A546D突变型TGFBI基因真核表达载体的构建及体外表达

目的 构建A546D突变型TGFBI基因真核表达载体和体外转染体系,为研究野生型及A546D突变型TGFBI基因的功能提供实验基础.方法 应用重叠延伸PCR法定点诱变,构建A546D突变型TGFBI基因真核表达载体,以阳离子脂质体介导体外转染技术瞬时转染人角膜上皮(human corneal epithelium,HCE)细胞,Western Blot法检测转染后培养基中HCE细胞分泌的TGFBI蛋白的表达.结果 重组质粒总长约7.5 kb,由HindⅢ、Xba Ⅰ双酶切鉴定产生5.4 kb和2.1 kb两条片段者为克隆正确质粒.测序鉴定证实了TGFBI基因编码区完整插入到载体pcDNA3.1的多克隆位点中,突变载体的第1685位碱基由C替换为A,使其编码的第546个氨基酸由Ala突变为Asp即A546D突变.野生型及A546D突变型载体转粢入HCE细胞后,TGFBI蛋白有效表达.结论 成功构建了A546D突变型TGFBI基因真核表达载体,为TGFBI基因相关性角膜营养不良致病机制的研究奠定了基础.     

医院护工手污染情况和肥皂洗手前后的效果比较

目的了解护工手污染情况以及肥皂洗手后的微生物学监测情况。方法随机抽取护工50人,比较肥皂洗手前后的菌落总数和带菌情况。结果规范的卫生洗手后能明显的降低手的菌落总数和细菌。结论护工的手卫生意识较差,自我防护的意识也比较弱,应加强护工卫生洗手法的培训,有效的控制病原体的传播。     

花冠状常染色体显性遗传性先天性自内障致病基因初步定位

目的 初步定位具有花冠状表型的常染色体显性遗传性先天性白内障一家系的致病基因.方法 收集家系成员的资料,提取基因组DNA,据文献报道在已知先天性白内障致病基因和位点附近,选择合适的短串联重复序列多态性标记,使用LINKAGE 5.1软件计算标准LOD值,对此家系进行连锁分析.结果 此表型先天性白内障的致病基因定位在3q22.3-q25.2,即D3S3612至D3S1594之间15.2 cM范围内.在D3S1569和D3S3599处,得到与致病基因住点连锁的最大LOD值均为3.01(重组率=0.00).结论 该花冠状常染色体显性遗传性先天性白内障致病基因初步定位在第3对染色体上3q22.3-q25.2.     

Avellino角膜营养不良家系致病基因的定位研究

目的：对收集到的一个常染色体显性遗传性Avellino角膜营养不良家系的致病基因进行初步定位。
　　方法：采集家系中所有成员的外周静脉血,从中提取基因组DNA样本。在热点区域内选取微卫星标记进行基因扫描,分别利用LINKAGE软件和CYRILLIC软件进行连锁分析及单体型分析,以确定候选基因所在的染色体区域。
　　结果：该Avellino角膜营养不良家系的连锁分析结果在D5 S396和D5 S393这两个微卫星标记处获得最大优势对数计分(LOD)值,Zmax=3.01(θ=0.00)。单体型分析将致病基因定位于微卫星标记D5 S808和D5 S638之间。
　　结论：该Avellino角膜营养不良家系的致病基因初步定位于染色体5q上的遗传距离约为11.2厘摩( cM)的一段区域内。     

2011~2013 年成都市某哨点医院流感监测结果分析

目的 分析成都某医院2011~2013 年流感监测结果,探索流感流行特征及规律,为制订流感防治策略提供依据。方法 将内科门诊、发热门诊、内科急诊和儿内科门诊设置为监测诊室,按照国家流感监测方案开展监测工作,并对监测结果进行分析。结果 登记报告流感样病例就诊百分比（ILI%）2011 年为1.95%,2012 年为1.24%,2013 年为2.70%。2011~2013 年832 份ILI 标本中流感病毒核酸阳性率为13.82%,其中各亚型流感病毒构成比分别为：B 型19.13%、季节性A（H1N1）型0.87%、A（H3N2）型15.62%和甲型H1N1 流感64.35%。ILI 在冬春季节出现就诊高峰,与标本核酸检测阳性率高峰时间呈正相关（r＝0.457,P<0.001）;ILI 年龄组构成比以5~15 岁组最高,各年龄组核酸检测阳性率差异有统计学意义。结论 ILI 流行强度与流感病毒活动趋势一致。流感防治工作需要在冬春以及夏季加强。需注重各年龄层的采样比例,减少采样人群分布不均衡导致的监测结果差异。     

心理护理在微波凝固术治疗鼻甲肥大症中的重要作用

鼻甲肥大是耳鼻喉科常见疾病之一。手术治疗病人术后由于要填塞油纱压迫止血,创伤面大,需留院医治。这既让病人痛苦,又增加了他们的经济负担。而采用微波凝固术治疗鼻甲肥大,术后不需要压迫止血及住院治疗,大大减轻了病人的痛苦,降低了病人的经济负担。但手术中常因为病人出现晕厥而使手术失败,我们采用适当的心理护理,可以减少晕厥的发生,提高手术的成功率。 1 临床资料 随机将我院门诊微波凝固术治疗鼻甲肥大的病人分为两组。常规组52例,其中男性32例,女性20例,年龄16～48岁。心理护理组65例,其中男性41例,女性24例,年龄14～50岁。     

针灸综合疗法治疗原发性坐骨神经痛46例

坐骨神经痛是指沿着坐骨神经通路及其分布区所发生的疼痛 ,按病因可分为原发性和继发性两大类。原发性坐骨神经痛即神经炎 ,与受寒、潮湿、损伤及感染有关 ,临床上多见于青壮年 ,患者常常因剧烈疼痛而影响生活和工作。本人从事针灸临床工作10余年 ,采用针灸结合电针、红外线光疗及拨火罐治疗原发性坐骨神经痛取得了良好的效果。现总结 4 6例介绍如下 :1　临床资料4 6例患者中 ,男性 2 0例 ,女性 2 6例 ;年龄最大 5 2岁 ,最小 18岁。所有患者均无明显腰痛和腰部活动障碍 ,疼痛多位于臀部 ,并向股后及小腿后外侧和足外侧放射 ,呈持续性钝痛 ,…     

长期配戴角膜塑形镜治疗近视的疗效及角膜并发症观察

目的：：观察配戴角膜塑形镜2a治疗近视的疗效及角膜并发症。方法：观察2008-01/2012-09在本院接受规范验配并严格复查的角膜塑形镜治疗患者324例620眼,连续戴镜6 mo;1、2 a后患者裸眼视力、屈光度数、角膜曲率变化及视觉质量、眼表并发症等情况。结果：戴镜前裸眼视力0.15±0.14,戴镜后6mo 0.95±0.07,1a 0.93±0.10,2a 0.90±0.10,与戴镜前视力的差异均存在统计学意义(P<0.01);治疗前屈光度-3.34±1.43D,戴镜后6 mo -0.73±0.67 D,1 a -0.93±0.57 D,2a -0.97±0.66D,与戴镜前屈光度的差异均存在统计学意义(P<0.01);治疗前角膜曲率43.27±1.23D,戴镜后6mo 40.69±1.22D,1a 40.64±1.21D,2a 40.36±1.16D,与戴镜前角膜曲率的差异均存在统计学意义(P<0.01)。配戴角膜塑形镜期间共397眼发生轻度角膜上皮损伤(0~Ⅱ级),发生率为64.0%,给予促角膜上皮修复药物后缓解;仅5眼发生Ⅲ级角膜上皮损伤,发生率0.8%,仅1例患者出现丝状角膜炎,停戴后药物治疗痊愈;106眼戴镜期间发生角膜镜片压痕,发生率17.1%;144眼发生复视或重影,发生率为23.2%;161眼出现眩光,发生率为26.0%,经早期观察或调整镜片后消失。结论：在规范验配、严格复查的前提下,长期配戴角膜塑形镜是安全的,可显著提高裸眼视力,明显降低近视度数及角膜曲率。     

缺氧条件下Hsp90抑制剂17-AAG对RPE细胞整联蛋白连接激酶表达的影响

目的：研究热休克蛋白（heat shock protein 90,Hsp90）抑制剂17-AAG对缺氧诱导的视网膜色素上皮（ retinal pigment epithelial,RPE）细胞整联蛋白连接激酶（ integrin - linked kinase,ILK）表达的影响。 方法：利用200μmol/L氯化钴（ cobalt chloride, CoCl2）建立体外RPE细胞的化学缺氧模型。不同浓度的Hsp90抑制剂17-AAG预处理RPE细胞1 h后给予12 h缺氧处理。实验分为缺氧对照组、二甲基亚砜（ DMSO）对照组和17-AAG预处理组。其中17-AAG预处理组根据浓度不同又分为6组：0.01,0.10,0.50,1.00,5.00,10.00μmol/L。应用RT-PCR和Western blot 方法检测ILK表达变化情况。 结果：缺氧对照组、DMSO对照组和17-AAG预处理组ILK mRNA与内参β-actin mRNA 光密度比值分别为1.32±0.04,1.29±0.03,0.93±0.06,0.70±0.05,0.53±0.03,0.44±0.04,0.32±0.04,0.30±0.03;ILK 蛋白与内参β-actin蛋白光密度比值分别为2.16±0.04,2.13±0.04,1.65±0.04,1.13±0.05,0.74±0.03,0.41±0.06,0.35±0.04,0.35±0.03。与缺氧对照组比较,17-AAG预处理组ILK mRNA和蛋白的表达明显降低（ P〈0.05）,呈浓度±赖性。 结论：Hsp90抑制剂17-AAG能够降低缺氧条件下RPE细胞ILK的表达。