EV71、CA16及通用型肠道病毒实时荧光定量PCR诊断试剂盒的研发

目的 研制一种新的含竞争性内标引物,能同时检测EV71、CA16及通用型肠道病毒的四重实时荧光定量PCR诊断试剂盒,用于手足口病的临床诊断及流行病学监测.方法 设计特异性的EV71型、CA16型及其他型肠道病毒和内参基因的引物,改进病毒核酸提取方法,优化实时荧光定量PCR检测体系,并研究产品的准确度、稳定性、精密度和扩增效率和检测线性范围.结果 本试剂盒的引物和探针特异性好,试剂盒采用的的病毒RNA抽提效果与QIAGEN公司QIAamp Viral RNAmini Kit抽提效果相当,但具有更低的试剂成本.优化引物探针浓度分别为0.2μmol/L的上下游引物浓度、0.06 μmol/L的通用探针浓度、0.08 μmol/L的EV71分型探针浓度和0.08μmol/L的CA16分型探针浓度.产品具有较好的稳定性和良好的准确度、精密度,CA16、EV71和肠道病毒通用型对引物的扩增效率分别是106％、101％和105％,线性检测范围是109拷贝/μl ～ 102拷贝/μl.结论 采用四重荧光定量PCR技术开发的能同时检测EV71、CA16、其他肠道病毒和内标的手足口病诊断试剂盒具有良好的准确性、稳定性、精密度和扩增效率等,具有很好的临床应用价值.     

微小RNA-21在乳腺癌患者血清中的表达及其与临床病理特征的关系

目的 观察血清微小RNA(miRNA,miR)-214、miR-21和miR-195在乳腺癌患者和健康人血清中的表达,探讨这3个miRNA和乳腺癌的相关性.方法 收集40例乳腺癌患者和10例健康女性的血清,从血清中提取总RNA,应用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测这3个miRNA在两类人群中的表达.应用SPSS 21.0软件对血清中miRNAs的表达水平的差异采用Mann-Whitney U检验进行分析.结果 miR-21在乳腺癌患者血清中的表达量为0.120(0.043～0.299)和正常对照组血清中的表达量[0.011 (0.003 ～0.063)]比较显著上调(P＜0.01);且血清中miR-21与乳腺癌临床分期、淋巴结转移相关(P＜0.01).结论 血清miR-21和乳腺癌的临床病理特征明显相关.     

背景信号抑制全身扩散加权成像技术的原理及应用

背景信号抑制全身扩散加权成像是近期发展非常迅速的一项全身磁共振成像技术。其成像序列为STIR-EPI-DWI,可以在自由呼吸状态下完成全身大范围扫描。在抑制正常组织背景信号的基础上,凸显病变,提高病变部位特别是恶性肿瘤及其转移灶的检出率。本文结合相关文献,对其技术原理及目前临床应用情况进行阐述,有助于对此项新兴检查技术的理解。     

壳聚糖季铵盐的最新研究进展

学术背景:壳聚糖作为一种性能卓越的生物材料已广泛应用在各个领域,但其在某些方面还存在一定的缺陷和不足.对壳聚糖进行改性可以得到新的衍生物壳聚糖季铵盐,增强了正电性和在水中的溶解性,体现壳聚糖季铵盐在生物医学方面的新性能.目的:综述壳聚糖季铵盐在生物医学和轻工业等领域的最新研究进展.检索策略:查找有关壳聚糖季铵盐应用研究方面的文献,应用计算机检索PUBMED数据库和EBSCO数据库,检索词"quaternary AND chitosan",年限不限,限定语言为英语;计算机检索维普资讯中文科技期刊数据库,检索词为"壳聚糖,季铵盐",年限为1989/2007,限定语言为中文.同时手工检索有关书籍.在PUBMED上共收集到39篇相关的英文文献,在EBSCO数据库中搜索到55篇相关的英文文献,在维普资讯上共搜索到55篇相关的中文文献,对文献进行筛选,并确定纳入标准:①选取针对性强,相关度高的文献.②对同一领域的文献选择近期发表或权威杂志的文献;排除重复研究和Meta分析类文章.最后27篇被选用.文献评价:选用27篇文献,均为临床与实验研究.资料综合: 壳聚糖作为优良的生物材料,应用已十分广泛,但是它的水不溶性限制了它在很多方面的运用.新的壳聚糖衍生物壳聚糖季铵盐克服了壳聚糖本身的溶解性差的缺点,在生理条件下也能很好地溶解,在生物相容性、抗菌性、吸湿保湿等性能方面均明显优于壳聚糖.结论:壳聚糖季铵盐的研究已经成为各领域研究的新热点,其应用前景将更加广阔,对相关作用的认识有待于进一步深入.     

壳聚糖季铵盐作为基因递送载体的初步研究

目的考察壳聚糖季铵盐体外基因转染活性,寻求一种新的非病毒基因载体递送系统。方法凝胶阻滞实验分析壳聚糖季铵盐包裹质粒的能力,DNase I的保护实验分析载基因纳米粒的抵抗核酸酶降解的能力,体外基因转染实验评价纳米粒的体外转染活性,用倒置荧光显微镜观察和流式细胞仪测定转染结果。通过考察转染液中有无牛血清和递送不同剂量的基因对转染效率的影响,寻求本递送系统较好的转染条件。另外,用MTT法测定壳聚糖季铵盐的细胞毒性。观察壳聚糖季铵盐和pcDNA 3．1-EGFP以何种比例结合形成的纳米粒、转染液中有无牛血清,质粒的量为多少时对人胚肾T细胞的转染效率是最高的;不同浓度的壳聚糖季铵盐对细胞生长的影响。结果壳聚糖季铵盐纳米粒能转入人胚肾T细胞,虽然转染效率略逊于聚乙烯亚胺,但是细胞毒性明显小于聚乙烯亚胺。壳聚糖季铵盐纳米粒转染细胞72h后效率较高,经综合分析,当pcDNA质量为2μG,壳聚糖季铵盐和peDNA以质量比为5结合形成的纳米粒,在无血清条件下对人胚肾T细胞进行转染,转染效率是最高的。结论壳聚糖季铵盐纳米粒能将基因递送到细胞内,并且报告基因能在细胞内表达。因此,壳聚糖季铵盐用做基因递送的载体系统值得进一步的研究。     

阿卡波糖联合二甲双胍治疗2型糖尿病的疗效观察

目的 探讨阿卡波糖联合二甲双胍治疗2型糖尿病的疗效.方法 选择2010年1月～2013年1月在我院内分泌科住院治疗的2型糖尿病患者80例,符合1999年世界卫生组织糖尿病诊断标准,治疗前3个月内无严重心肝肾脏或胰腺并发症及妊娠女性.采用随机数字表将纳入的80例2型糖尿病患者分为观察组和对照组各40例,两组患者均严格控制饮食、加强锻炼,在此基础上对照组予二甲双胍每次0.5g,口服,每日3次,观察组同时联合予阿卡波糖50 mg嚼碎吞服,每日3次,疗程共12周.结果 治疗前对两组患者的FPG、2hPG、HbA1c组间分别比较,差异不显著（P＞0.05）.治疗12周后,两组患者的FPG、2hPG、HbA1c均分别较治疗前明显降低,差异具有显著性（P＜0.05）.且观察组治疗12周后其FPG、2hPG、HbA1c分别较对照组降低更显著,组间比较,差异具有显著性（P＜0.05）.观察组患者显效17例,有效20例,无效3例,对照组显效15例,有效15例,无效10例,观察组患者治疗后的总有效率达92.5%,对照组治疗后的总有效率75.0%,两组治疗后的疗效比较差异具有显著性（P＜0.05）,观察组患者治疗12周后血糖控制的疗效明显优于对照组.治疗12周期间,观察组出现低血糖2例,低血糖发生率达5.0%,对照组治疗期间出现低血糖8例,低血糖发生率达20.0%,观察组低血糖的发生率明显低于对照组（χ2=4.873,P＜0.05）.结论 在严格控制饮食、加强锻炼的基础上应用阿卡波糖联合二甲双胍治疗2型糖尿病疗效确切,可以显著改善患者的血糖水平,降低低血糖发生率,值得广泛推广和应用.     

海人酸致痫大鼠颞叶、海马区多药耐药基因1、P-糖蛋白的表达及相互关系

目的 探讨癫痫大鼠颞叶、海马区多药耐药基因1(MDR1)及P-糖蛋白(Pgp)的表达及其相互关系.方法 选择健康清洁级雄性SD大鼠50只.采用随机数字表法将大鼠分为观察组和对照组.观察组大鼠海马区注射海人酸(KA)2 μl(含KA 1 μg),制作颞叶耐药性癫痫(RE)模型(成功22只),对照组同法注射0.9％氯化钠注...     

采用神经血管线圈和体线圈测量颈部良性淋巴结表观弥散系数值的稳定性

目的 观察神经血管线圈和体线圈接收信号测量的颈部良性淋巴结的ADC值与指数化ADC(eADC)值是否存在差异。 方法 对15名健康志愿者于同日内分别采用8通道神经血管线圈和体线圈行颈部DWI扫描,b值均取0、800 s/mm²,对比双侧(30个)及左右分侧(各15个)良性淋巴结DWI图、ADC图及eADC图特点,分别测量两种线圈测量出的淋巴结ADC及eADC值,并进行比较。 结果 对15名受检者采用两种线圈扫描均获得可测量ADC的图像。神经血管线圈测量出的淋巴结平均ADC值为(0.892±0.165)×10^-3 mm²/s,平均eADC值为(0.425±0.068)×10^-3 mm²/s;体线圈测量出的淋巴结的平均ADC值为(0.857±0.142)×10^-3 mm²/s,平均eADC值为(0.432±0.057)×10^-3 mm²/s。采用两种线圈所获双侧或左右分侧淋巴结的ADC值、eADC值之间差异均无统计学意义(P>0.05)。 结论 采用神经血管线圈或体线圈接收信号对颈部良性淋巴结DWI ADC值的测量无影响。     

多重荧光定量聚合酶链反应对呼吸道感染患儿支原体和衣原体感染的诊断价值

目的 探讨多重荧光定量PCR技术(TaqMan探针法)在检测呼吸道感染住院患儿中肺炎支原体(MP)、肺炎衣原体(CP)和沙眼衣原体(CT)的应用价值.方法 构建质粒标准品,梯度稀释后进行扩增建立标准曲线检测多重荧光定量PCR方法的扩增效率,并验证其敏感性、特异性和重复性;收集151例疑似呼吸道感染住院患儿的咽拭子样本,采用多重荧光定量PCR技术检测MP、CP和CT基因片段,其中128例样本同时进行MP-IgM和CP-IgM的血清学检测,评价该方法在临床检测中的应用价值.结果 本实验中MP、CP和CT三种病原体的引物和探针的扩增效率分别达到109.20％、116.90％和112.80％,三种病原体的最低检出浓度分别为50、25和25 pg/μL,与其他已知病原体不存在交叉反应;不同批次间三种病原体的扩增Ct值的变异系数均小于3％.151份样本中,多重PCR检测出MP、CP和CT阳性率分别为23.84％(36份)、17.88％(27份)和2.65％(4份),128份样本中MP-IgM阳性检出率为22.65％;CP-IgM阳性检出率为14.06％.结论 多重荧光定量PCR方法可以为临床幼儿呼吸道感染病原体的早期检测提供快速可靠的辅助诊断依据.     

流感病毒感染A549细胞外泌体差异microRNA筛选及靶基因分析

目的：提取、鉴定甲型流感病毒（A/PR8/34,PR8）感染A549细胞外泌体，检测外泌体差异表达miRNA并进行靶基因预测、分析。方法：间接免疫荧光法检测PR8对A549细胞的感染率；超速离心法和免疫磁珠法提取、纯化PR8感染细胞外泌体（PR8-exos）及正常A549细胞外泌体（Con-exos）；透射电镜观察外泌体形态和粒径大小；纳米粒径分析（NTA）检测外泌体粒径分布；Western blot检测外泌体标志蛋白；RNAseq检测外泌体差异表达miRNA;KEGG和GO富集分析差异miRNA靶基因。结果：100 TCID50的PR8对A549细胞感染率为100%；透射电镜观察PR8-exos及Con-exos均为杯托状双层膜小囊泡结构；PR8-exos和Con-exos粒径大小分布几乎一致，Con-exos浓度为8.3×1010Particles/ml,PR8-exos浓度为1.6×1011Particles/ml,PR8组外泌体浓度高于对照组；PR8-exos及Con-exos均检测出CD63、CD9和Hsp70蛋白表达，而未检测到calnexin;PR8-exos和Conex...