重组日本血吸虫极低密度脂结合蛋白的抗原性及诊断价值的研究

目的探讨重组日本血吸虫特异性极低密度脂结合蛋白(SVLBP)的抗原性及其诊断价值。方法SVLBP基因亚克隆人pQE-30表达载体，克隆菌在IPTG诱导下表达重组蛋白；非变性条件下制备克隆菌裂解液，用亲和层析法纯化重组蛋白；用Westem blot鉴定其抗原性；纯化SVLBP重组蛋白免疫家兔获得抗血清；以SVLBP重组蛋白为抗原，ELISA法检测血吸虫感染者血清及健康人血清。结果克隆菌在IPTG诱导下高表达SVLBP重组蛋白；该重组蛋白诱导家兔产生单特异抗体，抗体滴度为1：6400；SVLBP重组蛋白与血吸虫病人血清有较强的反应；以该蛋白为抗原检测36人份血吸虫感染者血清，阳性率为8313％，50人份健康人血清，假阳性率为2％(I/50)，10人份肺吸虫病人血清，1例阳性，交叉反应率为10％0／10)。结论SVLBP重组蛋白有较好的抗原性。以该重组蛋白为抗原检测日本血吸虫病患者血清中特异性抗体，敏感性和特异性均较高，具有一定的诊断价值。     

共享螺类种质资源名录（一）

我国医学螺类资源丰富，整理、建立科学管理的合乎国际标准的医学螺类标本库、标本档案，为医学螺类深入研究提供必要的资源和依据、也为寄生虫学教学与研究、寄生虫病及重要病害的控制提供螺类种质资源信息。现将浙江省医学科学院寄生虫病研究所多年来积累、保存的螺类标本，按“科技部自然资源共享平台建设”统一的技术规范进行分类整理，按规范的共性描述标准、个性描述标准、图片信息等形式进行数字化整理，将数字信息化的资源上传至寄生虫种质资源信息保存中心，构建螺类种质资源信息库。第一期整理的螺类资源隶属1纲3科6属11种，名录介绍如下。     

胶体金免疫层析法快速检测氯胺酮的研究

目的：建立一种简易、快速、准确的胶体金免疫层析法,用于检测尿样中的氯胺酮。方法：采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记氯胺酮单克隆抗体（antl-ketamlne）,制成免疫层析试纸条（GICA）,根据特异性抗原、抗体反应及竞争抑制反应的原理判断结果并与色谱-质谱法（GC／MS）同步检测临床标本进行对照。结果：GICA仅与氯胺酮标准品发生反应,与其他药品无交叉反应发生。检测尿样氯胺酮的灵敏度可达1000ng／ml,GICA与GC／MS同步检测138份尿样比较,GICA的敏感性达97.4名,对健康人的阴性符合率为100％。两法总符合率达99.3％。结论：GICA检测氯胺酮的敏感性高,特异性强,而且简易、快速,适合现场大规模调查应用。     

浙江省周期型马来丝虫等位基因酶谱研究

目的:研究浙江省周期型马来丝虫等位基因酶谱。方法:用微量平面淀粉凝胶电泳法,检测浙江省周期型马来丝虫成虫180 条(雌60,雄120),微丝蚴0.4 m l(约32 000 条)及感染期幼虫约1 500条的Acph 等14 种酶的同工酶的等位基因酶谱。结果:浙江省周期型马来丝虫的3 个生活期虫体呈现13 种酶的同工酶的27个等位基因位点,多数位点为纯合子型,仅2 个位点(MPI,MDH-2)为杂合子型(占7.4% )。成虫、微丝蚴及感染期幼虫分别呈现16、16 及9 个等位基因位点。同时用相同的方法对实验室传代的周期型马来丝虫等位基因酶谱进行比较检测。结论:浙江省与实验室传代的周期型马来丝虫的同工酶等位基因酶谱基本相似     

现场人员采用免疫色谱试验进行疟疾诊断

恶性疟原虫免疫色谱试验(ICT MalariaPfTest~(TM))是一种通过检测外周血中恶性疟原虫富组氨酸蛋白2(PfHRPZ)抗原而快速诊断疟原虫感染的免疫色谱试验(ICT)。该研究目的在于评价这一方法在现场应用的可行性和实用性。     

结核杆菌H37Rv株重组KatG蛋白的表达纯化研究

目的表达纯化结核杆菌H37Rv株重组KatG（简称rKatG）蛋白，为深入研究异烟肼耐药机制奠定基础。方法重组质粒pET23b—KatG转化大肠埃希菌表达菌株BL21（DE3）plysE,IPTG诱导rkatG蛋白表达。经SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定后，优化表达条件，用镍离子鳌合亲和层析柱纯化rKatG蛋白，对纯化产物进行过氧化氢酶活性测定。结果成功构建了重组质粒pET、23b-KatG,rKatG蛋白以可溶性蛋白形式表达，经亲和层析后的rKatG蛋白纯度为95．6％，过氧化氢酶试验阳性。结论构建的pET23b-KatG重组质粒能高效表达有酶活性的可溶性rKatG蛋白，经亲和层析后可得到高纯度的纯化蛋白。     

肺结核治疗后抗体持续时间动态分析

目的 了解肺结核(pulmonary TB)治疗后病人血清抗结核抗体持续时间,为肺结核血清流行病学调查和结核病疫情分析提供科学依据.方法 采用Dyna-Gen公司生产的结明(MycoDot-TM)结核病快捷诊断试剂盒.对肺结核治疗后病人作每隔3个月血清抗结核抗体检测,连续观察15个月.另选择健康体检人群作对照比较.结果 205例治疗后病人完成全程观察190例,治疗后每3个月抗结核抗体的阳性人数逐渐下降,9个月时下降最明显.与健康对照比较差异无统计学意义(X2=2.4391,P>0.05).不同年龄、不同类型的肺结核病人血清抗结核抗体持续时间各有不同,经统计分析其意义也有所不同.结论 肺结核治疗后病人抗结核抗体的持续时间大约为9～12个月.病灶范围广及治疗后以增殖性病灶为主的患者抗结核抗体的持续时间较长;肺结核在治疗后短期内抗结核体抗阳性不能作为结核病活动的依据;若在治疗后9～12个月复查,抗结核抗体呈阳性反应,则警惕肺结核复发的可能.     

日本血吸虫极低密度脂蛋白结合蛋白重组抗原的免疫保护性研究

目的?摇探讨日本血吸虫极低密度脂蛋白结合蛋白（SVLBP）重组抗原的免疫保护性及其作为候选疫苗的潜在价值。 方法 用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导克隆菌大量表达SVLBP重组抗原，以镍-次氮基三乙酸琼脂糖树脂（Ni-NTA）亲和层析法纯化制备SVLBP重组抗原；将纯化的重组抗原加福氏佐剂经皮下免疫C57BL/6小鼠，每隔2周免疫1次，在第3次免疫后10 d，经腹部皮肤攻击感染日本血吸虫尾蚴35±1条，感染后45 d剖杀，计数检获虫数和每克肝虫卵数（LEPG）。小鼠在免疫前和攻击感染后分别采眶窦血，用ELISA测定特异性IgG及其亚群抗体水平。 结果 相对于佐剂对照组，免疫组小鼠的减虫率为33.4%，减卵率为47.6%；免疫后小鼠产生高水平的特异性IgG（>1:6 400）；抗体亚类检测结果显示，免疫组小鼠 IgG2a、IgG2b、IgG1明显高于免疫前和佐剂对照组。 结论 日本血吸虫皮层蛋白SVLBP重组抗原能诱导小鼠产生一定的保护性免疫，是潜在的疫苗候选抗原分子。     

浙江华溪蟹体内一种大型囊蚴的ITS2基因序列分析

浙江省宁海县自1979年以来先后发现了卫氏并殖吸虫、斯氏并殖吸虫、哈氏并殖吸虫,以及卫氏并殖吸虫的嵌合体型(2n/3n/4n)。1998年,从该县西溪乡的浙江华溪蟹(Sinopota-mon chekiangense)肌肉内分离出一种似并殖吸虫大型囊蚴,凭形态学特征难以鉴定的虫种。本研究应用分子生物学方法对该种囊蚴核糖体DNA第二间隔区(ITS2)基因进行了测序分析,以便为其虫种鉴定及分类提供依据。     

滴金免疫渗滤法检测广州管圆线虫抗体的实验研究

目的建立一种检测广州管圆线虫抗体的简便、快速、敏感、特异的新方法。方法以广州管圆线虫成虫抗原为包被抗原，金标记SPA为显色剂，建立检测广州管圆线虫抗体的滴金免疫渗滤法（DIGFA）；并以ELISA平行检测比较。结果用DIGFA检测广州管圆线虫实验感染鼠血清50份，其阳性检出率为96．0％，50份正常鼠血清的阴性符合率达100％。DIGFA分别检测蛲虫阳性鼠血清13份。绦虫阳性鼠血清11份和粪类圆线虫阳性鼠血清18份，前二者均为阴性，后者交叉反应率为5．6％；DIGFA与ELISA平行检测30份广州管圆线虫阳性鼠血清，两法符合率达96，7％。结论DIGFA与ELISA有相似的敏感性和特异性。且具有简便、快速、不需特殊仪器设备等优点。是一种检测广州管圆线虫抗体的新方法。