天蚕素A截短肽在大肠埃希菌中的高效表达及活性分析

将构建好的含抗菌肽天蚕素A(cecropin A,CA)截短肽CA19(36、210)1～5倍串连体的pET-31b(+)载体进行诱导表达,其表达量比单体表达明显提高.将融合蛋白用亲和层析法将其纯化,其纯度达到90%以上.纯化融合蛋白免疫BALB/c小鼠,制备了其特异的多克隆抗体.纯化串连融合蛋白用溴化氰切割成单体检测其活性,发现均具有抑菌活性.本研究为抗菌肽的基因工程制备提供了新途径.     

幽门螺杆菌蛋白芯片检测CagA、VacA在儿童相关疾病中的临床价值

目的 探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)细胞毒素相关蛋白A(Cytotoxinassociated A,CagA)、空泡毒素A(Vac lating cytotoxin A,VacA)在儿童上消化道疾病(Gastrointestinal disorders,GD)和免疫性血小板减少性紫癜(Idiopathic Thrombocytopenic Purpura,ITP)中的临床价值.方法 选择2019年1月至2019年12月就诊于江西省儿童医院GD患儿436例,其中44例消化性溃疡(Gastroduodenal ulcer,GU),98例胃炎(Chronic superficial gastritis,CSG),294例功能性消化不良组(functional dyspepsia,FD),ITP患儿138例和健康体检儿童104例,采用蛋白芯片检测各组H.pylori CagA、VacA及实验室检测指标.结果 GD组H.pylori检出率为59.86％,GD组Ⅰ型H.pylori感染率53.64％高于Ⅱ型H.pylori感染率43.29％(χ2=5.592,P=0.018).ITP组H.pylori检出率为52.89％,ITP组Ⅱ型H.pylori感染率为54.79％与Ⅰ型H.pylori菌株感染率42.47％差异无统计学意义(χ2=2.221,P=0.136).GU组CagA+高于CSG组(χ2=4.219,P=0.041)和FD组(χ2=48.723,P=0.000);CSG组CagA+显著高于FD组(χ2=36.233,P=0.000)和NC组(χ2=68.866,P=0.000);FD组CagA+高于NC组(χ2=22.387,P=0.000).GU组和CSG组以Ⅰ型菌株为主.FD组以Ⅱ型菌株为主,高于Ⅰ型菌株感染率(P<0.05).I型H.pylori感染ITP患儿CD4+T(％)、CD4+T/CD8+T低于Ⅱ型ITP患儿CD4+T(％)、CD4+T/CD8+T,差异具有统计学意义(P均<0.05),I型H.pylori感染ITP患儿CD8+T(％)显著高于Ⅱ型ITP患儿CD8+T(％)(P<0.05).I型H.pylori感染ITP患儿血清炎症指标IL-6水平显著高于Ⅱ型(t=2.167,P=0.034).结论 I型H.pylori菌株比II型H.pylori菌株毒力更强,可导致更为严重的上消化道疾病;ITP与H.pylori感染具有相关性,I型H.pylori感染ITP患儿免疫细胞功能受损更严重,体内炎症反应更剧烈.     

幽门螺杆菌蛋白芯片检测CagA、VacA在儿童相关疾病中的临床价值

目的 探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)细胞毒素相关蛋白A(Cytotoxinassociated A,CagA)、空泡毒素A(Vac lating cytotoxin A,VacA)在儿童上消化道疾病(Gastrointestinal disorders,GD)和免疫性血小板减少性紫癜(Idiopathic Thrombocytopenic Purpura,ITP)中的临床价值.方法 选择2019年1月至2019年12月就诊于江西省儿童医院GD患儿436例,其中44例消化性溃疡(Gastroduodenal ulcer,GU),98例胃炎(Chronic superficial gastritis,CSG),294例功能性消化不良组(functional dyspepsia,FD),ITP患儿138例和健康体检儿童104例,采用蛋白芯片检测各组H.pylori CagA、VacA及实验室检测指标.结果 GD组H.pylori检出率为59.86％,GD组Ⅰ型H.pylori感染率53.64％高于Ⅱ型H.pylori感染率43.29％(χ2=5.592,P=0.018).ITP组H.pylori检出率为52.89％,ITP组Ⅱ型H.pylori感染率为54.79％与Ⅰ型H.pylori菌株感染率42.47％差异无统计学意义(χ2=2.221,P=0.136).GU组CagA+高于CSG组(χ2=4.219,P=0.041)和FD组(χ2=48.723,P=0.000);CSG组CagA+显著高于FD组(χ2=36.233,P=0.000)和NC组(χ2=68.866,P=0.000);FD组CagA+高于NC组(χ2=22.387,P=0.000).GU组和CSG组以Ⅰ型菌株为主.FD组以Ⅱ型菌株为主,高于Ⅰ型菌株感染率(P<0.05).I型H.pylori感染ITP患儿CD4+T(％)、CD4+T/CD8+T低于Ⅱ型ITP患儿CD4+T(％)、CD4+T/CD8+T,差异具有统计学意义(P均<0.05),I型H.pylori感染ITP患儿CD8+T(％)显著高于Ⅱ型ITP患儿CD8+T(％)(P<0.05).I型H.pylori感染ITP患儿血清炎症指标IL-6水平显著高于Ⅱ型(t=2.167,P=0.034).结论 I型H.pylori菌株比II型H.pylori菌株毒力更强,可导致更为严重的上消化道疾病;ITP与H.pylori感染具有相关性,I型H.pylori感染ITP患儿免疫细胞功能受损更严重,体内炎症反应更剧烈.     

抗菌肽的研究进展

目前,由于抗菌素的大量使用,耐药菌株和多重耐药菌株不断增加,使抗感染治疗成为一个棘手的难题.抗菌肽(antibacterial peptides) 正是在这种形势下出现的一类具有发展潜力的新型抗菌药物.抗菌肽广泛存在于昆虫、植物、动物及人体内,是宿主产生的一类抵抗病原体感染的小分子多肽,生物天然免疫系统中的一个重要组成部分,具有相对分子量较小、热稳定、水溶性好等优点.     

Cyclopamine对肝癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制的研究

目的:探讨 sonic hedgehog(Shh)信号通路的特异性抑制剂环杷明(cyclopamine)对血清饥饿的人肝癌Hep3B细胞增殖、早期凋亡和白蛋白( albumin,ALB)、甲胎球蛋白 (α-fetoprotein,AFP)表达的影响.方法:采用WST-8法、激光共聚焦扫描显微术、FCM法、RT-PCR和电化学发光免疫法,检测血清饥饿状态下cyclopamine引起的Hep3B细胞增殖抑制、线粒体膜电位改变,以及对细胞分泌ALB和AFP的影响.结果:血清饥饿状态下cyclopamine可明显抑制Hep3B细胞的增殖.半定量测量结果显示,Hep3B细胞平均红绿荧光吸光度比值有所降低;FCM法检测结果显示,6 h后线粒体膜电位较0 h时明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).AFP mRNA及蛋白分泌水平均明显降低,但对ALB mRNA及蛋白分泌影响不明显.结论:Cyclopamine对Hep3B细胞增殖以及AFP mRNA和蛋白的分泌有明显抑制作用,同时促进线粒体膜电位的降低,提示cyclopamine具有抑制肿瘤细胞生长和促进早期凋亡发生的作用.     

CBC联合LDH对白血病、淋巴瘤骨髓侵犯诊断价值的ROC分析研究

目的探讨血细胞计数(CBC)联合乳酸脱氢酶(LDH)对白血病、淋巴瘤骨髓侵犯早期筛查的临床诊断价值,建立筛查规则。方法收集我院260例白血病、淋巴瘤骨髓侵犯患者初诊或复发时初次CBC、LDH结果,运用受试者工作曲线(ROC)分析白细胞总数(WBC)、血红蛋白(HB)、血小板(PLT)、淋巴细胞绝对值(L#)、淋巴细胞百分比(L%)、中性粒细胞绝对值(N#)、中性粒细胞百分比(N%)、单核细胞绝对值(M#)、单核细胞百分比(M%)及LDH对白血病、淋巴瘤骨髓侵犯诊断的曲线下面积(AUC),筛选出具有诊断价值的指标。分析这些指标联合诊断的灵敏度(SE)、特异性(SP)、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV),建立筛查规则。结果增高有诊断价值的指标有WBC、L#、L%、LDH、M#;减低有诊断价值的指标有N%、HB、PLT、N#。建立的CBC+LDH筛查规则如下:WBC≥20×109/L或≤2.7×109/L;HB≤60 g/L;PLT≤55×109/L或≥355×109/L;L#≥3.5×109/L;L%≥52%;M#≥0.7×109/L;LDH≥400U/L;WBC不能分类或分类不全;当WBC≥20×109/L,HB、PLT不减低,L#、L%、PLT不增高,不存在WBC不能分类或分类不全情况,则可排除白血病及淋巴瘤骨髓侵犯的可能性。该筛查规则对白血病、淋巴瘤骨髓侵犯的诊断灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为95.4%、62.5%、80.5%、89.3%。结论 CBC+LDH法优于CBC法,可作为白血病、淋巴瘤细胞骨髓侵犯的有效筛查手段。     

携抗菌肽PR39基因重组腺病毒的构建及抗胞内伤寒菌研究

目的构建抗菌肽PR39基因腺病毒表达载体,观察其在小鼠巨噬细胞RAW264.7中的表达及抗菌活性。方法PCR扩增抗菌肽PR39成熟肽基因,插入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,经PmeI线性化后与腺病毒骨架(pAdEasy-1)共转化大肠杆菌BJ5183,通过细菌内同源重组产生重组腺病毒载体(pAd-PR39)。重组腺病毒载体经PacI线性化后转染293细胞,包装出重组腺病毒(Ad-PR39)。利用重组腺病毒感染体外培养的小鼠巨噬细胞RAW264.7,采用RT-PCR和免疫细胞化学检测目的基因的表达,并对其抗菌活性进行初步检测。结果先后构建了携抗菌肽PR39基因的穿梭载体和重组病毒载体,包装出重组腺病毒,并成功感染小鼠巨噬细胞RAW264.7。感染重组腺病毒的小鼠巨噬细胞RAW264.7能有效表达抗菌肽PR39。与对照(10.8±2.1CFU/cell)相比,感染重组腺病毒的小鼠巨噬细胞RAW264.7具有更强的杀灭胞内伤寒菌的能力(7.2±1.8CFU/cell)。结论构建的重组腺病毒能够感染小鼠巨噬细胞RAW264.7并发挥抗菌作用,为抗菌肽PR39在胞内菌感染基因治疗中的应用奠定了实验基础。     

PLR、NLR、SAA和PTX3在川崎病合并冠脉损伤中的临床诊断价值

目的 探讨血小板—淋巴细胞比值(PLR）、中性粒细胞—淋巴细胞比值(NLR)、淀粉样蛋白A(SAA)、正五聚蛋白-3(PTX3)在川崎病（KD)合并冠状动脉病变（CAL）中的临床诊断价值。方法 选择2018年6月至2021年6月江西省儿童医院住院KD患儿102例（CAL组31例、NCAL组71例）,同期选取60例健康体检儿童作为健康对照组。采用电阻抗法得到NLR、PLR,免疫比浊法检测SAA,ELISA法检测PTX3。比较各指标对KD合并CAL诊断价值。结果 KD组NLR、PLR、SAA和PTX3均显著高于健康对照组（P均<0.01）;CAL组NLR、PLR、SAA及PTX3均显著高于NCAL组（P均<0.01）;NLR、SAA和PTX3诊断CAL的AUC分别为0.835、0.855和0.907,最佳临界值分别为2.14、100和8.66;PTX3+NLR联合、PTX3+SAA联合检测诊断效能优于单独检测。NLR、PTX3和SAA是KD合并CAL的独立危险因素。结论 NLR、SAA和PTX3可作为诊断KD合并CAL的良好实验室诊断指标,具有诊断效能高、敏感性好、特异性高等特...     

江西地区儿童幽门螺杆菌感染的诊断及分型研究

目的检测和分析儿童及青少年慢性胃炎、消化性溃疡、血小板减少性紫癜和其他消化道外相关疾病患者血清中幽门螺旋杆菌(Hp抗体的阳性情况;探讨不同类型Hp感染与儿童及青少年胃肠疾病发病的相关性以及蛋白芯片技术在儿童及青少年幽门螺杆菌感染诊断中的应用价值。方法应用蛋白芯片法检测2588例儿童及青少年血清标本中细胞毒素相关基因蛋白(CagA)、空泡毒素(VacA)、尿素酶(Ure)抗体的携带情况,用统计学方法分析比较各组之间阳性率的差异。结果在一定年龄范围内(5～15岁)Hp感染阳性率随年龄的增长有升高趋势(P0.01);胃炎组、溃疡组三种抗体的阳性率明显高于对照组(P0.01)。而消化道出血组抗体阳性率与对照组比较无显著差异(P0.05)。结论运用蛋白芯片技术检测Hp抗体及分型,有助于临床明确诊断、判断预后和疗效跟踪。Hp根除率与血清学分型有关,可用于判断是否对Hp进行根除治疗。方法简单易行,特异性强,对临床Hp治疗有一定指导作用。