骨钙素酶免疫检测方法的研究和应用

目的：建立骨钙素酶免疫测定方法，并应用于临床检测血清骨钙素。方法：应用了3种检测模式，根据检测灵敏度、剂量反应曲线的形态进行分析，选择出合适的模式进一步应用于临床血清标本的骨钙素检测。结果：所采用的骨钙素单克隆抗体是钙离子依赖型的。固相抗原竞争法适合于临床定量测定骨钙素。最低可测限为1．4μg/L;20μg/L骨钙素样品批内CV＝3．98％，批间CV＝12．67％。测定正常献血员140名（年龄17－45岁），第5－95百分位点的骨钙素含量，男性为7．5－15．0μg/L女性为7.0-17.5μg/L。70例疑有骨质疏松症患者血清骨钙素含量2．91－30．20μg/L，以第95百分位点的骨钙素含量为cut-off值，升高5例。与进口试剂盒（Novocalcin,USA）相比较，有较好的相关性，r=0.81。结论：固相抗原竞争法酶免疫测定可以灵敏地检测血清中骨钙素含量，有实用价值。     

纤溶酶-α2抗纤溶酶复合物单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :制备纤溶酶 α2 抗纤溶酶复合物 (PAP)的单克隆抗体(mAb)。方法 :以从血浆中纯化的PAP免疫BALB/c小鼠。按常规方法融合 ,以固相等分子浓度的纤溶酶原、α2 抗纤溶酶(α2 AP)及PAP为抗原 ,建立间接ELISA筛选杂交瘤细胞培养上清 ,并对杂交瘤细胞分泌的mAb的特异性和亲和力进行鉴定。结果 :共获得 2 4株可稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞。其中 ,针对PAP分子中纤溶酶结构的mAb 16株 ,针对α2 AP结构的mAb 1株 ,针对新抗原 (PAP分子中新出现的不同于前体分子纤溶酶原及α2 AP的抗原决定簇 )结构的mAb 7株。这些腹水中抗PAPmAb的滴度为 2× 10 -4～ 1× 10 -8,其中 4株mAb的亲和常数为 5 .6 2× 10 -9～ 3.5 8× 10 -11mol/L之间。结论 :成功地制备针对PAP新抗原的具有高亲和力的mAb ,为建立不受其前体分子干扰的PAP特异性检测方法 ,研究纤溶系统的激活状态提供了工具。     

标记免疫测定技术的研究进展

近年来检验医学迅速发展，临床实验室使用的免疫测定技术也日新月异。作为临床免疫测定技术的一个重要分支——标记免疫测定技术是最为活跃的，也是发展最快的，其基本原理是利用抗原抗体反应的高度特异性，加上各种标记物的可测量性来达到方便敏感地检测体内各种微量生物活性物质的目的。     

POCT的研究进展及应用

该文简要介绍了POCT(point of care testing,POCT)在仪器、信息化、质量管理方面的研究进展及临床应用情况。     

与人精子抗原交叉的大肠埃希菌506株Mr36000蛋白的提取 …

以ＳＤＳ和超声波处理大量培养的Ｅ．ｃｏｌｉ５０６株制备全菌蛋白。首先采用（ＮＨ４）２ＳＯ４分段盐分析Ｍｒ３６０００蛋白进行初步纯化。     

cTnI( 28-110aa)-linker-TnC融合蛋白基因的构建、表达及鉴定

目的构建及表达人cTnI（28-110aa）-linker-TnC融合蛋白。方法应用PCR技术从人心脏cDNA文库中扩增出cTnI（28-110aa）和TnC基因，通过引物设计在两者之间加上linker序列即编码19个中性氨基酸残基TS-（G4S）3-AC的序列，克隆PCR产物，并构建成pET28a-cTnI（28-110aa）-linker-TnC表达质粒，转化人大肠杆菌表达菌株BL21（DE3），用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导目的蛋白的表达，NTA树脂亲和层析纯化后检测其纯度和免疫反应性。结果成功构建了cTnI（28-110aa）-linker-TnC融合蛋白的基因，并在大肠杆菌中实现可溶性高表达，在摇瓶中的表达量为20mg／L．经一步NTA树脂亲和层析纯化，获得条带单一的目的蛋白，采用进口全自动免疫检测系统鉴定证实．目的蛋白有较高的免疫反应性。结论采用原核表达方法获得了具有高纯度和高免疫反应活性的cTnI（28-110aa）-linker-TnC融合蛋白。     

心血管疾病的生化标志物

在西方发达国家，心脑血管疾病的发病率和死亡率一直占首位，在我国发病人数也在增加，并呈低龄化的趋势。检测心血管疾病标志物有助于对早期和终末期心脏疾病的鉴别诊断和预后判断。检测技术尤其是POCT(point of care testing)应用的发展，将会进一步发挥这些标志物的作用：     

纤溶酶-α2抗纤溶酶复合物检测方法的建立和初步临床应用

目的　建立纤溶酶 α2 抗纤溶酶复合物 (PAP)的检测方法。方法　从血浆中纯化PAP作为免疫原制备单克隆抗体 (单抗 ) ,建立双抗体夹心法酶联免疫吸附试验 (ELISA) ,并对该法进行评价。结果　获取了特异针对PAP新抗原的单抗LW 3C10 ,和针对PAP及纤溶酶原 (Plg)的单抗LW 2B9。对PAP的亲和常数分别为 4 6 9× 10 10 mol/L、5 6 2× 10 9mol/L。以它们建立的夹心ELISA检测PAP在 0～ 15 0 μg/L范围内线性良好 ,批内、批间CV分别为 4 0 %～ 5 2 %、11 2 %～ 13 6 % ,回收率为 85%～ 10 5 % ,加入α2 抗纤溶酶 (α2 AP)及纤溶酶 α2 巨球蛋白复合物 (P α2 M)不干扰测定 ,与美国ADI公司PAP试剂盒相关良好 (r=0 96 2 9)。急性髓细胞白血病组、急性心肌梗死组、肝病组、健康老年人组的血浆PAP水平显著高于正常对照组 (P <0 0 0 1)。结论　该法可用于评估纤溶系统激活。     

联合检测甲胎蛋白和癌胚抗原的胶体金免疫层析试剂的研制及性能评价

目的 建立一种新型的联合检测甲胎蛋白(AFP)和癌胚抗原(CEA)的胶体金免疫层析法(GICA).方法 G4和C2为一对抗AFP单克隆抗体(McAb),A1和C9为另一对抗CEA McAb,G4和A1分别以直线形式平行包被于固相硝酸纤维素(NC)膜上,C2和C9分别与胶体金结合后固定于结合物垫,制备成GICA试剂条.膜上另包被2 mg/mL兔抗鼠IgG抗体,用于检测有效性.结果 利用双抗体夹心原理,建立了可同时检测血清中AFP和CEA的GICA.本法经AFP和CEA标准液测定,试剂的敏感性为AFP (30 μg/L)、CEA (10 μg/L),与血红蛋白、人白蛋白、人球蛋白等无交叉反应,稳定性试验表明试剂可以在室温保存6个月以上.86份经化学发光免疫分析仪定量测定AFP、CEA浓度的临床血清标本用于本法的对比测定,符合性良好.结论 联合检测AFP和CEA的GICA试剂具有结果 可靠、方法 简便、快速等优点,与化学发光法测定结果 符合性良好.     

非小细胞肺癌患者血清血管内皮生长因子测定的临床意义

目的:监测血清血管内皮生长因子(VEGF)对评估非小细胞肺癌(NSCLC)患者预后的判断价值。方法:采用ELISA方法检测54例NSCLC患者血清VEGF的含量,分析血清VEGF水平与反映病程进展情况的TNM分期中T、N、M各参数以及患者生存期之间的关系。结果:血清VEGF水平与肺癌侵袭范围密切相关,T3鄄T4患者血清VEGF升高率明显高于T1鄄T2患者(P<0.01)。血清VEGF水平与淋巴结转移程度密切相关,N3患者血清VEGF较N1鄄N2患者明显升高(P<0.01)。有远处转移的患者中72.7%(16/22)血清VEGF升高,而无远处转移的患者血清VEGF升高仅40.6%(13/32),两者差异有显著性(P<0.05)。血清VEGF与患者生存期亦密切相关,生存≥6个月者37.5%(9/24)的患者血清VEGF升高,而生存期<6个月者66.7%(20/30)的患者血清VEGF升高,两者间差异有显著性(P<0.05)。结论:血清VEGF与NSCLC患者的病程进展及生存期相关,是一种有用的预后判断指标。