同种异体心肌细胞移植对大鼠梗死心肌修复作用的研究

目的观察同种异体心肌细胞移植对心肌梗死大鼠心肌的修复作用和心功能的影响。方法选取110只雄性SD大鼠用于制作心肌梗死模型,术后2周共存活53只,死亡57只。从53只建模成功的SD大鼠中随机选取30只分为3组（每组10只）：心肌细胞移植组（A组）、培养液基质注射组（B组）和单纯心肌梗死组（C组）。A组将原代培养的乳鼠心肌细胞移植到心肌梗死区和梗死边缘区;B组采用与A组同样方法在心肌梗死区和梗死边缘区注射细胞培养液基质;C组不做任何处理。2周后观察A组移植细胞存活情况。采用Langendorff装置检测各组左心室收缩压（LVSP）、左心室舒张末压（LVEDP）、左心室内压最大上升速率（＋dp/dtmax）、左心室内压最大下降速率（-dp/dtmax）和左心室做功（LVW）。结果A组与B组及C组相比,LVSP分别从（47.9±4.6）mmHg和（47.6±3.9）mmHg升高到（52.0±3.0）mmHg（P〈0.05或P〈0.01）;LVEDP分别从（18.8±2.7）mmHg和（24.7±5.8）mmHg降低到（15.8±1.5）mmHg（P〈0.05或P〈0.01）;＋dp/dtmax分别从（1 900±198）mmHg/s和（1 737±347）mmHg/s升高到（2 260±337）mmHg/s（P〈0.05）。3组间-dp/dtmax和LVW比较差异无显著性（P〉0.05）。A组大鼠的心肌中均发现移入的乳鼠心肌细胞,经5-溴脱氧尿核苷（BrdU）标记的免疫组化染色和抗心肌肌钙蛋白I抗体（anti-cTn I）标记的免疫组化染色证明移入的细胞是心肌细胞。结论异体移植的乳鼠心肌细胞可在心肌梗死区存活,并能改善心功能,尤其是改善左心室收缩功能。     

不同病因心衰患者血浆脑钠素水平的影响

目的　观察不同病因心衰患者血浆脑钠素(BNP)水平的变化 ,探讨BNP在心衰发病机制中所起的作用以及 β -受体阻滞剂对心衰患者BNP水平的影响。 方法　采用酶联免疫吸附试验 (ELISA)法测定心衰患者血浆BNP水平。结果　心衰组BNP水平与正常对照组相比显著升高(P <0 0 1)。重度心衰心功能Ⅲ、Ⅳ级BNP水平明显高于心功能Ⅱ级。BNP变化的幅度在冠心病、扩张型心肌病不同病因心衰中有所不同 ,冠心病心衰BNP水平升高更明显 (P <0 0 1)。心衰患者中常规治疗组与非 β -受体阻滞剂治疗组相比 ,美托洛尔和卡维地洛治疗组BNP水平明显降低 (P <0 0 5 )。结论　心衰患者血浆BNP水平显著升高 ,BNP水平与心衰严重程度呈正相关 ,冠心病心衰BNP水平较扩张型心肌病组明显升高 ,提示冠心病心肌缺血损伤可能进一步促进BNP分泌。美托洛尔和卡维地洛均能下调心衰BNP水平 ,可能是不同β -受体阻滞剂逆转心衰神经激素过度激活的共同作用机制之一。     

定量检测bcr-abl mRNA在慢性粒细胞白血病患者异基因造血干细胞移植后的意义

本研究确切了解CML患者异基因造血干细胞移植后bcr-abl mRNA的变化情况,为临床诊断早期复发提供实验依据。用实时荧光定量PCR方法检测15例慢性粒细胞白血病(CML)患者异基因造血干细胞移植前后78份外周血和骨髓标本的bcr-abl mRNA水平。结果表明,移植前患者的bcr-ablmRNA水平较高,中位数为29.303%;移植后1个月时检测bcr-abl mRNA水平较移植前大幅度降低,中位数为0;移植后1年内,连续多次检测bcr-abl mRNA水平,变化模式不一致,但6个月后的总体水平较6个月前明显降低,移植1年以上的受者绝大多数bcr-abl mRNA检测不到,或偶可检测到,但水平极低(0.007%、0.004%和0.021%),所检测受者的骨髓和外周血像均正常;同期骨髓与外周血bcr-abl水平无明显差异,且变化趋势一致。结论:CML患者移植后早期bcr-abl水平变化起伏较大,连续动态检测可明确其变化趋势,有助于判断移植效果、指导临床治疗,但6个月前检测到bcr-abl存在并不提示疾病复发;检测外周血bcr-abl或许更适于临床上对患者的随访。     

表达载体介导的反义RNA抑制人巨噬细胞移动抑制因子的表达

目的：研究表达载体介导的反义RNA对人巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达的抑制作用。 方法:用亚克隆技术构建可转录MIF反义RNA的真核表达载体pcDNA3-antiMIF。用lipofectamine2000分别将pcDNA3、pcDNA3-antiMIF转染可表达MIF的HEK293(293-MIF)细胞，用Real-time定量PCR鉴定MIF mRNA表达水平。将pcDNA3-antiMIF转化人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)，建立可表达MIF反义RNA的HUVECs(HUVECs-antiMIF)细胞。将MIF的真核表达载体pSecTag-MIF转染HUVECs-antiMIF，用Real-time定量PCR鉴定MIF mRNA的表达水平。 结果:正确构建了MIF反义RNA的表达载体pcDNA3-antiMIF。MIF 反义RNA对293-MIF细胞中MIF表达的抑制水平达32%（P<0.05）。建立稳定表达MIF反义RNA的HUVECs-antiMIF细胞株。HUVECs-antiMIF中MIF的表达受到抑制，表达水平降低40%（P<0.05）。 结论:表达载体介导的反义RNA能有效地抑制MIF的表达，建立了稳定表达MIF反义RNA的HUVECs。     

哮喘患儿吸入糖皮质激素对骨代谢影响

目的　探讨哮喘患儿吸入糖皮质激素 (IGs)对骨代谢影响。方法　对 5 0例 5～ 12岁连续吸入IGs 2年哮喘患儿 ,于吸入前 ,0 .5、1、1.5、2年分次进行血清钙、磷、骨源性碱性磷酸酶 (BALP)、骨钙素 (OC)水平监测 ,并进行身高生长速度测定。其中观察I组 2 7例 ,平均吸入丙酸倍氯米松 2 5 0 μg/d ;观察Ⅱ组 2 3例 ,平均吸入丙酸氟替卡松 15 0 μg/d ;正常对照组 2 2例。 结果　观察Ⅰ、Ⅱ组、对照组间分次检测的血钙、磷、BALP、OC水平均无显著差异 (P均 >0 .0 5 ) ;且各组间q检验无显著差异 (P均 >0 .0 5 )。观察Ⅰ、Ⅱ组身高生长速度分别于对照组比较 ,均无显著差异 (P均 >0 .0 5 )。结论　每日小剂量较长时间IGs对儿童骨生长发育无明显影响。     

MEF2C介导microRNA-214发挥抑制心肌细胞肥大的作用

目的:研究微小RNA-214(mi R-214)对心肌细胞肥大的调控作用及其可能的作用靶基因。方法:建立血管紧张素Ⅱ(angiotensin-Ⅱ,Ang-Ⅱ)诱导的C57BL/6乳小鼠心室肌细胞肥大模型;双萤光素酶报告基因实验检测mi R-214与潜在靶基因MEF2C 3’端非翻译区(3’UTR)的结合作用;实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western blot法分别检测MEF2C及肥厚标志物的m RNA和蛋白表达水平。结果:心肌肥厚标志物ANP、ACTA1和β-MHC,以及mi R-214的表达在Ang-II诱导肥大的小鼠心肌细胞中显著增强;双萤光素酶报告基因实验提示mi R-214与MEF2C 3’UTR相互作用,证实mi R-214可在转录水平抑制MEF2C的表达,MEF2C蛋白水平在肥大的心肌细胞中显著上调;过表达mi R-214及沉默MEF2C均能一致性地抑制Ang-Ⅱ诱导的心肌细胞中肥大标志物的表达。结论:MEF2C是mi R-214的靶基因,并介导了mi R-214发挥抑制心肌细胞肥大的作用。     

血管紧张素转换酶2基因转染对人内皮细胞MIF表达的影响

目的：探讨重组血管紧张素转换酶2（ACE2）基因转染对体外培养的人血管内皮细胞中由血管紧张素（Ang）II诱导的巨噬细胞移动抑制因子（MIF）表达的影响。方法:克隆和构建含人ACE2基因全长的重组质粒（pACE2），并将之转染入人血管内皮细胞中。分别采用实时定量PCR和Western印迹技术检测转染细胞中的MIF mRNA与蛋白表达情况。结果: Ang Ⅱ（100 nmol/L）和Ang IV（100 nmol/L）刺激后均可诱导人血管内皮细胞中MIF mRNA及蛋白表达增加（P<0.01）。pACE2基因转染可明显抑制内皮细胞中由Ang II和Ang IV诱导的MIF mRNA和蛋白表达（P<0.05）。结论: ACE2基因过表达可明显抑制人内皮细胞中炎症介质MIF的表达，提示ACE2基因具有一定的抗炎症效应。通过调节ACE2基因的活性和表达，很可能为炎症相关疾病如动脉粥样硬化治疗提供新的策略。     

人微小RNA-16（miR-16）重组腺病毒的制备和鉴定

目的制备人微小RNA-16（miR-16）重组腺病毒,研究其在人骨髓间充质干细胞（hMSCs）中的表达及对细胞周期素依赖蛋白激酶6（CDK6）表达的影响。方法从人基因组DNA中扩增miR-16前体的DNA,定向插入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV。将经PmeⅠ线性化的重组穿梭载体pAdTrack-CMV-miR-16与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化感受态大肠杆菌BJ5183,在细菌内同源重组获得重组腺病毒质粒rAdTrack-miR-16。将经PacⅠ线性化的rAdTrack-miR-16在人胚肾293细胞（HEK293）中包装并扩增出miR-16的重组腺病毒rAd-miR-16。将重组腺病毒感染hMSCs,分别检测miR-16前体和miR-16靶基因CDK6的表达。结果 pAdTrack-CMV-miR-16构建正确,在HEK293细胞中成功包装并扩增出重组腺病毒rAd-miR-16。rAd-miR-16感染的hMSCs中miR-16前体水平显著升高（P〈0.05）,CDK6mRNA的表达降低不明显,CDK6蛋白表达水平显著降低（P〈0.01）。结论成功制备了表达人miR-16的重组腺病毒,并能有效介导miR-16在hMSCs中的表达,为进行miR-16的功能研究创造了条件。     

乳头状瘤病毒抗原检出率影响因素的探讨

尖锐湿疣主要是由人乳头瘤病毒（HPV）感染引起的一种性传播疾病。据国外文献报道，它与女性生殖系上皮癌关系密切，目前，病理学的检查仍是主要手段[1]。免疫组化HPV－Ag检测，已成为诊断尖锐湿疣不可缺少的手段之一。本实验对免疫组化HPV－Ag检出率影响因素进行了探讨。材料和方法一、材料收集本院143例经组织学证实为尖锐湿疣的外检标本。二、试剂ABCKit由Vector公司生产。一抗HPV、LSABKit由DAKO公司生产。抗原恢复液为0．01mol／LpH6．0柠檬酸盐缓冲液，系自配。三、设备微波炉为NationalNN－5250型，最大输出功率700W。…