骨形态计量学评价低钙对大鼠皮质骨的作用研究

目的 评价低钙饮食对大鼠皮质骨的影响。方法 3月龄SD普通级雄性大鼠40只，随机分为5组。第1、2组饲养1个月，分为正常对照组(1mol，ca1．0％)和极低钙组VLCD(1mol，Ca0．1％)，余下3组饲养3个月，分为正常对照组(3mol，Ca1．0％)、极低钙组VLCD(3mol，Ca0．1％)和低钙组LCD(3mol，Ca0．3％)。各组动物喂养包含对应钙含量的精制饲料，处死前进行双荧光标记。实验结束时，取左侧胫骨中段行骨形态计量学检测。结果 无论是低钙饮食1个月，还是3个月，无论是极度缺钙，还是仅有轻微的钙不足，胫骨中段横截面皮质骨始终未出现显著意义的变化，但骨内膜骨吸收有增加的趋势。结论 低钙对皮质骨作用不明显，这可能与机体在低钙状态下动用骨骼的次序或快慢有关。     

中药配方颗粒辅料麦芽糊精的HPLC定量检测与中红外光谱半定量检测

目的 建立中药配方颗粒辅料麦芽糊精的检测方法,为中药配方颗粒质量评价提供分析技术支持。方法 建立配方颗粒中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的HPLC定量检测方法,根据样品经糖化酶水解后的葡萄糖增加量换算出麦芽糊精含量。基于中药浸膏与麦芽糊精不同比例混合物的中红外光谱（mid-infrared spectroscopy,MIRS）特征峰差异,建立配方颗粒中麦芽糊精的半定量检测方法。结果 所建立的HPLC方法可以准确定量检测配方颗粒中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖。如果中药浸膏自身含有较多可经糖化酶水解产生葡萄糖的成分（淀粉、蔗糖等）,HPLC检测配方颗粒中麦芽糊精时存在系统性正误差,可通过中药浸膏酶解后葡萄糖增加量、待测样品酶解后蔗糖减小量等部分修正正误差。如果中药浸膏自身少含或不含淀粉、蔗糖等可经糖化酶水解产生葡萄糖的成分,HPLC检测配方颗粒中麦芽糊精时存在系统性负误差,换算公式偏差、麦芽糊精纯度、样品处理损失等导致根据样品酶解后葡萄糖增加量计算的麦芽糊精“检测含量”预期低于根据生产投料计算的麦芽糊精“名义含量”。麦芽糊精含量越高,配方颗粒MIRS中1200～900 cm-1区域的...     

检测外周血特异性结核分枝杆菌抗体对活动性结核病的诊断价值研究

目的研究外周血浆细胞分泌特异性结核分枝杆菌抗体对活动性结核病的诊断价值。方法纳入2013年4月至7月期间深圳市第三人民医院肺科门诊活动性结核病患者;健康对照组人员来自体检科门诊志愿者,分为3个组：活动性结核病组（104例）、结核分枝杆菌（Mtb）潜伏感染组（26例）和健康对照组（33名）。分离其外周血单个核细胞（PBMCs）。体外培养4d后收集培养上清液,用ELISA法和蛋白免疫印迹法,ELISA和蛋白免疫印迹法检测外周血浆细胞分泌的特异性结核分枝杆菌抗体;检测各组收集的PBMCs培养上清液中的特异性结核分枝杆菌抗体,比较各组间的差异。所有数据均使用GraphPadPrism5．0进行统计学分析,用受试者工作特征（ROC）曲线评价ELISA法检测的诊断价值,得出敏感度、特异度;多组间的比较采用Kruskal—Wallis检验;两组间比较采用Dunnmultiplecomparison检验;蛋白免疫印迹法用四格表的卡方检验;以P〈0．05为差异有统计学意义。结果ELISA法检测活动性结核病组特异性结核分枝杆菌抗体的A450nm值（0．593±0．206）高于Mtb潜伏感染组（0．342±0．152）和健康对照组（0．246±0．121）,差异有统计学意义（H=77．27,P〈0．001）。特异性结核分枝杆菌抗体区分活动性结核病患者和Mtb潜伏感染者、健康对照者曲线下面积（AUC）分别为0．857、0．944,当诊断界限值为0．42时,其区分活动性结核病和Mtb潜伏感染的敏感度为77．9％（81／104）,特异度为80．8％（21／26）;区分活动性结核病和健康人的敏感度为77．9％（81／104）,特异度为93．9％（31／33）。蛋白免疫印迹法检测活动性结核病和健康人的敏感度、特异度和准确性分别为79．2％（61／77）、100．0％（11／11）、81．8％（72／88）（x2=24．8,P〈0．001）。结论ELISA法和蛋白免疫印迹法检测外周血浆细胞分泌特异性结核分枝杆菌抗体诊断活动性结核病特异度高,可以作为临床结核病实验诊断的辅助方法。     

基于蛋白质相对分子质量与二级结构的阿胶珠炮制程度评价方法研究

目的 探索根据蛋白质相对分子质量与二级结构评价阿胶珠炮制程度的可行性。方法 使用凝胶渗透色谱（GPC）表征阿胶与阿胶珠的蛋白质相对分子质量分布,使用傅里叶变换红外光谱（FTIR）表征蛋白质二级结构。根据阿胶与阿胶珠的蛋白质相对分子质量与二级结构对温度的响应行为,评估阿胶珠炮制阶段的蛋白质变性程度。结果 阿胶珠正常炮制过程中,蛋白质相对分子质量无明显变化,蛋白质二级结构随炮制程度增加而逐渐改变。炮制太过的阿胶珠中物质发生明显的热解,凝胶色谱上出现低相对分子质量的热解产物峰,红外光谱上蛋白质与油脂特征峰也有改变。结论 阿胶炮制成阿胶珠的过程中,蛋白质分子的二级结构逐渐改变。红外光谱酰胺Ⅱ带峰位置的移动,能够反映蛋白质二级结构的变化程度,可用于阿胶珠炮制程度连续评价与终点判断。凝胶色谱是否具有低相对分子质量的热解产物峰,可用于判断阿胶珠炮制是否太过。     

1,8-桉叶油素自微乳给药系统的制备及质量评价和细胞摄取研究

目的优化1,8-桉叶油素(1,8-cineole,1,8-Cin)自微乳给药系统(1,8-cineole self-microemulsion drug delivery system,1,8-Cin-SMEDDS)处方,对其进行表征并进行细胞摄取考察。方法通过绘制伪三元相图,确定1,8-Cin-SMEDDS有效自乳化区域,进行初步处方筛选。以粒径和载药量为指标,采用星点设计-效应面法对1,8-Cin-SMEDDS处方进行优化并验证。荧光显微镜观察高糖损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)对1,8-Cin-SMEDDS的摄取情况。结果 1,8-Cin-SMEDDS的最佳处方是大豆油(7.5%)与1,8-Cin(22.5%)为混合油相,HS15(56%)为乳化剂,乙醇(14%)为助乳化剂,滴加纯水至8m L得半透明略带蓝色乳光液体。透射电镜观察其外观呈球形液滴,激光粒度Zeta电位测定仪测得平均粒径为(131.68±1.44)nm,Zeta电位为(-10.03±1.63)m V;HPLC法测得包封率为(99.890±0.012)%,载药量为(224.750±0.028)mg/g。HUVEC细胞摄取实验结果表明,细胞对1,8-Cin-SMEDDS的摄取高于游离1,8-Cin。结论 1,8-Cin-SMEDDS制备方法简便,重复性好,所得1,8-Cin-SMEDDS外观良好,包封率高,理化性质稳定,且能促进细胞摄取。     

基于“表里关联”的大黄炭炮制过程颜色和成分变化关系研究

目的 研究大黄炭炮制过程颜色特征与化学成分的关联性规律,为建立基于颜色量化值的大黄炭炮制过程控制方法和终点判断标准奠定基础。方法 分别在不同温度和时间下制备大黄炭样品,以大黄炭炮制的经验判断为依据,利用视觉分析仪与紫外-可见光谱仪量化大黄炭不同炮制条件的粉末和饮片颜色。同时采用HPLC指纹图谱的方法评价大黄炭炮制过程中化学成分动态变化,利用多元统计学方法对大黄炭炮制过程样品颜色量化值与特征成分进行关联分析。结果 在大黄炭炮制过程中,随着炭化程度的增大,样品表观颜色由淡黄棕色逐渐加深至焦黑色,样品饮片和粉末的明度值（L^*）、红绿色值（a^*）、黄蓝色值（b^*）之间高度相关。HPLC指纹图谱上26个特征峰的面积与色度值均有不同程度的相关性,其中随炭化程度加深而含量递减的5个结合蒽醌类成分（芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷）和2个番泻苷类成分（番泻苷A、番泻苷B）与色度值呈线性相关关系,含量先增后减的5个游离蒽醌类成分（芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素、大黄素甲醚）、没食子酸和5-羟甲基糠醛（5-HMF）与色度值呈二次相关关系。结论 大黄炭炮制过程中的颜色主观判断与量化检测的分析结果一致,颜色量化值与14种已知化学成分的含量具有显著的相关性,初步推断颜色量化值可作为大黄炭炮制过程的质量控制和终点判定指标,以提高大黄炭饮片的质量水平及其一致性。     

血清胱抑素C与尿转化生长因子β1在重度子痫前期患者中的临床意义

目的探讨重度子痫前期患者血胱抑素C（Cys C）及尿转化生长因子β1（TGF—β1）的临床意义。方法选择重度子痫前期患者35例为实验组，正常晚孕妇女35例为对照组，测定两组血清中的CysC与尿液中的TGF—β1水平。结果重度子痫前期患者血清Cys C与尿TGF-β1较对照组均明显增高（均P〈0．01）；重度子痫前期患者组中，血清CysC水平与尿TGF-β1呈正相关（r=0．581，P〈0．05）。结论在重度子痫前期中检测血清CysC与尿TGF-β1水平，有助于评价肾功能损害程度，对重度子痫前期的诊断和治疗具有一定的指导意义。     

结核病3种实验诊断方法比较与分枝杆菌耐药性分析

目的 比较结核病3种实验诊断方法,分析目前深圳市分枝杆菌耐药情况.方法 统计2009～2010年深圳市第三人民医院临床确诊结核病患者痰标本涂片镜检、培养和PCR检测结果,并对分枝杆菌菌种及对治疗药物耐药情况进行统计分析.结果 共有640例资料齐全的结核病确诊病例入选,其中肺结核537例、结核性胸膜炎82例、结核性脑膜炎21例,分枝杆菌涂片镜检阳性率分别为44.1%、5.3%和13.3%,分枝杆菌培养法阳性率分别为59.9%、12.9%和30.0%,PCR检测阳性率分别为52.2%、16.7%和26.3%.经分枝杆菌菌种鉴定,人型结核分枝杆菌占67.0%、牛型结核分枝杆菌占16.8%、非结核分枝杆菌占16.2%,人型结核分枝杆菌对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素的耐药率分别为16.4%、14.8%、4.7%和15.6%.结论 目前结核病实验诊断方法主要有涂片镜检、培养和PCR检测,病原菌以人型结核分枝杆菌为主,对3种主要抗结核药物的耐药率较高.另外,菌阴结核约占40%,目前对菌阴结核、活动性结核与陈旧性结核的诊断和鉴别诊断困难,期待新的方法.     

PCR-RFLP分析16s-23srDNA间区序列鉴定分枝杆菌菌种

目的探讨16S～23srDNA间区序列DNAPCR扩增和限制性酶切分析在分枝杆菌分类鉴定中的价值。方法对19种分枝杆菌标准株的16S～23SrDNA间区序列DNA进行PCR扩增并对扩增产物进行限制性内切酶HaeⅢ、MSP1消化反应，分析不同菌种扩增片段及其限制性片段长度多态性的差异。结果，PCR扩增结果显示：分枝杆菌一般扩增出1～2条带，缓慢生长分枝杆菌扩增片段在340～480bP，快速生长分枝杆菌扩增片段集中在470～575bP，单从扩增产物的琼脂糖凝胶电泳只能鉴定33．3％的受试菌种，酶切结果显示：分枝杆菌的酶切图谱彼此不同。结论16S～23SrDNA间区序列DNAPCR扩增和RFLP分析是分枝杆菌分类鉴定的一种快速、有效的方法。     

MRI对弥漫性轴索损伤的诊断价值

目的探讨脑弥漫性轴索损伤（DAD的MRI诊断价值。方法搜集经临床确诊的DAI22例，均做MRI扫描。结果22例中共发现50个病灶，其中包括大脑白质32个病灶，小脑3个病灶，胼胝体8个病灶，脑桥2个病灶，大脑脚3个病灶，延髓2个病灶。T1WI呈低信号，T2WI为高信号。结论MRI对DAI具有较高的诊断价值，对临床诊断和治疗具有重要价值。