癌旁组织中的阳性表达率为62.86%(22/35),在正常肝组织中的阳性表达率为41.67%(5/12).CCT亚基γ在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织和正常肝组织,具有显著性差异(P<0.05).CCT亚基γ的表达与肝癌患者年龄、乙肝表面抗原、有无门静脉癌栓、AFP水平、肿瘤直径及临床分期均不相关(P>0.05),但CCT亚基γ的过度表达与肝癌患者肿瘤细胞分化程度相关(P<0.05),肿瘤细胞分化程度越低,CCT亚基γ的表达越高.结论:CCT亚基γ在人肝细胞癌组织中表达增高可能与肝细胞的癌变有关.