Toll样受体介导的先天性抗病毒免疫反应研究进展

TLRs是先天性免疫系统最重要的模式识别受体,通过识别病毒的PAMPs/DAMPs,活化依赖和非依赖于MyD88的信号通路,诱导I-IFN、炎性因子和趋化因子等的释放,发挥抗病毒作用.现就TLRs的基本概况、结构特征、抗病毒信号通路及对不同病毒的天然免疫反应等相关研究进展进行简要综述.     

羊口疮病毒E3L蛋白亚细胞定位及生物信息学分析北大核心CSCD

目的 克隆羊口疮病毒020基因,构建其重组真核表达质粒并转染HeLa细胞,分析020基因编码E3L蛋白的亚细胞定位,分析该蛋白生物信息学特征。方法 提取羊口疮病毒基因组,PCR扩增020基因并构建重组真核表达质粒,转染HeLa细胞,采用Western blot检测其在该细胞中的表达,免疫荧光法检测该蛋白的亚细胞定位。利用DNAstar软件分析不同毒株ORFV E3L氨基酸序列特点及其遗传演化关系;利用SOMPA软件分析其二级结构;利用SignalP4.0软件预测信号肽;利用TMHMM2.0软件预测跨膜结构;利用NetPhos 3.1预测磷酸化位点;利用NetNGlyc-1.0预测糖基化位点;应用IDEB和SYFPEITHI预测ORFV E3L蛋白的抗原表位。结果 成功克隆得到ORFV 020基因,全长549 bp,编码183个氨基酸;亚细胞定位显示该蛋白定位于细胞核和细胞质。生物信息学分析ORFV E3L蛋白α螺旋约占40.44%、β折叠约占5.46%、延伸链约占16.94%、无规则卷曲约占37.16%;该蛋白无信号肽和跨膜结构,可能存在15个磷酸化位点,7个N-糖基化位点,5个B细胞线性表位,2个CTL表位,3个Th细胞表位,3个B细胞和CTL联合表位,3个B细胞和Th细胞联合表位。结论 ORFV E3L蛋白定位于细胞核和细胞质,含有多个抗原表位,可能具有免疫原性。该蛋白高度保守,具有成为优势保护性抗原的潜力。为进一步揭示ORFV E3L蛋白的功能奠定基础,为ORFV诊断方法的建立及疫苗的研制提供了理论依据。     

人兽共患痘病毒病流行现状及其宿主谱研究进展

痘病毒科是一个庞大的家族,其中多数成员是重要的人兽共患病原,主要造成人和动物在皮肤和黏膜上的痘疹。部分人兽共患痘病毒流行广,传染性强,对公共卫生安全构成巨大威胁。近年来,猴痘病毒、牛痘病毒以及口疮病毒等的暴发一度引起人类的恐慌。为此,本文重点综述了重要人兽共患痘病毒的病原学、流行病学和诊断学等方面的研究进展,以期对人兽共患痘病的防控提供参考。     

猪Toll样受体7基因的克隆及序列分析

目的:研究猪TLR7基因的分子结构与功能。方法:用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增技术,从猪脾脏淋巴细胞中克隆猪Toll样受体7基因(pTLR7),利用生物信息学技术预测其结构与功能。结果:基因序列分析表明,克隆的pTLR7基因为3153bp,编码1050个氨基酸,富含16.2%的亮氨酸;同源性分析显示,与GenBank上登载的猪TLR7参考序列(DQ333222)的同源性为98.8%,与牛和绵羊的同源性较高,与马、狗、人、家鼠、褐鼠的次之,其遗传演化关系与亲缘关系密切;推导氨基酸的分子结构预测表明,该分子属于I型跨膜受体,由胞外区(588个氨基酸)、跨膜区(23个氨基酸)和胞内区(174个氨基酸)组成,有信号肽序列、富含亮氨酸的重复序列(LRR)和Toll/IL-1R同源区结构域。结论:成功克隆了猪TLR7基因,预测分析证实具有典型的TLR家族结构特征,这为进一步研究其参与病原分子模式识别和信号传导奠定了基础。     

细胞因子融合蛋白技术及其应用前景

细胞因子是由免疫细胞和某些非免疫细胞经刺激而合成、分泌的一大类多功能、高活性的生物物质.它在介导机体多种免疫反应及对各类免疫活性细胞的分化、发育和活化中起着十分重要的作用.     

5株猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7全长基因的克隆及序列分析

目的通过测定5株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因序列,结合GenBank登录的国内外PRRSV分离株核苷酸序列,分析PRRSV核衣壳蛋白(N蛋白)的遗传变异情况。方法根据GenBank公布的PRRSV ATCCVR-2332株全基因组核苷酸序列,设计合成1对特异性引物,用RT-PCR方法扩增出3株PRRSV甘肃流行株(命名为GSZY、GSBY、GSZY株)、1株陕西流行株(命名为Shanxi株)和1株PRRSV江西分离株(命名为Jingxi株)的ORF7全长基因,克隆到pGEM-T Easy载体,然后分别测定插入的核苷酸序列。应用DNAStar序列分析软件对所测ORF7基因核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与不同来源的13个PRRSV毒株进行同源性比较。结果5株PRRSV ORF7基因与以ATCC VR-2332为代表的早期引发PRRS的美洲型毒株的核苷酸序列间的同源性为91.9%~94.3%,与国内其他PRRSV分离株的同源性为98.7%~99.7%,与欧洲型代表株LV的同源性为57.7%~58.2%。结论美洲型PRRSV N蛋白氨基酸发生了变异,但国内毒株相对保守。     

Toll样受体2、4对病毒囊膜蛋白的识别

TLR2、4是TLRs家族中重要的成员,通过识别囊膜病毒的PAMPs/DAMPs,活化依赖和非依赖于MyD88的信号通路,诱导促炎性细胞因子和趋化因子等的释放,介导先天性抗病毒免疫反应。本文就TLR2、4的基本概况、结构特征、抗病毒信号通路以及对不同囊膜病毒的天然免疫反应等相关研究进展进行简要综述。     

合作小型猪T细胞受体α链的基因结构及其多样性

目的 探讨猪TCR基因分子结构的复杂性及其与人类的相似性.方法 以公开的猪TCRα链基因为参考序列设计两对特异性引物,用RT-PCR法从合作小型猪外周血、淋巴结和脾脏的淋巴细胞中克隆了93个猪TCRα基因(简称STA).结果 测序分析表明,克隆的猪TCRα链的基因均含有可变的信号肽区和V区、高变的J区和恒定的C区的基因片段,但基因间的核苷酸序列组成都不完全相同,且具有十分复杂的多态性和多样性,基因间的同源性在68.4%～98.7%,这与TCRα链的基本基因结构特征相一致.依据TCRα基因的同源性对其分子结构、遗传演化关系和归类分析发现,在其信号肽区、FR1区和CDR1区、FR2区 和CDR2区以及FR3区和CDR3区都存在一些变异集中点和变异热点区.用IMGT/V-QUEST分析方法可将合作小型猪TCRαV区(STAV)、J区(STAJ)基因片段与人类的进行比较分析,发现合作小型猪TCRα与人类的遗传演化关系较近,每个序列都能找到与人类对应的TRAV、TRAJ基因片段,甚至V区的相似性可达92%以上.结论 近交培育的合作小型猪在正常状态具有应对外界复杂微生物等环境的TCR遗传多样性分子基础,且适合作为人类免疫学及疾病研究的动物模型.