利用EZ-Tn5转座子插入突变探索细菌基因组中影响其耐药性变化的因素

目的研究细菌基因组中影响抗菌药物活性的因素。方法用EZ-Tn5转座复合物通过电转化,随机插入大肠埃希菌BL21细菌染色体基因组,获得BL21菌株的插入突变文库;对所有突变克隆株进行37种抗菌药物体外药敏试验;耐药性发生明显恒定改变的菌株进行反向PCR,并对产物进行测序和序列分析,确定转座子插入的确切位点;结合被灭活基因的表达功能推测耐药性改变的原因。结果确定大肠埃希菌电转化最佳条件为菌液OD值为0.8(600 nm)时进行感受态制备,10%甘油缓冲体系和2.7 V电击电压;共得到182株成功插入Tn5转座子的克隆,建立大肠埃希菌BL21菌株随机插入突变文库,其中插入突变菌株BLmu29对青霉素、头孢唑林、头孢克洛、头孢丙烯等抗菌药物的敏感性增加,其中以对青霉素的变化最为明显,抑菌圈直径从对照菌株的12 mm扩大到17 mm;对其进行反向PCR,并对PCR产物测序证实插入转座子的位点为1736,其灭活的基因为甘油-3-磷酸酰基转移酶。结论灭活大肠埃希菌基因组中甘油-3-磷酸酰基转移酶所对应基因,使对细菌对青霉素等亲水性抗菌药物的耐药表型发生改变,提示此基因可影响大肠埃希菌对于亲水性抗菌药物的耐药性。