类固醇性糖尿病

1941年Ingle给鼠类应用皮质酮而引起糖尿病,首先提出类固醇性糖尿病(Steroid Diabetes,简称SD)的诊断。1948年Conn等发现人类应用ACTH后引起一过性糖尿病。1950年Sprague用SD这一术语报告一例伴有高血糖和尿糖的柯兴氏综合征患者。目前SD适用于内源性皮质醇增多或糖皮质激素治疗所致的继发性糖尿病。本文着重对后者进行讨论。据估计,在长期接受糖皮质激素治疗的患者中,糖尿病的发生率为5～7％,虽然临床上广泛应用大剂量糖皮质激素长疗程治疗各种疾病,至今国内外有关SD的报告不多,且大部分为个案报告。本文对其发病机理、临床表现、治疗和转归等方面综述如下。一、发病机理在生理情况下,糖皮质激素是胰岛素的反调节激素之一,有升高血糖作用。有关SD的发病机理,至今仍不很清楚,估计与下列因素有关。     

人resistin基因原核表达载体构建和表达

[目的]构建人resistin基因原核表达载体并观察其表达,为开展对resistin的研究打下实验基础.[方法]酚氯仿一步法从一位2型糖尿病合并胆管癌患者腹壁皮下脂肪组织抽取总RNA,RT-PCR法扩增出re-sistin基因cDNA,经测序后,PCR产物亚克隆入T载体,用EcoRI和KpnI分别酶切重组T质粒和原核表达载体pGENKS,然后resistin基因片段和表达载体通过T4DNA连接酶进行定向连接,用核酸内切酶EcoRI、KpnI酶切和测序方法鉴定出重组表达质粒.重组表达质粒转化大肠杆菌JM109,经1 mmol/LIPTG在32℃诱导表达2 h,裂解细菌,进行PAGE凝胶电泳鉴定融合蛋白的表达.[结果]RT-PCR扩增产物分子大小为327 bp,序列分析表明为人resistin基因完整编码区.PCR产物与T载体连接、转化大肠杆菌后,从细菌质粒中酶切回收了目的片段.重组表达质粒经EcoRI和KpnI双酶切后能产生出327 bp、4 980 bp大小的两个片段,序列分析表明重组表达质粒包含人resistin基因完整编码区,基因编码无移位,PAGE凝胶电泳表明在细菌裂解上清有分子质量为39.5 kD的融合蛋白.[结论]成功构建了人resistin基因原核表达载体,且构建的载体能表达出含目的蛋白的融合蛋白,为下一步研究打下了实验基础.     

全面严格控制糖尿病患者大血管并发症的危险因素

糖尿病发病率正在逐年升高 ,2 0 0 0年全球约有 1.75亿患者。中国目前约有 3千万糖尿病患者 ,另外还有糖耐量低减患者约 3～ 4千万。因此 ,糖尿病已经成为严重威胁人类健康的疾病。糖尿病大血管并发症为糖尿病患者的首要致死、致残原因。因此必须全面严格控制大血管并发症相关的危险因素 (高血糖、高血压、血脂紊乱、肥胖、吸烟等 )。1　严格控制餐后高血糖　　糖尿病患者的空腹血糖 (FPG)及非空腹血糖均必须长期达到满意控制。临床实践中相当一部分糖尿病患者即使FPG达到满意控制 ,但餐后高血糖 (post-prandialhyperglycemia ,PPHG)并…     

人瘦素基因克隆与序列测定

【目的】构建人瘦素基因cDNA克隆 ,并进行序列分析。【方法】用逆转录聚合酶链反应扩增人瘦素基因cDNA ,获得片段 (6 40bp)连接至 pUC19载体 ,并转化大肠杆菌DH5α。以末端终止法进行序列测定。【结果】所克隆的人瘦素cDNA含全长的人瘦素基因编码区 ,仅 2 87位的腺苷酸被鸟苷酸代替 ,导致 96位编码谷氨酰胺的密码子CAA改变为编码精氨酸的CGA ,其意义尚待阐明。【结论】以逆转录聚合酶链反应方法成功地构建了人瘦素基因cDNA克隆。     

去势大鼠血和骨TNFα、E_2含量及骨形态计量

目的：探讨肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）雌二醇（Ｅ２）的动态变化对绝经后骨质疏松症骨形态计量学的影响。方法：４０只ＳＤ大鼠随机分去势和假去势２组,术后第４,１０,１６,２２周分别检测血清和骨组织中ＴＮＦα,血清Ｅ２含量,同步用ＩＢＡＳ计算机全自动图象分析系统对不脱钙骨组织作形态计量学测量。结果：去势后早期（＜４周）血及骨组织中即有ＴＮＦα升高和Ｅ２下降（Ｐ＜０．０５）。随着去势时间的延长（４～２２周）,血中ＴＮＦα与Ｅ２呈高度负相关（γ＝－０６３,Ｐ＜００１）,骨组织中ＴＮＦα浓度高于血中浓度（Ｐ＜００５）。骨小梁体积（ＴＢＶ）和平均厚度（ＭＴＴ）减小,骨吸收表面（ＲＳ）增大（Ｐ＜０００２）,骨吸收指标和骨组织ＴＮＦα含量在去势后第４～２２周升高的程度无显著性。结论：血和骨组织中ＴＮＦα可能参与绝经后骨质疏松症的发生和发展,并造成骨组织形态的改变     

小鼠抵抗素基因及其反义核酸真核表达体系的构建与鉴定

目的构建载有小鼠抵抗素(resistin)基因及其反义核酸的重组真核表达质粒,为下一步进行resistin生物功能研究打基础。方法用resistin基因mRNA编码区序列特异引物,从小鼠脂肪组织中,通过RT-PCR的方法合成resistin cDNA,T4DNA连接酶将resistin cDNA克隆于pGEM-T载体,经双酶切及测序鉴定克隆成功后再亚克隆于pcDNA3.1(+)或pcDNA3.1(-)真核表达载体,并测序鉴定。结果PCR产物长度与resistin cDNA理论长度363bp相符;重组pGEM-T被EcoRⅠ和XbaⅠ内切酶切为约3000bp和355bp两个片段,测序结果表明插入pGEM-T的DNA片段的核苷酸序列与小鼠resistin基因mRNA编码区序列完全一致。重组pcDNA3.1(+)和pcDNA3.1(-)测序结果表明插入的DNA片段分别与小鼠resistin基因mRNA编码区序列和反义resistin基因mRNA编码区核苷酸序列一致。结论成功克隆载有resistin基因和载有resistin基因反义核酸的重组真核表达质粒。     

抑制核因子-κB活性对糖尿病大鼠肾组织一氧化氮水平的影响

目的:研究抑制核因子κB(NFκB)活性对实验性糖尿病大鼠肾组织一氧化氮(NO)水平的影响。方法:雄性Wistar大鼠分为3组,A组(11只)为正常对照组,B组(11只)为糖尿病未干预组,C组(9只)为糖尿病大鼠吡咯烷二硫基甲酸酯(PDTC,NFκB活性抑制剂)干预组。以链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病大鼠模型。大鼠饲养18周后取出肾脏以电泳迁移率变动分析技术检测NFκB活性,RT PCR技术检测诱导型NO合成酶(iNOS)mRNA表达并检测肾组织NO水平,同时电镜检测大鼠肾小球基底膜厚度及系膜基质密度(系膜基质面积/系膜面积)。采用大鼠白蛋白特异的酶免疫分析试剂盒检测24h尿白蛋白排泄(UAE)。结果:肾组织iNOSmRNA表达在B组大鼠(0.30±0.12)显著高于A组(0.12±0.04,P<0.01)和C组(0.16±0.08,P<0.01)。肾组织NO水平在B组大鼠(0.56±0.20μmol/mg肾组织)显著低于A组(1.05±0.25μmol/mg肾组织,P<0.01)和C组(1.45±0.61μmol/mg肾组织,P<0.01)。基底膜厚度在B组大鼠(531.6±107.6nm)显著高于A组(312.4±25.4nm,P<0.05)和C组(315.8±21.4nm,P<0.05)。系膜基质密度在B组大鼠(56.41±6.78)显著高于A组(33.95±5.22,P<0.05)和C组(37.97±7.37,P<0.05)。结论:在实验糖尿病大鼠,肾组织iNOSmRNA表达明显增加,但NO水平明显降低;抑制NFκB活性不但能延     

抑制NF-kB对大鼠肾小球系膜细胞血管紧张素Ⅱ 1型 受体表达的影响

 【目的】 研究抑制NF-kB活性对SD大鼠系膜细胞血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA表达的影响。【方法】 分离SD大鼠系膜细胞分为下列3组:正常葡萄糖培养组(5.6 mmol/L D-葡萄糖),高葡萄糖培养组(25 mmol/L),吡咯烷二硫氨基甲酸酯(pyrrolidinedithiocarbamate, PDTC) + 高葡萄糖培养组。以电泳迁移率变动分析法(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)检测NF-。资B 活性,RT-PCR方法检测血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA表达,蛋白质印迹法(Western blot)检测血管紧张素Ⅱ1型受体蛋白表达,放射免疫分析法检测培养液血管紧张素Ⅱ水平。 【结果】 NF-kB活性在高葡萄糖培养组(20 ± 7)显著高于正常葡萄糖培养组(8 ± 4,P < 0.01)与PDTC + 高葡萄糖培养组(8 ± 3,P < 0.01),正常葡萄糖培养组与PDTC + 高葡萄糖培养组比较无显著性差异(P > 0.1)。血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA表达,在高葡萄糖培养组(0.60 ± 0.26)与正常葡萄糖培养组(0.50 ± 0.22)及PDTC + 高葡萄糖培养组(0.45 ± 0.23)均无显著性差异;血管紧张素Ⅱ1型受体蛋白质表达,在高葡萄糖培养组(0.54 ± 0.22)与正常葡萄糖培养组(0.37 ± 0.14)及PDTC + 高葡萄糖培养组(0.40 ± 0.13)均无显著性差异。培养液血管紧张素Ⅱ水平在高葡萄糖培养组(9.8 ± 2.1)显著高于正常葡萄糖培养组(7.5 ± 1.5,P < 0.05),PDTC + 高葡萄糖培养组(7.8 ± 1.7,P > 0.05)与正常葡萄糖培养组比较差异无显著性意义。【结论】 高葡萄糖可激活SD大鼠系膜细胞NF-kB,伴随血管紧张素Ⅱ产生增加,但是不影响血管紧张素Ⅱ1型受体表达;抑制NF-kB活性似乎可降低血管紧张素Ⅱ产生但不影响血管紧张素Ⅱ1型受体表达。     

不同糖耐量者血清骨钙素水平的比较性研究

目的比较不同糖耐量者其骨钙素(OC)水平并探讨骨钙素与各代谢相关指标的相关性。方法根据WHO1999年诊断标准,收集门诊及住院患者,其中正常糖耐量组(NGT)13人、空腹血糖调节受损组(IFG)10人、新诊断的2型糖尿病(T2DM)29人,ELISA法测定骨钙素水平并采集相关的生化参数,不同组别间的OC比较采用单因素方差分析,BMI、TC、TG、HDL-C、LDL-C、HbA1c及HOMA-IR与OC的相关性采用Person相关分析。结果 2型糖尿病患者其OC水平较NGT及IFG患者其OC水平明显降低,其浓度从NGT到IFG再到T2DM逐渐降低。相关分析表明OC与FBG、HbA1C、HOMA-IR、TC、LDL-C成负相关,有统计学意义(P<0.05);OC与BMI、INS、TG、HDL-C无相关关系,无统计学意义(P>0.05)。结论骨钙素不仅与糖代谢有关而且与脂代谢有关。     

利福平可抑制T—淋巴细胞玫瑰花结

因有报告利福平可抑制细胞免疫,故作者选择健康对照20人,肺结核病29例(其中18例接受利福平治疗),以检查治疗剂量的利福平对循环中T和B淋巴细胞的作用。结果利福平治疗的18例中有8例(其中7例)用药时间超过6周,其T-淋巴细胞玫瑰花结明显受抑制,B细胞则不受抑制。健康对照组和未用