利用双扩增聚合酶链反应检测非甲非乙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒RNA

利用丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）５’－端序列合成两对引物，建立了灵敏、特异的ＨＣＶＲＮＡ双扩增聚合酶链反应检测方法。用此方法及第二代Ａｂｂｏｔｔ酶联抗－ＨＣＶ检测试剂盒，检测了４４例非甲非乙型肝炎患者血清及１０名抗－ＨＣＶ阴性健康人。在４４例患者中，４１例（９３％）ＨＣＶＲＮＡ阳性，３６例（８２％）抗－ＨＣＶ阳性，３３例（７５％）ＨＣＶＲＮＡ、抗－ＨＣＶ全部阳性。３例ＨＣＶＲＮＡ阴性，但抗－ＨＣＶ阳性，另外，有８例抗－ＨＣＶ阴性，ＨＣＶＲＮＡ阳性。１０名健康人ＨＣＶＲＮＡ均为阴性。结果表明，大部分（９２％）抗－ＨＣＶ阳性患者带有ＨＣＶ，但为了检测所有病毒血症患者，抗－ＨＣＶ检测是不够的，利用双扩增ＰＣＲ方法检测ＨＣＶＲＮＡ对于抗－ＨＣＶ阴性患者的诊断是非常有用的。     

应用单克隆抗HBc和抗人IgM(μ链特异)检测血清抗HBcIgM试剂盒的研究

本试剂盒以自制羊抗人IgM(μ链特异)为包被抗体,鼠单克隆抗HBcIgG_3的酶结合物为指示抗体,并采用HBsAg携带者非肝炎死者肝脏提取的HBcAg。经166份病人及健康人血清1:1,000稀释后,用丹麦Dako公司和美国Sigma公司抗人IgM(μ链特异产品)包被微板进行比较,以Dako公司抗人IgM检测结果为相对标准,初步证明:自制抗人IgM与Sigma公司产品不论是相对灵敏度,相对特异性,相对预报率还是相对符合率等四个指标,X~2测定结果并无显著差别。己初步用于临床实验室诊断,结果满意。     

抗乙肝病毒核心抗体抗独特型抗体的研究 Ⅱ.制备抗人HBcAb的抗独特型抗体的探讨

为了研究抗独特型抗体对乙型肝炎免疫反应的调节作用,我们用人的多克隆抗HBc作为免疫原,制备单克隆抗独特型抗体(抗-Id)。将人HBcAb用亲和层析纯化,并经SPA-Sepharose 4B柱提取Fac片段。用4株抗正常人IgG的单克隆抗体与人HBcAb复合,制成免疫复合物,再用作免疫原,采用3种不同的免疫方案,除了采用国内外公认的抗原-抗体结合抑制试验检测外,还做     

分泌抗HBeAg单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和初步应用

应用血清纯化的HBeAg免疫BALB/c小鼠,其脾细胞与Sp 2/0骨髓瘤细胞融合,获得两株分泌抗HBe的杂交瘤细胞株(HE_(20)IB_8、HE_(21)IIG_(11))。接种同系小鼠腹腔诱生的腹水中用ELISA测定抗HBe效价达3.2～6.4×10~6。因相捕捉HBeAg、HBsAg和HBcAg特异性试验以及中和试验证明是针对HBeAg的特异性抗体。临床应用作为ELISA检测HBeAg和抗HBe试剂中的包被抗体配合人抗HBe-HRP与Abbott试剂结果非常一致。     

抗乙肝病毒前S(2)蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用

本文用聚合人血清白蛋白亲和层析柱纯化的含前S(2)-HBsAg,脾内接种BALB/c/小鼠,取其脾细胞与Sp2/0-Ag骨髓瘤细胞进行常规方法融合,以4种酶联法进行筛选,并经多次有限稀释亚克隆培养,最终选出3株为分泌抗前S(2)单克隆抗体的细胞株。再经亚克隆培养和多次传代与冻存,并用抑制酶联法检测其抗体,均为抗前S(2)抗体阳牲。接种BALB/c小鼠     

一种新的、敏感的检测HBsAg方法-嵌合抗体红细胞免疫技术的建立及初步应用(一)

近年来,随着生物检验技术及单克隆抗体的进展,建立了各种检测HBsAg的方法,其中酶联免疫吸附试验(ELISA)的敏感性已接近放射免疫试验(RIA)。但由于酶和底物易受环境因素如温度、条件等影响,ELlSA的不稳定性和局限性较大。而且传统的血凝方法和补体方法等敏感性又较低,因此需要建立一种既敏感特异又简便快速的免疫学方法,以弥补     

抗乙肝病毒核心抗体的单克隆抗独特型抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

用单克隆抗体HBc免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,筛选到1C12、2G12两株分泌抗独特型抗体的杂交瘤细胞株,经鉴定属于IgG2a亚类。经ELISA独特型结合试验,抗原—抗体结合抑制试验进行鉴定,证实为抗乙肝病毒核心     

肾综合征出血热病毒76－118株的反转录及聚合酶链反应扩增、鉴定的初步研究

用反转录和聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增了肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）７６－１１８株ＭＲＮＡ３＇－端２３７ｂｐ基因片段。制备了长臂光敏氨基已酸生物素标记的２３７ｂｐ探针。经琼脂糖电泳和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹，生物素－亲和素系统杂交和显色，对２３７ｂｐ扩增产物进行了特异性和灵敏性鉴定。ＰＣＲ技术与反转录技术相结合可用来对一些ＲＮＡ病毒进行研究和诊断，并能快速制备出质量较好的标记探针。     

分泌抗HBeAg单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立和初步应用

应用血清纯化的HBeAg免疫BALB/c小鼠,取该鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,获得两株分泌抗HBe的杂交瘤细胞系(HE_(20)1B_8,HE_(21)2C_(11))。接种同系小鼠腹腔诱生的腹水中用ELISA测定抗HBe效价达3.2×6.4×10~6。因相捕捉HBeAg,HBsAg和HBcAg特异性试验以及中和试验均证明是针对HBeAg的特异性抗体。临床应用作为ELISA检测HBeAg和抗HBe试剂包被抗体,配合人抗HBe-HRP,结果与Abbott试剂非常一致。     

单克隆抗-HBc抗体亲和层析纯化大肠杆菌合成的HBcAg转化为HBeAg的研究

本文报道了用单克隆抗-HBc抗体亲和层析柱大量纯化大肠杆菌合成的HBcAg。经单克隆抗-HBc抗体亲和层析柱一步纯化的HBcAg,它的比活性从94·12单位/mg蛋白提高到12851.40单位/mg蛋白,提高了136.54倍。纯化的HBcAg紫外光谱分析证明是单一的蛋白成分。免疫电镜观察结果证明,纯化的大肠杆菌来源的乙肝病毒核心抗原相似于肝脏来源的乙肝病毒核心抗原的典型形态和大小。 亲和层析纯化的E-HBcAg,用SDS和2-巯基乙醇处理后,纯化的E-HBcAg转化为E-HBeAg。转化的E-HBeAg能被抗-HBe抗体特异性地完全中和。而不被抗-HAV、抗-HBs、正常人血清、小牛血清中和。但是,它能部分的被纯-HBc抗体中和。