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1.
2.
目的 :在大肠杆菌内快速构建两种分别含有人肝细胞生长因子 (hepatic growth factor,HGF)和非分泌型人尿激酶型纤溶酶原激活剂 (urokinase- type plasm inogen activator,u PA) c DNA片段的重组复制缺陷型腺病毒。方法 :分别将人 HGF和 u PA c DNA片段与穿梭载体 p Track- CMV连接 ,线性化后与骨架载体 Ad Easy- 1在大肠杆菌 BJ5 183内同源重组获得腺病毒载体 p Ad HGF和 p Adu PA,经 2 93细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒 Ad HGF和 Adu PA;将 Ad HGF和 Adu PA分别体外感染肝细胞株 L0 2 ,以 Northern印迹法和 Western印迹法检测两种病毒在肝细胞中的表达。 结果 :连接、重组后通过酶切和测序法筛选出病毒质粒 p Ad HGF和 p Adu PA;经 2 93细胞包装 ,3d后均观察到绿色荧光蛋白明显表达 ,Cs Cl梯度离心纯化最终分别获得 4× 10 1 0 efu/ m l滴度的重组病毒 Ad HGF和 6× 10 1 0 efu/ ml Adu PA;两种病毒体外感染肝细胞 3d后 ,HGF和u PA表达均明显增加。结论 :细菌内同源重组制备复制缺陷型腺病毒 ,纯化过程简单 ,重组腺病毒在肝细胞中均高效表达 ,为肝细胞移植基因治疗肝纤维化提供了新的手段 相似文献
3.
目的利用AdEasy系统构建共同表达人肝细胞核因子4α(HNF4α)和绿色荧光蛋白(GFP)的复制缺陷型重组腺病毒——AdHNF4α,体外感染人肝肿瘤细胞株,观察HNF4α表达上调对肝肿瘤细胞的肝细胞功能基因表达的影响。方法通过逆转录(RT)-PCR方法获取目的基因HNF4αcDNA片段,利用腺病毒载体AdEasy系统构建腺病毒质粒pAdHNF4α,经293细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒AdHNF4α;将AdHNF4α体外感染人肝肿瘤细胞株HepG2和Hep3B,通过RT—PCR、Western印迹法检测HNF4α在上述细胞中的表达;同时观察外源导人HNF4α对肝肿瘤细胞的肝细胞功能基因表达的影响。结果连接、重组后通过酶切和测序法筛选出病毒质粒pAdHNF4α;经293细胞包装,4d后观察到GFP明显表达,反复扩增最终获得约1×10^10efu/ml滴度的重组腺病毒AdHNF4α;AdHNF4α体外感染人肝肿瘤细胞72h后,有约90%以上的细胞表达GFP,HNF4αmRNA表达明显上调,蛋白表达分别增加3.4倍(HepG2)和5.2倍(Hep3B);同时肝细胞相关功能基因包括载脂蛋白、细胞色素P450家族、谷氨酰胺合成酶、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶及葡萄糖-6-磷酸酶mRNA表达均明显上调,且肿瘤细胞凋亡率也明显增加。结论利用重组腺病毒载体可将外源HNF4α基因导入肝肿瘤细胞并维持高效表达,同时正常肝细胞重要功能基因表达亦增强,肿瘤细胞生物学特性明显改善,这将为基因修饰移植肝细胞研究提供新思路。 相似文献
4.
自1954年第一株人肝源性细胞株建立至今,已成功构建了上百株人肝源性细胞株及亚株,这些细胞株的构建为探讨肝细胞的细胞生物学特点、生理生化功能以及开展各种肝脏疾病尤其是肝纤维化、肝脏代谢性疾病、急慢性肝功能衰竭、不同类型肝炎的临床研究有着十分重要的意义。近年来,随着肝细胞株在肝细胞移植(hepatocyte transplant,HCT)、人工肝等领域的广泛应用,建立新一代功能齐全、无致瘤性、不引起宿主免疫反应、方便经济的人肝源性细胞株已成为研究热点。本文就人肝脏组织来源细胞株的构建、生物学特性及应用研究等方面作一综述。 相似文献
5.
湖南省儿童医院是一所三级甲等儿童专科医院。随着医药行业的快速发展,传统的人工摆药模式难以适应医院药房管理水平的提高和JCI对药房工作的要求。近年来,全自动药品摆药机在国内各大综合医院的病室药房已投入使用。2012年我院从日本三洋电机株式会社引进一台型号为ATC-256G全自动药品摆药机(简称摆药机),同年9月份开始在中心药房先后对全院30个临床科室进行片剂和胶囊的摆药工作,替代儿科临床护士人工摆药。现就摆药机给口服药品调配工作带来的利与弊及应用体会总结如下。 相似文献
6.
目的观察早期康复护理对脑卒中偏瘫患者患肢活动功能、生活质量及心理状态的影响。方法选取本院2017年1月—2018年1月收治的98例脑卒中偏瘫患者纳作为研究对象,将入选患者随机均分为对照组与护理组,对照组给予常规院内护理,护理组给予早期康复护理;护理一个月后,观察两组患者神经功能指标、生活质量指标与心理状态指标的变化情况,并调查患者对护理工作的满意度。结果护理后,两组NIHSS、CSS、STEF、FMA、MBI得分均较前改善,组内对比P0.05;治疗后护理组患者各项神经功能指标均优于对照组(P0.05)。护理后,两组SAS、SDS均较前改善,组内对比P0.05;治疗后护理组患者SAS、SDS均优于对照组(P0.05)。护理后,两组患者生理功能、精神健康、社会功能、总体健康4个维度评分均较前改善,组内对比P0.05;治疗后护理组患者SF-36各维度均优于对照组(P0.05)。观察组总满意率为93.88%,对照组总满意率为77.55%,观察组整体满意度与总满意率均优于对照组(P0.05)。结论早期康复护理可促进脑卒中偏瘫患者患者活动功能恢复,改善患者生活质量与心理状态,具有临床推广价值。 相似文献
7.
8.
9.
目的评价声学造影实时三维超声心动图(CE-RT3DE)在冠心病诊断中的应用及其价值。方法收集2012年2月至2014年4月住院拟诊为冠心病的患者120例,均于经皮选择性冠状动脉造影术(CAG)前行CERT3DE定量分析。步骤为先经正中静脉缓慢推注声学造影剂声诺维(Sono Vue),行心肌声学造影(MCE),并结合CE-RT3DE图像获取整体心肌造影三维资料数据库,再联机或脱机对数据库进行分析处理做出诊断。然后进行CAG检查,对比分析CE-RT3DE与CAG的结果。结果以CAG诊断为金标准,CE-RT3DE诊断冠心病的敏感性为95.88%(93/97),特异性为95.65%(22/23),阳性预测值98.94%(93/94),阴性预测值56.52%(26/46),准确性为95.83%(115/120)。CE-RT3DE对冠状动脉病变≥2支(2支+3支)诊断的敏感性大于单支病变(100.0%vs88.24%,P<0.05)。结论 CE-RT3DE诊断冠心病敏感性、特异性及准确性高,无创,安全性高。 相似文献
10.
目的比较实时三维超声心动图和组织多普勒显像在分析左室收缩同步性的临床价值。方法60例研究对象分为两组:A组为31例健康志愿者,B组为29例扩张性心肌病患者。对所有研究对象进行实时三维经胸超声心动图和组织多普勒检查,得到左室舒张末容积(EDV)、收缩末容积(ESV)、左室射血分数(LVEF)、心电图Q波起始点距离16节段和12节段容积最小容积点时间间隔的标准差及其最大差(分别是Tmsv 16-SD,Tmsv12-SD;Tmsv-16-Dif,Tmsv-12-Dif)。应用该软件对组织多普勒显像进行定量评价,得到心电图Q波起始点到等容收缩波峰值、收缩波峰值、舒张早期及晚期波峰值、最大应变的标准差(分别是TIVC-SD,TS-SD,Te-SD,Ta-SD,Tε-SD)。结果B组的LVEF显著小于A组(P<0.05)。B组的同步性参数值均大于A组(P<0.01)。TIVC-SD、Tε-SD与Tmsv16-SD、Tmsv12-SD、Tmsv16-Dif、Tmsv12-Dif显著相关(r=0.583-0.743,P值均<0.01),Ts-SD、Te-SD与Tmsv16-SD和Tmsv16-Dif中等相关(r=0.561-0.605,P值均<0.01),Ts-SD、Te-SD与Tmsv12-SD和Tmsv12-Dif的相关性较弱(r=0.410-0.588,P值均<0.05),Ta-SD与实时三维超声的各参数均不相关(r=0.264-0.383,P值均>0.05)。结论实时三维超声心动图和组织多普勒均能够评价左室心肌收缩同步性,两种方法的评价结果具有一定的相关性。 相似文献