环状RNA在胃癌发生发展中的作用

人们在细胞中发现一种与线性RNA不同的缺少5′帽和3′polyA尾的共价闭合结构,由于其环形特性,具有更高稳定性和保守性,这种RNA被称为环状RNA(circRNA)。它在转录和转录后水平起调节作用,并影响肿瘤的发生发展。本文着重介绍与胃癌密切相关的circRNAs,对这类circRNAs的特异性表达和生物学功能进行总结,讨论其作为胃癌诊断和判断预后的生物学标志物,挖掘潜在的临床应用价值。     

实时荧光定量PCR法用于人类SLC01B1和ApoE基因多态性检测的方法学评价

目的：探讨在ISO15189实验室认可体系下,实时荧光定量 PCR法检测人类SLC01B1和ApoE基因多态性的方法学评价。方法本文收集经Sanger测序确定基因型的20份DNA样本。采用实时荧光定量PCR法对其中2份样本的SLCO1B1*1b、SLCO1B1*5、ApoE2和ApoE4共4个多态性位点分别批内重复扩增检测10次,以评价方法的精密度;再使用该方法扩增所有样本的4个多态性位点,每个位点检测一次,并与Sanger测序法结果比对,以评价方法的准确性;使用实时荧光定量PCR法对其中1份经梯度稀释的DNA样本进行扩增,以评价方法的最低检测限。结果2份DNA样本扩增所得Ct值变异系数均小于2．5％（≤1％）;与Sanger测序法结果对比,实时荧光定PCR法结果准确性达100％（20／20）;DNA浓度在0．964 ng／μl时,该方法仍可正确检出其基因型。结论借助经典实时荧光定量PCR法,我们能准确、快速地检测临床样本SLC01B1和ApoE基因多态性,用于指导正确合理使用他汀类药物。     

卵巢癌患者CD4+T细胞中调节性T细胞相关分子标志物的表达特点及临床意义

目的:探讨卵巢癌患者外周血和肿瘤组织CD4+调节T细胞中性T细胞相关分子标志物(Foxp3、CD25、CD127、CTLA-4及GITR)的表达特点及其临床意义。方法 :流式细胞术检测31例卵巢癌患者,26例卵巢良性肿瘤患者和20例健康对照者的外周血,以及14例卵巢癌组织和12例卵巢良性肿瘤组织CD4+T细胞中Foxp3、CD25、CD127、CTLA-4及GITR的表达水平。结果:卵巢癌组织CD4+T细胞中的Foxp3、CD25、CTLA-4及GITR的表达水平显著高于卵巢良性肿瘤组织(P<0.05);CD127在卵巢癌组织CD4+T细胞中所占的比例显著低于卵巢良性肿瘤组织(P<0.01);卵巢癌患者外周血CD4+T细胞中Foxp3、CD25、CTLA-4及GITR的表达水平均显著高于卵巢良性肿瘤患者和健康对照者(P<0.01),CD127的表达水平显著低于卵巢良性肿瘤患者和健康对照者(P<0.01);Ⅲ/Ⅳ期卵巢癌患者外周血CD4+T细胞中Foxp3的表达水平显著高于Ⅰ/Ⅱ期患者(P<0.05);Ⅲ/Ⅳ期卵巢癌患者外周血CD4+T细胞中CD127的表达水平显著低于Ⅰ/Ⅱ期患者(P<0.05)。结论:卵巢癌患者外周血及肿瘤组织中CD4+Treg细胞的表达水平显著高于卵巢良性肿瘤组和健康对照组,Foxp3和CD127的表达水平与肿瘤分期有关,提示这两种标志物可作为判断卵巢癌疾病进展的重要指标。     

母乳及婴儿尿液人巨细胞病毒DNA检测在婴儿人巨细胞病毒感染中的应用

目的:定量检测疑似人巨细胞病毒(HCMV)感染婴儿尿液及对应母亲乳汁中HCMV DNA,评估两者在诊断HCMV感染中的价值,并比较两者浓度之间的关系。方法:选取51例疑似HCMV感染的婴儿,收集其新鲜尿液及对应的母亲乳汁,分别用荧光定量聚合酶链式反应法(FQ-PCR)检测HCMV DNA。结果:51例疑似HCMV感染婴儿尿液中,有49例检测出HCMV DNA,阳性率为96.0%(49/51)。51份婴儿母亲乳汁中,有37份检测出HCMV DNA阳性,阳性率为72.5%(37/51)。对37例尿液与乳汁HCMV DNA均为阳性的患儿,分别对尿液与乳汁HCMV DNA浓度取对数,将两者进行相关性分析,结果显示两者之间存在一定的相关性,相关系数为0.332(P<0.05)。结论:婴儿尿液中HCMV DNA检测对于婴儿HCMV的感染具有重要的价值,同时对其母乳HCMV DNA检测,可以发现婴儿尿液和母乳HCMV DNA具有一定的相关性。     

生物发光成像对裸鼠肺部转移瘤的早期检测研究

目的:探讨生物发光成像早期监测裸鼠肺部转移瘤及定量评估肿瘤大小的价值?方法:利用生物发光成像检测含荧光素酶报告基因的人肺腺癌SPC-A1-luc细胞在体内外的生物发光活性?经尾静脉注射SPC-A1-luc细胞建立裸鼠肺部转移瘤模型,应用生物发光成像实时监测肺部转移瘤的生长状态并定量评估肺部肿瘤大小,同时用micro-CT检测肺部转移瘤?结果:SPC-A1-luc细胞能高水平并稳定表达荧光素酶,生物发光光子数与细胞量呈良好的线性相关(R2=0.996 6),且与皮下肿瘤体积呈良好的直线相关(R2=0.984 9)?生物发光成像监测裸鼠肺部转移瘤,在第1周即可检测到肺部弥漫分布的肿瘤细胞,第3周肺部生物发光信号降至最低,定量分析表明此时肺部约有600个肿瘤细胞?而第3周micro-CT未能检测到肺部肿瘤,直到第6周micro-CT才检测到肺部肿瘤?结论:利用生物发光成像能早期监测肺部转移瘤的生长并定量分析肿瘤大小,其灵敏度高于micro-CT成像?     

肺癌中结肠多发性腺瘤样息肉基因启动子1A序列甲基化模式的研究

目的 探寻结肠多发性腺瘤样息肉（APC）基因启动子1A序列中肺癌甲基化位点及其存在模式。方法 用甲基化序列特异性引物，对阳性控制样品（CB＋）、阴性控制样品（CB-）、13份正常肺组织及19份肺癌组织进行APC基因启动子1A序列甲基化特异性扩增（MSP），其扩增产物直接测序和进行克隆测序分析。结果 在19份肺癌组织中，APC基因启动子1A序列的707、714、719和726位点发生高甲基化，甲基化率分别为95％（18／19）、74％（14／19）、74％（14／19）和74％（14／19），与正常肺组织比较，差异均有统计学意义（P〈0．001）。而679和687位点甲基化发生率均为11％（2／19），与正常肺组织甲基化发生率（0／13）接近（P〉0．05）。结论 在APC基因启动子1A序列中存在CpG胞嘧啶二核苷酸特定甲基化模式，其对肺癌早期诊断可能有重要意义。     

《临床检验免疫学》开展双语教学的思考

双语教学为培养高素质医学检验人才提供了一种有效的教育模式。通过对南京医科大学医学检验系实施《临床检验免疫学》双语教学,结合双语教学的实际情况以及医学检验自身的专业特点,提出目前存在的问题及解决措施,从而探索医学检验双语教学改革的新途径,为培养高素质医学检验人才提供一种有效的教育模式。     

实时荧光定量检测人血浆中RASSF1A基因启动子甲基化

目的 建立检测人血浆DNA中RASSF1A基因甲基化的方法.方法 以肺癌细胞株NCI-H460作为RAssF1A基因启动子区甲基化阳性样本,传统酚/氯仿法提取细胞DNA,经紫外分光光度计定量后以10倍稀释的浓度梯度依次投入到200 μl健康人血浆中,制备得到模拟肺癌患者血浆.用磁珠法从模拟血浆样本和15例早期肺癌患者血浆中提取总DNA.对血浆DNA模板进行亚硫酸氢盐化学修饰,并以TaqMan技术的实时荧光定量甲基化特异性PCR(MSP)进行检测.以模拟血浆样品作为标准品,用外标准曲线法对肺癌患者血浆中的甲基化RASSF1A进行定量.结果 实时荧光定量MSP对模拟肺癌患者血浆的检测最低限为150拷贝(甲基化的肿瘤DNA)/ml(血浆).15例肺癌患者5例RASSF1A甲基化阳性(33.3%).5例肺癌患者血浆中甲基化的RASSF1A基因的浓度分别为2.56×103,8.20×104,1.45×104,3.31×104和4.24×104拷贝/ml.结论 实时荧光定量MSP法检测肺癌患者血浆DNA中RASSF1A基因甲基化,灵敏度高,特异性强.     

肺癌细胞促进单核吞噬细胞MAPK相关通路活化诱导炎性细胞因子表达上调的研究

目的：通过建立人单核吞噬细胞系（THP‐1）和人肺腺癌细胞系（SPC‐A1）共培养体系,检测共培养体系中THP‐1的炎性细胞因子mRNA表达水平和丝裂原活化蛋白激酶通路（MAPK）的表达情况,初步阐明肺癌微环境对THP‐1中炎性细胞因子表达的影响。方法体外培养SPC‐A1细胞系、THP‐1细胞系,并建立二者共培养体系,设置THP‐1单独培养组为对照组。24h后,收集各组THP‐1细胞,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real‐TimePCR）检测白细胞介素（IL）‐1β、‐6、‐8及肿瘤坏死因子‐α（TNF‐α）的mRNA表达水平;Westernblot检测MAPK通路蛋白c‐Jun氨基末端激酶及其磷酸化形式（JNK／p‐JNK）、丝裂原活化蛋白激酶p38亚单位及其磷酸化形式（p38MAPK／p‐p38MAPK）、细胞外调节蛋白激酶及其磷酸化形式（ERK／p‐ERK）的表达。结果共培养24h后,共培养组THP‐1的IL‐1β、IL‐8mRNA表达水平均明显高于对照组（P＜0．05）,分别为对照组的5．81、4．21倍;Westernblot结果显示共培养组p38MAPK、p‐p38MAPK的表达水平均明显高于对照组（P＜0．05）。结论肺癌细胞可引起肺癌环境中单核吞噬细胞中p38MAPK通路的活化,进而诱导IL‐1β、IL‐8mRNA表达上调,有利于肿瘤炎症微环境的维持和促进肿瘤的进展。     

血清CA19-9、CEA水平与胰腺癌预后的关系

目的：探讨胰腺癌患者术前血清中CA19-9与CEA表达情况对预后的影响。方法：回顾分析医院2012年1月～2013年12月128例胰腺癌患者临床病理资料,应用Kaplan．Meier法、Log—rank检验及Cox回归分析CA19-9和CEA水平与患者生存时间的关系。血清中CA19-9〉39U／mL,CEA〉4．7ng／mL被视为表达增高。结果：128例患者平均年龄为62岁,中位生存期为12．2月,其中CA19—9和CEA的表达水平增高的比例分别为78．1％,37．5％。CA19-9、CEA升高组患者的预后明显差于正常组（CA19-9,P=0．027;CEA,P=0．036）。Cox多因素回归分析显示淋巴结转移、CA19—9〉39U／mL、CEA〉4．7ng／mL是影响胰腺癌患者预后的独立因素。结论：术前CA19-9、CEA水平与胰腺患者生存时间密切相关,能有效评估患者的预后。