活性氧介导铁过载对正常及辐射损伤小鼠骨髓间充质干细胞的影响

目的 探讨铁过载对正常及病态骨髓间充质干细胞(MSCs)的损伤作用及其机制.方法 将40只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、铁剂组、照射组、及照射加铁剂组,给予铁剂4周.分离培养MSCs,普鲁士蓝铁染色检测MSCs内铁颗粒、流式细胞仪检测可变铁池(LIP)及活性氧(ROS)水平,CCK8检测MSCs增殖能力,油红-O染色检测MSCs成脂定向分化能力、茜素红染色检测成骨定向分化能力,实时定量-PCR(real-time PCR)检测成骨相关基因表达.结果 与对照组及照射组相比,铁剂组及照射加铁剂组MSCs内明显存在铁颗粒,LIP水平明显增高(P ＜0.05);ROS水平明显增加(P＜0.05);细胞增殖能力明显下降(P＜0.05);成骨分化能力下降(P＜0.05),向成脂细胞分化能力增强.结论 铁过载可介导ROS升高影响正常及病态骨髓MSCs的增殖、定向分化能力,降低其造血支持作用,并间接引起骨损害.     

辐射导致长期骨髓抑制的研究进展

随着接受放疗患者生存期的延长,患者发生长期骨髓抑制的概率也大幅提高。长期骨髓抑制在临床中常被忽略,随着时间延长患者病情会逐渐加重,生活质量降低。许多长期骨髓抑制患者会形成再生障碍性贫血或者骨髓增生异常综合征,严重者可引发死亡。研究资料表明,活性氧和丝裂原活化蛋白激酶p38（P38MAPK）通路在辐射诱导长期骨髓抑制中占主要作用。笔者总结了辐射导致的长期骨髓抑制的相关研究,指出了今后的研究方向。     

Vam3对辐射所致小鼠骨髓单个核细胞损伤的保护作用

电离辐射引起造血系统损伤是电离辐射损伤的主要表现之一。造血干细胞（ hematopoietic stem cell, HSC）是造血系统中一类具有自我更新与定向分化能力的细胞,电离辐射可以引起HSC损伤,导致其数目减少,体内体外自我更新及重建能力降低,进而引起骨髓的持久性损伤［1-3］。研究发现,电离辐射引起的骨髓持久性损伤主要是由于受照射后HSC内持续升高的活性氧（ reactive oxygen species,ROS）激活下游p38MAPK信号通路最终引起HSC衰老所致［4-6］。 Vam3是从山葡萄根中获得的天然二苯乙烯低聚体类化合物,在植物体内含量较低,现可以白藜芦醇为原料化学合成。研究提示, Vam3可以通过降低细胞内ROS水平进而抑制烟雾凝集物诱导的人支气管上皮细胞自噬［7］。本研究根据Vam3能够降低细胞内ROS水平这一特点,观察Vam3对辐射后的小鼠骨髓单个核细胞损伤保护作用,为探索新型辐射防护剂提供实验依据。     

E838联合环磷酰胺抗白血病L1210细胞的作用

目的 观察E838及其与化疗药物环磷酰胺(CTX)联合应用对白血病L1210细胞荷瘤小鼠的肿瘤抑制及生命延长作用。方法 以L1210荷瘤IRM-2小鼠为模型,实验分对照组、CTX组、E838组、E838+CTX组,分别检测肿瘤抑制率、骨髓有核细胞数、胸腺与脾指数、生命延长率等指标,比较各组间的差别。结果 E838治疗组瘤重明显小于对照组,联合用药组对荷瘤小鼠白血病L1210有较强抑制作用。生命延长也有提高作用。结论 E838对白血病L1210有抑制作用,与化疗药物CTX合用时,能提高疗效及机体免疫功能。     

辐射对小鼠免疫系统损伤远期影响的研究

目的:探讨4Gy 137Csγ射线一次性全身照射小鼠免疫细胞对LPS刺激反应性的远期影响.方法:将C57BL/6实验小鼠分为假照射组和照射组,照射组给予4 Gy照射.照射10周后小鼠按组别分别提前24 h和1h腹腔注射LPS( 20mg/kg),对照组注射生理盐水.取外周血进行白细胞计数及CD4、CD8、B220细胞比例检测,脾脏与胸腺称重,计算脏器指数.冲洗单侧股骨进行有核细胞计数.结果:与假照射对照组小鼠比较,照射对照组小鼠的CD4,CD8细胞比例和脾脏、胸腺指数显著升高,B细胞比例显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05).LPS刺激1h后,照射组小鼠的CD4细胞较假照射组小鼠显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).LPS24 h后,与假照射组小鼠相比,照射组小鼠CD8细胞比例显著降低,胸腺指数显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:小鼠4 Gy照射10周后,免疫系统尚未完全恢复;在接受LPS刺激后,两组小鼠反应也有差异.辐射对小鼠免疫系统损伤的远期影响有待进一步研究.     

电离辐射对小鼠脾脏B淋巴细胞损伤的研究

目的 探讨电离辐射对小鼠脾细胞活性的影响,阻断p38-MAPK通路对小鼠脾细胞的防护作用。方法 从体内、体外实验研究不同剂量电离辐射对小鼠脾细胞活性的影响,分别在照射前、后给与p38 MAPK通路阻断剂SB203580,观察对辐射损伤的防护和治疗作用。结果 在体外实验中,辐射对小鼠脾细胞活性的破坏作用与剂量正相关;体内实验表明低剂量的辐射可以提高脾细胞的活性,高剂量辐射能破坏其活性;在亚致死剂量的辐射下,照射后用SB203580对小鼠脾细胞活性的治疗作用不明显,照射前用SB203580对小鼠脾细胞活性具有较好的保护作用。结论 阻断p38-MAPK通路可以有效预防辐射对小鼠脾细胞的损伤,无明显的治疗作用。     

第三代端粒酶缺失小鼠皮肤表皮干细胞分离培养特性观察

【摘要】目的 观察第三代端粒酶缺失小鼠与野生型小鼠皮肤表皮干细胞数目及功能差异。方法 利用流式细胞术对皮肤表皮干细胞进行数目分析及分选;实时定量PCR方法检测p21基因表达;表皮干细胞克隆形成数目检测细胞自我更新能力。结果 野生型小鼠基底部表皮干细胞与基底部上层表皮干细胞比例分别为9.56% 和1.22%,在第三代端粒酶缺失小鼠中这两部分细胞比例分别为17.36% 和 2.92%;第三代端粒酶缺失小鼠p21相对表达水平为野生型小鼠的6.4倍;野生型小鼠每104 个表皮干细胞能够形成280.2个克隆,第三代端粒酶缺失小鼠每104 表皮干细胞仅能够形成29.28个克隆,以上结果均具有统计学差异（p<0.05）。结论 与野生型小鼠比较,第三代端粒酶缺失小鼠皮肤表皮干细胞出现衰老性的损伤。      

IRM-2、C57BL/6小鼠Lewis肺癌模型免疫学特性的比较研究

目的 观察IRM-2、C57BL/6小鼠肿瘤模型的免疫学特性。方法 取Lewis肺癌组织,用生理盐水稀释成2×106/ml,取细胞悬液,接种小鼠腋下,0.2ml/只,观察荷瘤鼠生存期、外周血白细胞分类及淋巴细胞分型,并与健康小鼠进行比较。结果 IRM-2荷瘤鼠的平均生存时间为25.5d,C57BL/6荷瘤鼠为24.5d,IRM-2荷瘤鼠CD4、CD8值低于IRM-2健康鼠。C57BL/6荷瘤鼠CD4、CD8值高于C57BL/6健康鼠,IRM-2小鼠的CD4/CD8比值小于1,C57BL/6比值大于1。两种荷瘤小鼠的CD11b均高于健康小鼠。结论 IRM-2小鼠CD4/CD8比值小于1,C57BL/6小鼠CD4/CD8比值大于1,IRM-2小鼠与C57BL/6小鼠免疫学功能有明显的差异。     

蔓荆子提取物对小鼠造血系统辐射损伤的防护作用

目的 探讨蔓荆子提取物对小鼠造血系统辐射损伤的防护作用。 方法 （1）体外细胞实验：提取小鼠骨髓细胞,将骨髓细胞分为对照组、蔓荆子组、照射组和蔓荆子+照射组,蔓荆子组的给药浓度为0.01 mg/ml和0.001 mg/ml,蔓荆子+照射组的给药浓度为0.001 mg/mL,照射组和蔓荆子+照射组细胞经1 Gy照射。使用酶标仪检测细胞活力,异硫氰酸荧光素（FITC）通道检测细胞的活性氧（ROS）水平,FITC和藻红蛋白（PE）通道检测细胞的凋亡水平。（2）体内实验：采用简单随机抽样法将15只C57BL/6小鼠分为对照组（n=5）、照射组（n=5）和蔓荆子+照射组（n=5）。对照组小鼠进行假照射（0 Gy）,照射组和蔓荆子+照射组小鼠进行一次性2 Gy全身照射。将蔓荆子提取物用二甲基亚砜（DMSO）配制为 500 mg/ml 的蔓荆子溶液,灌胃前用生理盐水稀释,蔓荆子+照射组小鼠于照射前给予蔓荆子提取物（400 mg/kg）0.2 ml,连续给药7 d,照射后10 d处死小鼠。使用全自动血液分析仪分别对外周血血细胞和骨髓有核细胞（BMNC）计数,使用流式细胞仪分析造血干/祖细胞的数量和百分比,检测骨髓造血细胞内ROS水平、人磷酸化组蛋白H2A变异体（γH2AX）和磷酸化的p38（pp38）的表达。符合正态分布的计量资料的2组间比较采用独立样本t检验（方差齐）。 结果 （1）体外细胞实验：与照射组比较,0.001 mg/mL蔓荆子+照射组的骨髓细胞活力明显提高（585 485.00±37 335.80对460 384.55±53 786.37）,ROS水平降低（12 260.67±232.34对17 969.67±467.24）,凋亡细胞百分比显著降低[（28.97±0.32）% 对 （35.33±0.35）%],且差异均有统计学意义（t=4.245、18.950、23.161,均P<0.01）。（2）体内实验：与照射组相比,蔓荆子+照射组小鼠的BMNC数量[（23.34±3.01）×106个/只对（16.73±2.57）×106个/只]、白细胞数量[（2.80±0.35）×109个/L对（2.21±0.24）×109个/L]、红细胞数量[（10.54±0.51）×1012个/L对（9.68±0.26）×1012个/L]、血小板数量[（339.80±49.42）×109个/L对（289.40±54.08）×109个/L]和血红蛋白含量[（139.20±3.66） g/L对（129.20±3.87） g/L]均升高,且差异均有统计学意义（t=2.582、2.824、2.999、1.376、9.739,均P<0.01）。与照射组比校,蔓荆子+照射组小鼠造血祖细胞的数量[（34916.03±697.36）个/只对（26388.04±241.78）个/只]和百分比[（29.83±4.32）%对（22.76±2.20）%]升高,造血干细胞的数量[（2 074.00±23.12）个/只对（929.40±166.52）个/只]升高,且差异均有统计学意义（t=5.423、9.171、3.175,均P<0.01）;造血干/祖细胞中的ROS水平下降[（7 750.20±589.05）对（8 515.20±1 036.46）,（9 360.20±831.97）对（10 291.40±767.57）],差异均无统计学意义（t=1.435、1.839,P=0.189、0.103）;造血干/祖细胞中γH2AX的表达降低（693.20±4.82对751.60±32.72）, 且差异有统计学意义（t=3.064,P<0.01）;造血干/祖细胞中pp38表达降低（1 181.20±11.28对1 183.60±49.70,1 411.20±50.25对1 424.40±80.95）,差异均无统计学意义（t=0.105、0.765, P=0.014、0.310）。 结论 蔓荆子提取物通过降低造血细胞的氧化应激和抑制造血干细胞内的DNA损伤来达到辐射防护效果。