抗肠出血性大肠杆菌O157:H7 EspA单克隆抗体的制备及其特性鉴定

目的:制备抗肠出血性大肠杆菌O157:H7EspA单克隆抗体(mAb)。方法:以重组EspA蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术并且联合间接ELISA筛选只针对EspA的杂交瘤细胞株。以Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定mAb的Ig亚类,ELISA、Western blot及免疫荧光技术鉴定抗体的免疫学特性。结果:获得3株稳定分泌抗EspA杂交瘤细胞的mAb,Ig亚型分别为IgG1κ型、IgG2aκ型、IgG2bκ型。Western blot和免疫荧光分析表明,3株杂交瘤细胞制备的mAb腹水都能特异地结合重组EspA蛋白和识别O157:H7的EspA成分。结论:成功地制备了抗肠出血性大肠杆菌O157:H7EspA的mAb,并证明了该mAb的生物学活性,为深入研究肠出血性大肠杆菌O157:H7的致病机制提供新的手段。     

肠道病原体疫苗研究进展(续)

肠道感染每年在世界范围内造成约170万～250万人死亡,居所有疾病的第三位.引起肠道感染的病原体主要有病毒(如肠道腺病毒、星状病毒、人杯状病毒和轮状病毒)和细菌(如空肠弯曲菌、致病性大肠杆菌、志贺菌、伤寒沙门菌和霍乱弧菌).目前伤寒和霍乱疫苗的效力较好,但尚无有效预防人杯状病毒、弯曲菌、产肠毒素大肠杆菌和志贺菌的疫苗.新型口服轮状病毒疫苗已得到研发,并准备申请上市.本文综述了预防肠道病毒或细菌性传染病的疫苗的研发状况.     

医学检验专业新生研讨课对职业规划讨论的实践与思考

正由于国家教育部对医学检验专业本科教育的修订改革,全国各普通高校自2013年起按四年制理学学士培养方案安排招生培养工作。作为目前全国唯一的五年制本科医学检验专业,如何应对学制的改革,在转变中培养人才是当务之急。通过新生研讨课的方式,对本校五年制检验本科专业新学员开展未来职业规划的探讨,初探本专业新生研讨课的教学改革实践,分析开设新生研讨课的基本思路,探讨并总结能够激发学     

MLST分析在病原微生物基因分型应用中的研究进展

鉴别细菌的方法有很多,其中有针对其表型、特异性的血清型的方法;还有单克隆抗体等免疫学分型,(这些方法的缺点是其有限的抗原不能够代表全基因组的,不能预测分型反应)。然而随着分子生物学技术的不断发展,微生物的基因分型已占据了十分重要的地位。尤其是病原微生物在其存活     

幽门螺杆菌球形体回复原形的实验研究

目的对幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）球形体进行体内、外回复原形的比较研究,揭示其潜在的传播途径。方法在布氏肉汤的基础上设计了4种Hp再生培养基,对Hp螺旋体、原生质体及球形体进行体外培养;同时采用30只蒙古沙土鼠（Mongolian gerbil）进行体内感染定植实验,对感染小鼠胃粘膜进行Hp定量培养和组织学检测。结果Hp球形体在4种再生培养基中均未能回复生长;而在感染小鼠的体内却观察到了Hp球形体的回复定植。Hp螺旋体感染组在小鼠胃内的定植密度较高,且胃粘膜下可见大量炎症细胞浸润;而球形体感染组并未见到小鼠胃粘膜组织的明显炎症损伤,且仅有少量回复的螺旋体定植。结论Hp球形体作为一种低水平代谢休眠体,代谢活性及毒力均有所减弱,但仍具有潜在的致病性。本研究支持部分Hp球形体具有活力但体外不能培养成活这一假说,提示＂粪-口＂传播应引起更多的关注。     

肠出血性大肠杆菌O157∶H7志贺毒素ⅡA1亚单位单克隆抗体的制备和生物学特性鉴定

目的制备出高效价的抗志贺毒素ⅡA1亚单位(STX2A1)的单克隆抗体。方法以重组GST-STX2A1融合蛋白作为免疫抗原,免疫BALB/c小鼠,运用细胞杂交瘤技术制备,以天然STX2毒素为筛选抗原,采用间接ELISA法筛选产生针对STX2A1的单克隆抗体细胞株;以体内诱生法产生腹水,并采用Protein A-Sepharose柱对其纯化,快速定性试纸鉴定McAb的Ig亚类,采用间接ELISA相加实验鉴定抗原识别表位。结果获得3株产生针对STX2A1的单克隆抗体细胞株STX2-1A3、STX2-1E10、STX2-3A7,Ig亚类分别为IgG1λ型、IgG1κ型和IgG3κ,亲和力常数分别为5.76×109、1.21×109和3.97×108。结论成功制备3株稳定分泌抗STX2A1的杂交瘤细胞株,产生的单克隆抗体特异性好,亲和力高,能与天然STX2A亚单位反应。     

幽门螺杆菌Cag毒力岛

幽门螺杆菌有一长约４０ｋｂ的毒力岛，名为细胞毒素相关基因，编码ＣａｇＡ等毒力因子。具有Ａａｇ毒力岛的幽门螺杆菌在临床上的表现出与胃炎、胃溃疡及胃癌更为密切的关系。本文就幽门螺杆菌的Ｃａｇ毒力岛作一介绍。     

幽门螺杆菌Cag毒力岛

幽门螺杆菌有一个长约40kb的毒力岛,名为细胞毒素相关基因(Cag),编码CagA等毒力因子。具有Cag毒力岛的幽门螺杆菌在临床上表现出与胃炎、胃溃疡及胃癌更为密切的关系。本文就幽门螺杆菌的Cag毒力岛作一介绍。     

临床免疫学与免疫检验课程设计性实验教学的探索与实践

以“酶联免疫吸附试验检测乙肝表面抗原方法的建立”设计性实验的实施过程为例对临床免疫学与免疫检验课程设计性实验教学中的选题、实施、总结及教学方法进行了探索与实践,进一步阐明了设计性实验对学生实践能力、观察能力、分析能力、解决问题能力、创新能力培养的重要作用。     

免疫磁分离及免疫比浊分析对福氏志贺菌的自动快速定量检测

目的 以SPA包被的磁珠和富含SPA的金黄色葡萄球菌分别与福氏志贺菌的多抗血清结合,制备福氏志贺菌特异的多抗磁珠和抗体致敏的金黄色葡萄球菌作为协同凝集试剂与免疫比浊试剂,利用免疫比浊分析探索其在福氏志贺菌自动快速定量检测中的初步应用.方法 福氏志贺菌F1a免疫日本大耳白兔制备多抗血清,磁珠包被SPA后再与多抗偶联,制成多抗免疫磁珠.以该磁珠捕获模拟标本的福氏志贺菌,接种MH平板37℃培养18～24 h,菌落计数后计算免疫磁珠的特异富集作用.富含SPA的金黄色葡萄球菌(No 1800株)经甲醛灭活后,与福氏志贺菌的多抗血清结合,制备特异抗体致敏的金黄色葡萄球菌,作为协同凝集试剂和自动定量检测的免疫比浊试剂,在日立7060全自动生化分析仪编制程序进行自动检测并进行初步的方法学评价.结果 福氏志贺菌Fla免疫日本大耳白兔获得了高质量的多抗血清,特异性好,凝集效价达1:320;制备多抗免疫磁珠对福氏志贺菌具有一定的富集作用,菌落计数显示磁珠处理的细菌捕获效率约为30%;抗体致敏的金黄色葡萄球菌,作为协同凝集试剂和自动定量检测的免疫比浊试剂,在玻片上能与待测福氏志贺菌产生明显的凝集现象,在日立7060全自动生化分析仪上定量检测灵敏、特异、线性良好.结论以福氏志贺菌的多抗血清分别致敏SPA包被的磁珠和富含SPA的金黄色葡萄球菌,制备特异的多抗磁珠对福氏志贺菌有一定的特异捕获与富集作用,抗体致敏的金黄色葡萄球菌作为协同凝集试剂与免疫比浊试剂对福氏志贺菌的自动、快速、定量检测具有较好的效果,为病原菌的快速诊断和自动定量分析提供了新的思路.