胆囊收缩素cDNA探针制备及其在癫痫发病机制研究中的应用

①目的　制备胆囊收缩素（ Ｃ Ｃ Ｋ）ｃ Ｄ Ｎ Ａ 探针,并以此探针检测遗传性听源性癫痫易感大鼠癫痫发作后脑内 Ｃ Ｃ Ｋｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达。②方法　将含０．５ｋｂｐ Ｒａｔ Ｃ Ｃ Ｋｍ Ｒ Ｎ Ａ 的质粒 Ｐ Ｕ Ｃ１３ 扩增、回收和纯化,用随机引物标记法,得到地高辛精（ Ｄｉｇ）标记 Ｃ Ｃ Ｋｃ Ｄ Ｎ Ａ 探针。用原位杂交技术,对癫痫发作后大鼠海马和大脑皮层 Ｃ Ｃ Ｋｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达进行研究。③结果　 Ｃ Ｃ Ｋｃ Ｄ Ｎ Ａ 探针标记效率为５０ｍ ｇ／ Ｌ;遗传性听源性癫痫易感大鼠癫痫发作后脑内 Ｃ Ｃ Ｋｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达显著增加。④结论　本实验制备的 Ｄｉｇ Ｃ Ｃ Ｋｃ Ｄ Ｎ Ａ 探针,具有较好的特异性和灵敏度;原位杂交实验证实, Ｃ Ｃ Ｋ 参与了癫痫发作过程。     

大剂量雌二醇对大鼠血浆和组织中P物质和锌离子含量的影响

采用放射免疫和原子吸收方法，检测雌二诱发高血压过程中大量血浆和部分组织中Ｐ物质和微量元素锌含量的改变。结果表明雌二醇诱发高血压大鼠下丘脑、延脑中Ｐ物质含量显著升高，脑垂体、肾上腺和血浆中Ｐ物质含量显著降低。延脑、肾上和血中锌离子高，肾脏锌离子显著降低。提示Ｐ物质参与雌二醇诱发高血压过程；雌二醇可能通过影响心血管中枢、肾上腺、肾肘及血浆中依赖于锌离子的酶的活性而使血压升高。     

加味酸枣仁汤对不稳定型心绞痛伴抑郁状态白细胞介素-17的影响

目的 观察加味酸枣仁汤对不稳定型心绞痛伴抑郁状态的白细胞介素-17(IL - 17)的影响,探讨其作用机制.方法 观察不稳定型心绞痛患者117例,以汉密尔顿抑郁量表(HAMD,17项)评分≥17分为伴有抑郁状态,分为单纯不稳定型心绞痛组(非抑郁组)60例;不稳定型心绞痛伴抑郁状态组(抑郁组)57例.比较两组患者血清白细胞介素-17.其中抑郁组随机分为对照组(28例)和试验组(29例),分别给予常规治疗及联合加味酸枣仁汤治疗.结果 抑郁组白细胞介素-17浓度为333.89 pg/mL±52.16pg/mL,高于非抑郁组的240.88 pg/mL±48.00 pg/mL,差异有统计学意义(P＜0.01).治疗后试验组白细胞介素-17浓度为303.00pg/mL±57.98 pg/mL,低于对照组331.96 pg/mL±49.35 pg/mL,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 不稳定型心绞痛合并抑郁状态患者白细胞介素-17浓度高于单纯不稳定型心绞痛患者.加味酸枣仁汤治疗后血浆IL - 17水平明显下降,加味酸枣仁汤对不稳定型心绞痛伴抑郁状态患者的炎症反应具有抑制作用.     

胃电刺激对大鼠海马胃扩张反应神经元及胃动素和nNOS表达的影响

目的:观察胃电刺激(GES)对大鼠海马CA1区胃扩张(GD)相关神经元放电活动的影响及脑内一氧化氮合酶(nNOS)和胃动素(MTL)表达的改变,初步探讨GES的中枢作用机制.方法:选用成年Wistar大鼠58只,采用细胞外记录神经元单位放电方法,记录海马CA1区神经元自发放电活动,根据神经元对胃扩张刺激反应的不同,分为胃扩张兴奋性神经元(GD-E)和胃扩张抑制性神经元(GD-I).观察3组不同参数的胃电刺激(GES-A,GES-B和GES-C)对CA1区内GD-E和GD-I放电频率的影响:GES-A(6 mA,0-3 ms,40 Hz,2 s-on,3 S-off)为标准参数;GES-B的串刺激波宽增至3 ms;GES-C的串刺激频率减少至20 Hz,其他参数均同GES-A.采用放射免疫法检测胃电刺激对大鼠不同脑区MTL含量的影响;并采用免疫荧光组织化学染色方法观察胃电刺激2 h对大鼠海马内nNOS免疫阳性神经元的表达.结果:CA1区记录的87个神经元中有79个神经元(90.8%)对胃扩张刺激(GD,3-5 mL,10-30 s)有反应,其中40个(50.6%)为GD-E神经元,39个(49.4%)为GD-I神经元.GES-A,-B,-C分别兴奋了62.5%,100%和62.3%的GD-E神经元,GES-B对GD-E神经元的作用明显强于GES-C (神经元兴奋率GES-B 100%vs GES-C 62.3%,P<0.05).在GD-I神经元中有63.6%,85.7%和50%的GD-I神经元分别被GES-A,-B和-C所兴奋,其中GES-C的兴奋作用较弱(P=0.041,vs GES-A:P=0.021,vs GES-B).GES-A刺激胃窦部2h,下丘脑(48.93±6.98 fmol/mg vs 96.23±12.93 fmol/mg,P<0.01)、中脑(30.96±4.86 fmol/mg vs 53.17±8.96 fmol/mg,P<0.05)、延脑(46.27±7.83 fmol/mg vs 73.86±9.37 fmol/mg,P<0.05)和海马(32.23±6.51 fmol/mg vs 62.72±10.07 fmol/mg,P<0.05)中MTL免疫反应物(MTL-IR)的含量与假手术对照组相比明显减少,但脑桥内MTL-IR的含量与假手术对照组相比无显著差异;且海马CA1区(16.75±0.91 cells/mm~2 vs 20.46±1.30 cells/mm~2,P<0.05)和CA2-3区(14.91±1.17 cells/mm2 vs 18.73±1.10 cells/mm~2,P<0.05)nNOS免疫阳性神经元表达明显减少.结论:GES可兴奋海马CA1区内胃扩张反应性神经元,电刺激作用的强弱与GES刺激的频率和单个电刺激的持续时间有关;脑内MTL和海马内nNOS可能参与了GES的中枢作用机制.     

下丘脑弓状核Ghrelin对糖尿病大鼠胃运动的影响

目的:探讨下丘脑弓状核(arcuatenucleus,ARC)注射Ghrelin对糖尿病胃轻瘫(diabetic gastroparesis,DGP)大鼠胃运动的调控作用.方法:240只Wistar大鼠按数字表法随机分为10个大组(每组24只):对照组(C)、生理盐水组(NS)、Ghrelin低剂量组(L)、Ghrelin高剂量组(H)、高剂量Ghrelin合并D-Lys3-GHRP-6(DLS)组(H+D)、糖尿病胃轻瘫大鼠组(DGP)、生理盐水DGP组(DGP+NS)、Ghrelin低剂量DGP组(DGP+L)、Ghrelin高剂量DGP组(DGP+H)和高剂量Ghrelin合并D-Lys3-GHRP-6DGP组(DGP+H+D).采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病大鼠模型;荧光免疫组织化学染色方法观察糖尿病大鼠下丘脑ARC中Ghrelin受体(GHS-R)表达变化;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和实时荧光定量PCR(real-timePCR)进一步检测GHS-RmRNA在糖尿病大鼠ARC中表达变化;采用在体胃运动记录方法,观察下丘脑ARC注射Ghrelin对糖尿病大鼠胃运动的影响.结果:在DGP大鼠ARC中GHS-R免疫阳性细胞数(10.0/mm2±2.1/mm2)和mRNA相对含量(GHS-R1a/-actin:0.48±0.13)与正常大鼠(3.0/mm2±0.7/mm2,0.21±0.10)比较均显著降低(P<0.05).正常清醒大鼠胃运动幅度为8.14g±1.58g,频率为5.18/min±0.61/min.下丘脑ARC微量注射0.05nmol和0.5nmolGhrelin,胃运动幅度呈量效依赖性增加(L:14.6g±2.2gvsNS:8.14g±1.58g,P<0.05;H:22.28g±4.10gvsNS:8.14g±1.58g,P<0.01,vsL:14.6g±2.2g,P<0.05),胃收缩频率明显加快(L:7.45/min±0.87/minvsNS:5.18/min±0.61/min,P<0.05;H:10.98/min±1.03/minvsNS:5.18/min±0.61/min,P<0.01;vsL:7.45/min±0.87/min,P<0.05).DGP大鼠胃运动幅度明显下降(2.21g±0.89gvs8.14g±1.58g,P<0.05),收缩频率明显降低(1.81/min±0.23/minvs5.18/min±0.61/min,P<0.05).下丘脑ARC微量注射0.5nmolGhrelin,DGP大鼠胃运动幅度显著增加(5.04g±1.11gvs2.14g±0.23g,P<0.05),收缩频率明显加快(3.81/min±0.43/minvs1.80/min±0.19/min,P<0.05).GHS-R阻断剂D-Lys3-GHRP-6可完全阻断Ghrelin此作用.结论:糖尿病大鼠胃运动障碍可能与下丘脑GHS-R表达减少有关;Ghrelin在ARC参与糖尿病大鼠胃轻瘫的调控,该作用可能通过GHS-R实现.     

神经降压素在家兔压力感受性反射中的作用

采用电刺激减压神经及牵拉颈动脉窦的方法兴奋压力感受器,观察在产生减压效应时,血浆及某些脑区内神经降压素含量的改变,以探讨其在家兔压力感受性反射中的作用.结果表明,电刺激减压神经及牵拉颈动脉窦产生明显的减压效应时,家兔延髓、垂体、下丘脑及血浆内神经降压素含量明显增高.提示内源性神经降压素可能参与家兔压力感受性反射的调节过程.     

雌二醇诱发大鼠高血压后相关组织中Ca，Cu及Zn含量的变化

①目的探讨雌二醇诱发大鼠血压升高与某些离子的关系。②方法用原子吸收分光光度法（火焰法），检测了雌二醇诱发血压升高组及对照组大鼠血清、延髓、肾上腺、心肌和肾脏组织中Ｃａ２＋，Ｃｕ２＋和Ｚｎ２＋的含量，经ｔ检验统计处理。③结果与对照组相比，实验组大鼠血清和延髓中Ｃａ２＋的含量增加（ｔ＝２．３０３，Ｐ＜０．０５；ｔ＝２．０８５，Ｐ＜０．０５），而肾上腺和心肌中Ｃａ２＋含量减少（ｔ＝３．５１０，Ｐ＜０．０１；ｔ＝２．１０４，Ｐ＜０．０５）。血清和肾脏中Ｃｕ２＋含量增加（ｔ＝２．４５４，Ｐ＜０．０５；ｔ＝２．５６４，Ｐ＜０．０１），而延髓中Ｃｕ２＋含量减少（ｔ＝２．２５４，Ｐ＜０．０５）。延髓和肾上腺Ｚｎ２＋含量增高（ｔ＝２．５０２，Ｐ＜０．０５；ｔ＝２．１４７，Ｐ＜０．０５），而心肌和肾脏Ｚｎ２＋含量减少（ｔ＝２．０７７，Ｐ＜０．０５；ｔ＝２．４９８，Ｐ＜０．０５）。④结论Ｃａ２＋，Ｃｕ２＋和Ｚｎ２＋可能参与雌二醇诱发大鼠高血压     

远洋船员血浆超氧化物歧化酶活力和丙二醛含量的检测

①目的观察中国远洋船员血浆超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和丙二醛（ＭＤＡ）含量的改变。②方法采用分光光度比色法检测５３例远洋船员血浆ＳＯＤ活力和ＭＤＡ含量变化。③结果中国远洋船员血浆ＳＯＤ活力比陆地工作人群明显降低（ｔ＝７．９３，Ｐ＜０．００１）；而血浆ＭＤＡ含量则显著增高（ｔ＝３．５１，Ｐ＜０．００１）；连续海上航行大于１８０ｄ者的血浆ＳＯＤ活力明显低于连续海上航行小于１８０ｄ者（ｔ＝７．９１，Ｐ＜０．００１），而血浆ＭＤＡ含量比连续航行小于１８０ｄ者明显升高（ｔ＝２．４１，Ｐ＜０．０５）。④结论中国远洋船员机体抗氧化能力降低     

听源性癫痫发作对大鼠学习记忆的影响及机制探讨

目的探讨癫痫发作对大鼠学习记忆的影响及机制.方法以100 dB铃声刺激60 s诱发遗传性听源性癫痫大鼠癫痫发作,采用光辨别学习和放射免疫分析相结合的方法,研究大鼠癫痫发作对光辨别学习的影响及脑组织中生长抑素含量的改变.结果癫痫发作后,大鼠光辨别学习能力明显减弱,表现为达到学会标准所需的时间明显延长(6.20±0.97 vs 3.90±0.57,P <0.01);癫痫发作后,大鼠下丘脑、海马、颞叶皮层组织中生长抑素含量明显增高(下丘脑:551.28±68.21 vs 273.41±53.51,P <0.05;海马: 246.71±43.26 vs 135.74±36.60, P <0.01;颞叶皮层:235.88±42.14 vs 150.01±37.71, P <0.01).结论癫痫发作对大鼠光辨别学习有明显的抑制作用,该作用可能与下丘脑、海马及颞叶皮层组织中生长抑素含量的改变有关.