抗淋病奈瑟菌外膜蛋白I多克隆抗体的制备及其ELISA双抗夹心法的建立

目的 制备抗淋病奈瑟菌外膜蛋白I多克隆抗体,建立检测外膜蛋白I的双抗夹心法。方法 以淋病奈瑟菌及其外膜蛋白I作为抗原,分别免疫健康雄性家兔及雌性BALB/C小鼠,制备兔抗淋病奈瑟菌和鼠抗外膜蛋白I多克隆抗体,并采用 ELISA法检测抗体效价。结果与讨论 经ELISA证明兔抗淋病奈瑟菌多抗可与淋病奈瑟菌外膜蛋白I呈高效价反应,以此建立的ELISA双抗夹心法检测外膜蛋白I可获满意结果。     

淋球菌主要外膜蛋白的分离纯化及其单克隆抗体的制备

目的 建立快速，敏感，特异的淋球菌感染实验诊断方法。方法 采用溴化己二烯苯基三乙基胺-乙醇沉淀法提取淋球菌外膜蛋白复合物。以Z3.14,EDTA萃取外膜蛋白，经二乙氨基乙酸纤素-SepharoseCL-6B层析纯化获得主要外膜蛋白（PI），并按免疫杂交瘤技术建立分泌抗PI单克隆抗体（McAb)的杂交瘤细胞株。结果 获得了WI群淋球菌的PIA和WⅡ/WⅢ群淋球菌的PIB，SDS-PAGE测得PIA的分子量为35200，PIB的分子量为36700。建立了可持续，稳定分泌抗PIAMcAb的杂交瘤细胞2株和抗PIBMcAb的杂交瘤细胞3株，5株杂交瘤细胞培养上清液的抗体滴度为1：64-1：256，其诱生的BALB/c小鼠腹水中的抗体滴度为1：4096-1：16384，与淋球菌呈高效价反应。与脑膜炎双球菌等其他抗原不发生反应。结论 获得的高纯度PI及其McAb为建立快速，敏感，特异的淋球菌感染实验诊断方法奠定了基础。