小柴胡片抗乙型肝炎病毒的初步实验研究

东汉名医张仲景所创的“小柴胡汤”方剂 ,自古以来就用以治疗肝病。现代医学研究证明小柴胡制剂具有免疫调节、抗炎、抗纤维化及保护肝细胞等作用。临床实践还观察到血清 HBe Ag转换现象 ,提示小柴胡还有抗 HBV的作用 ,学者们认为小柴胡可能是通过诱生干扰素、增加抗体产生、作用于枯否氏细胞等 ,达到抑制 HBV复制的目的。研究已证实小柴胡中的柴胡、甘草、黄芩在体外有抗病毒作用 ,但有关其抗HBV的研究 ,目前报道罕见。为探讨小柴胡的直接抗 HBV作用 ,我们以转染有 HBV全基因组的肝癌细胞系 2 .2 .15细胞为实验模型 (美国西奈山医…     

载体法筛选乙型肝炎病毒S基因小干扰RNA靶位体系的建立

目的 构建4个针对乙型肝炎病毒(HBV)S基因序列的小发央RNA(shRNA)表达载体，作用于增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和HBV S基因融合表达载体，观察shRNA对融合蛋白的抑制作用，筛选出有效靶位。方法 利用pAVU6 27质粒，设计并掏建4个shRNA表达载体，与融合表达载体共转染AD293细胞，荧光显做镜下观察融合蛋白的荧光表达情况并通过流式细胞仪分析shRNA对融合蛋白的抑制作用。同时，逆转录聚合酶链反应法验证其筛选的有效性。结果 成功掏建shRNA表达载体和HBs-EGFP融合表达载体；4组shRNA表达载体均可不同程度抑制融合基因的表达，其中以579位点最有效，荧光表达抑制率为69．8％，RNA水平抑制率为74．6％。结论 筛选出有效抑制HBV S基因的siRNA靶位。     

HBx-siRNA快速筛选体系的建立和应用

目的:建立针对HBx的小干扰RNA(siRNA)快速筛选体系.方法:①构建HBx与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)N端融合表达质粒;②用一步PCR法,制备针对HBx mRNA的RNA多聚酶启动子-siRNA表达框(SEC);③将SEC转染HBx-EGFP瞬时表达的AD293细胞,通过荧光显微镜和流式细胞仪观察分析SEC对HBx-EGFP荧光表达的抑制效果,从而确定有效siRNA.结果:①成功构建HBx-EGFP融合表达质粒pHBx-EGFP,在瞬时表达细胞中,HBx-EGFP绿色荧光主要呈颗粒状,聚集在核膜与核膜外周或细胞浆;②共转染SEC能有效抑制HBx-EGFP的瞬时表达.与siHBx271相比,siHBx388是一高效siRNA位点,并且该位点与tRNAVal和H1启动子搭配更有效.结论:成功建立表达HBx的荧光蛋白报告体系,结合快速制备SEC的方法,可用于进行HBx有效siRNA及其最适搭配启动子的快速筛选.     

ORS治疗小儿急性腹泻480例疗效观察

自1985年10月份以来,我院门诊应用世界卫生组织推荐的口服补液盐(ORS)治疗小儿急性腹泻(包括秋季腹泻)伴脱水,均取得了明显疗效。一般资料 480例患者中,年龄最大14岁,最小一个月;男性296例,女性183例;发病时间最长15天,最短1天。     

乙型肝炎病毒转录后调节元件功能及作用机制

乙型肝炎病毒(HBV)转录体上存在与相应的细胞核蛋白结合的特殊序列,参与转录体稳定性和核浆转运等转录后调节过程。更为重要的是,细胞因子介导非细胞损伤抗HBV的主要作用环节也是在转录后水平。因此,对HBV转录后调节机制的研究不仅能加深对HBV生活周期的认识,而且还将为抗HBV治疗提供新的设计思路。     

乙型肝炎病毒转录后调节元件功能及作用机制

乙型肝炎病毒（HBV）转录体上存在与相应的细胞核蛋白结合的特殊序列，参与转录体稳定性和核浆转运等转录后调节过程。更为重要的是，细胞因子介导非细胞损伤抗HBV的主要作用环节也是在转录后水平。因此，对HBV转录后调节机制的研究不仅能加深对HBV生活周期的认识，而且还将为抗HBV治疗提供新的设计思路。     

HER-2基因Ile655Val多态性与结直肠癌易感性分析

目的 探讨HER-2原癌基因Ile655Val多态性与结直肠癌易感性的相关性,及其在自然人群中的分布频率.方法 应用病例对照研究,对浙江省嘉善县292例结直肠癌患者和842名健康对照者采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测HER-2基因密码子655基因型.结果 结直肠癌组HER-2基因Ile/Val+Val/Val基因型频率(25.34%)和Val等位基因频率(13.36%)均显著高于对照组(18.41%和9.74%)(P<0.05).与Ile/lie基因型携带者相比,Ile/Val+Val/Val基因型携带者患结直肠癌的风险增加(OR=1.54,95%CI:1.11～2.14).HER-2基因多态性与吸烟、饮酒的交互作用OR值分别为1.43(95%CI:0.88～2.30)和1.29(95%CI:0.73～2.29).结论 HER-2基因Ile655Val多态性与结直肠癌易感性相关,但是这种多态性与吸烟、饮酒在结直肠癌发生中不存在交互作用.     

HER-2基因Ile655Val多态性与结直肠癌易感性分析

目的 探讨HER-2原癌基因Ile655Val多态性与结直肠癌易感性的相关性,及其在自然人群中的分布频率.方法 应用病例对照研究,对浙江省嘉善县292例结直肠癌患者和842名健康对照者采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测HER-2基因密码子655基因型.结果 结直肠癌组HER-2基因Ile/Val+Val/Val基因型频率(25.34%)和Val等位基因频率(13.36%)均显著高于对照组(18.41%和9.74%)(P<0.05).与Ile/lie基因型携带者相比,Ile/Val+Val/Val基因型携带者患结直肠癌的风险增加(OR=1.54,95%CI:1.11～2.14).HER-2基因多态性与吸烟、饮酒的交互作用OR值分别为1.43(95%CI:0.88～2.30)和1.29(95%CI:0.73～2.29).结论 HER-2基因Ile655Val多态性与结直肠癌易感性相关,但是这种多态性与吸烟、饮酒在结直肠癌发生中不存在交互作用.     

RNA干扰技术防治病毒性肝炎的研究

RNA干扰技术作为继反义和核酶之后新的强有力的快速基因阻断技术,迅速在基因功能、抗肿瘤和抗病毒的研究领域中掀起热潮。应用RNA干扰技术进行高效抗HCV和HBV的实验研究,以及体内诱导干扰Fas基因表达对小鼠肝损伤的治疗保护作用,显示了该技术在清除慢性感染状态的肝炎病毒和防治肝炎中具有巨大的应用潜力。     

2019冠状病毒病(COVID-19)诊疗浙江经验

当前2019冠状病毒病（COVID-19）疫情仍处于胶着状态。浙江大学医学院附属第一医院是国家感染性疾病临床医学中心,浙江省COVID-19患者救治中心。疫情一线的专家集智攻关,以国家卫生健康委员会和国家中医药管理局发布的COVID-19诊治指南为依据,以抗病毒、抗休克、抗低氧血症、抗继发感染、维持水电解质和酸碱平衡、维持微生态平衡的“四抗二平衡”救治策略为核心,总结完善诊治方案,聚焦临床实践的一些具体问题,为COVID-19患者临床诊治提供借鉴。推荐以多学科协作诊治个性化治疗提高COVID-19患者救治质量。建议病原学检测、炎症指标监测和肺部影像学动态观察指导临床诊治。痰液的病毒核酸检测阳性率最高,约10%的急性期患者血液中检测到病毒核酸,50%的患者粪便中检测到病毒核酸,粪便中可分离出活病毒,须警惕粪便是否具有传染性;开展细胞因子等炎症指标监测有助于发现是否出现细胞因子风暴,判断是否需要人工肝血液净化治疗。通过以“四抗二平衡”为核心的综合治疗提高治愈率、降低病死率;早期抗病毒治疗能减少重症、危重症发生,前期使用阿比多尔联合洛匹那韦/利托那韦抗病毒显示出一定效果。休克和低氧血症多为细胞因子风暴所致,人工肝血液净化治疗能迅速清除炎症介质,阻断细胞因子风暴,对维持水电解质酸碱平衡也有很好的作用,可以提高危重型患者的疗效。重型病例疾病早期可适量、短程应用糖皮质激素。氧疗过程中,患者氧合指数小于200 mmHg时应及时转入重症医学科治疗;采用保守氧疗策略,不推荐常规进行无创通气;机械通气患者应严格执行集束化呼吸机相关性肺炎预防管理策略;氧合指数大于150 mmHg时,及早减、停镇静剂并撤机拔管。不推荐预防性使用抗菌药物,对于病程长,体温反复升高和血降钙素原水平升高的患者可酌情使用抗菌药物;要关注COVID-19患者继发真菌感染的诊治。COVID-19患者有肠道微生态紊乱,肠道乳酸杆菌、双歧杆菌等有益菌减少,推荐对所有患者进行营养和胃肠道功能评估,以营养支持和补充大剂量肠道微生态调节剂,纠正肠道微生态失衡,减少细菌移位和继发感染。COVID-19患者普遍存在焦虑和恐惧心理,应建立动态心理危机干预和处理。提倡中西医结合辨证施治;优化重型患者护理促进康复。严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）感染后病毒清除规律仍不明了,出院后仍须居家隔离2周,并定期随访。以上经验和建议在本中心实行,取得较好效果,但COVID-19是一种新的疾病,其诊治方案及策略仍有待进一步探索与完善。