免疫组化法检测非甲-非庚型肝炎患者肝组织中输血传播病毒

目的　检测非甲-非庚型肝炎患者肝组织输血传播病毒(TTV)感染状况,TTV感染与肝组织炎症程度 及与血液学指标的相关性。方法　应用免疫组织化学法检测52例非甲-非庚型肝炎患者肝组织中TTV,并经原位 杂交证实;对TTV阳性和阴性组的血液学生化指标,诸如血清丙氨酸转氨酶(ALT)、血清天冬氨酸转氨酶(AST)、血 清总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)、γ 球蛋白(γ G)、凝血酶原活动度(PTA)及组织学活动指数(HAI)进行了比较。 结果　非甲-非庚型肝炎患者肝组织中TTV抗原(TTVAg)阳性15例,检出率为28.8%;阳性物质主要定位于肝细 胞浆内,呈棕黄色细小颗粒,偶见肝细胞核内有表达;TTV阳性表达细胞呈单个、散在或片簇状分布;TTVAg阳性的 组织切片经苏木素-伊红(HE)染色后,可观察到病毒性肝炎的一些病理变化,如肝细胞胞浆疏松化、气球样变、嗜酸 样变、灶性坏死、凋亡、小叶内及汇管区炎细胞浸润;从15例TTVAg阳性病例中任选10例进行TTV DNA原位杂交 检测,结果8例阳性,二者符合率80.0%;同时对5例免疫组化TTVAg阴性肝组织进行TTV DNA原位杂交检测,结 果5例均为阴性,二者符合率100%;TTVAg阳性组ALT、AST、TBIL、γ G均值均高于TTVAg阴性组,ALB、PTA 均值均低于TTVAg阴性组,但两组比较差异无统计学意义(P>0.0     

52 例病毒性肝炎患者肝组织中丙型肝炎病毒 RNA 和 HCAg-NS3 的测定

应用地高辛标记探针原位杂交法和单克隆抗ＨＣＶ－ＮＳ３－ＨＲＰ建立直接酶标免疫组化法分别测定５２例肝炎患者肝组织ＨＣＶＲＮＡ和ＨＣＡｇ－ＮＳ３。结果抗ＨＣＶ阳性组ＨＣＶＲＮＡ检出率５７．１％（１６／２８），ＨＣＡｇ－ＮＳ３检出率５３．６％（１５／２８）；抗ＨＣＶ阴性组其两项检出率均为１２．５％（３／２４）。肝组织中ＨＣＶＲＮＡ阳性物呈蓝紫色细小颗粒存在于肝细胞核或胞浆内，其在肝小叶中的分布可分为３型，即弥漫型、局灶型、散在型。肝组织中ＨＣＡｇ－ＮＳ３阳性物呈棕黄色细小颗粒分布于肝细胞核或胞浆内，以单个或数个阳性细胞散布于肝小叶中。２３例ＨＣＶＲＮＡ或／和ＨＣＡｇ－ＮＳ３阳性病例以肝炎后肝硬化（ＬＣ）病例占多数（１４／２３），其次为慢性重型肝炎（ＣＳＨ）和中度慢性肝炎（ＣＡＨ）。此两种检测方法具有较高符合率（９０．４％，４７／５２），表明病毒核酸及其表达产物均存在于肝细胞内，与ＨＣＶ感染密切相关。这为ＨＣＶ感染诊断提供了直接依据，有利于研究ＨＣＶ感染中病毒复制、慢性化进程、抗病毒治疗监测及重叠感染时病毒相互关系。     

HBsAg中蛋白与IL-18联合核酸免疫HBsAg转基因小鼠的实验研究

对乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)转基因小鼠鼠系所进行的ＨＢＶ核酸疫苗免疫转基因小鼠的实验研究〔1,2〕 提示核酸疫苗有治疗潜力。本研究的目的是研究在白细胞介素 18(ＩＬ 18)的辅助作用下 ,ＨＢＶ表面抗原中蛋白核酸疫苗免疫ＨＢｓＡｇ转基因小鼠的效果。材料与方法质粒构建 :引物设计 :上游引物 :5′ ＧＴＡＣＴＧＣＡＧＧＣＣＡＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＴＴＣＣ 3′ ;下游引物 :5′ ＧＴＡＧＡＴＣＴＧＡＧＡＧＴＡＡＣＣＣＣＡＴＣＴＣＴＴＴＧ 3′。ＰＣＲ法扩增ＨＢｓＡｇ中蛋白基因序列 ,将ＰＣＲ产物亚克隆至ｐＧＥＭＴｅａｓｙ载体 (Ｐｒ…     

原位杂交法检测肝组织中输血传播病毒

采用对称和不对称PCR法 ,以地高辛素标记双链和单链探针 ,用原位杂交法检测了 56例肝组织中输血传播病毒 (TTV)核酸 ,以探讨TTV的致病性。发现 51例非甲～非庚型肝炎肝组织中TTV总检出率为 2 7.5% ( 1 4 /51 ) ;5例非肝炎肝组织杂交阴性。TTVDNA主要定位于肝细胞核内 ,受染肝细胞见于急性、慢性和重症肝炎的肝组织。双链探针杂交结果与单链探针检测病毒基因链的结果一致 ,2例 ( 2 /6)例组织TTV基因链与互补链同时存在。提示TTV是导致肝炎的一种新病原 ,并且在肝脏内有复制     

自身免疫性肝病的病理学新进展

自身免疫性肝病是指由于机体免疫系统攻击自体肝组织引起的肝组织损伤和肝功能异常的一组免疫性疾病,包括有自身免疫性肝炎(AIH)、原发性胆汁性肝硬化(PBC)和原发性硬化性胆管炎(PSC).通常情况下这三种肝脏疾病独立存在,约有6％～9％的患者可以在同一时段或病程中出现两种疾病的临床表现、血清学和组织学特征,称为重叠综合征.近年来随着对自身免疫性肝病认识水平的提高以及自身抗体检测方法的不断改进,一些学者在自身免疫性肝病的经典肝组织学病变特点的基础上,提出了一些见解,介绍如下.     

严重急性呼吸综合征的肺组织损伤病理改变

目的 观察严重急性呼吸综合征(SARS)死亡患者的肺部病变特点。方法 采用光镜、组织特殊染色对3例SARS死亡患者的肺组织进行了重点观察。采用兔抗-Fas、鼠抗-PCNA、鼠抗-CD83、CD4、CD8单克隆抗体，经免疫组织化学法对肺及肺门淋巴结等组织进行了检测。结果 肺脏的外观多呈红色或紫红色，镜下显示不同程度的间质渗出性或漏出性炎症和肺泡损伤，肺泡间隔内单个核细胞浸润，肺泡腔内有透明膜形成及凋亡脱落的Ⅱ型肺泡上皮细胞。一些肺泡毛细血管腔内可见纤维素性血栓形成，支气管动脉腔内有血栓栓塞。增宽的肺泡间隔内有纤维素沉积。3例肺泡腔内未见明显地巨细胞浸润。免疫组织化学检测显示，增殖细胞核抗原阳性细胞少见，Ⅱ型肺泡上皮细胞及肺泡间隔、肺门淋巴结内的单个核细胞有较多的Fas抗原表达；与慢性炎性淋巴结相比，SARS患者的肺门淋巴结内淋巴细胞结构破坏、淋巴细胞稀疏、数量明显减少，但CD83及CD8阳性细胞仍较多见，而CD4阳性淋巴细胞少见。脾脏也可观察到淋巴细胞数量的减少，白髓萎缩，出血坏死，表达CD4的阳性细胞减少。结论 严重的肺组织及免疫系统损伤可能导致SARS患者的死亡。     

自身抗体对原发性胆汁性肝硬化的诊断意义

[目的]分析原发性胆汁性肝硬化(PBC)出现的自身抗体及其临床意义，探讨自身免疫性肝病重叠综合征的特点。[方法]用间接免疫荧光法检测52例PBC患者的ANA、AMA、SMA和LKM、LMA及LSP等抗体，用欧蒙印迹法检测ANA谱、AMA亚型抗体及SLA／IP、LKM—1和LC—1等肝脏疾病相关的自身抗体。[结果]全部PBC患者AMA和AMA—M2抗体均为阳性，52例中18例检测了AMA—M4、M9抗体，分别有9例和8例阳性。52例中ANA阳性41例(78．4％)，主要表现为细胞核膜型(19例)、核点型(11例)和着丝点型(8例)的荧光模式。其他少见的荧光模式有：抗SS—A/SS—B型、核均质型、核仁型及核颗粒型。多数PBC患者ANA为两种荧光模式的混合。荧光模式为着丝点型者CENP—B均为阳性。52例中有6例患者表现为自身免疫性肝病重叠综合征，其中2例SLA／IP阳性，提示AIHⅢ型与PBC的重叠；1例LKM—1阳性，提示AIHⅡ型与PBC的重叠；3例．ANA阳性，肝活检证实2例存在自身免疫性肝炎(AIH)和PBC的病理改变，1例仅有界面性炎的改变，提示AIHⅠ型与PBC的重叠综合征。重叠综合征男：女=4：2，年龄偏低，疾病进展较快。[结论]AMA和AMA—M2对PBC具有诊断意义；多数PBC患者ANA阳性并且有其特征性荧光模式，这种特征对AMA—M2阴性的PBC有诊断意义。PBC患者出现AIH的自身抗体时应考虑重叠综合征的诊断。此类重叠综合征患者在发病年龄、性别及抗体方面有不同于PBC的特点。     

a—SMA在慢性乙型病毒性肝炎肝组织中的表达

将a-SMA(a-smooth muscle actin)作为肝脏HSC(hepatic stellate cell)活化的标志，在肝病科研中已被广泛应用。虽然判断HSC活化的新型标志物近几年层出不穷，但其稳定性、特异性等方面还有待今后科研中进一步论证^[1.2]。本研究的目的在于通过探讨CHB患肝组织中。a-SMA的表达情况，寻求新的CHB病理诊断依据，为临床医师了解病情、指导用药及判断预后提供参考：     

原发性胆汁性肝硬化患者自身抗体检测的临床意义

目的了解抗线粒体M2亚型抗体（AMA-M2）阳性原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者自身抗体的种类和临床意义。方法92例AMA—M2阳性PBC患者,应用间接免疫荧光法,采用肝脏马赛克,包括猴肝和心肌、大鼠肝、胃、肾脏和人类上皮培养细胞（Hep2）为组织基质检测血清中的自身抗体;并用免疫印迹法检测AMA亚型（M2、M4和M9）、可提取的核抗原（ENA）抗体[核糖核蛋白／史密斯抗体（nRNP／Sm）、史密斯抗体（Sm）、干燥综合征抗原A抗体（SS-A）、干燥综合征抗原B抗体（SS-B）、硬皮病70抗体（Scl-70）、Jo-1抗体（Jo-1）、着丝点B蛋白抗体（CENPB）、双链DNA抗体（dsDNA）、组蛋白抗体（histones）和抗核糖核酸P蛋白抗体（rib-Pprotein）]和肝病相关自身抗体。结果92例PBC患者中有73例（79．35％）血清中存在抗核抗体（ANA）;其荧光模式分别为核膜型42例（45．65％）,着丝点型18例（19．57％）,核浆颗粒16例（17．39％）和核点型12例（13．02％）;ENA检测结果：CENPB阳性18例,SSIA阳性6例,SS-A＋SS-B阳性3例,组蛋白抗体和nRNP／Sm阳性各1例;AMA分型检测中单-AMA-M2阳性62例（67．39％）,AMA-M2＋M4阳性26例（28．26％）,AMA—M2＋M4＋M9阳性3例;还发现AMA-M2伴M4阳性的患者全部为疾病进展到肝硬化的阶段。结论大多数PBC患者血清中存在ANA,其荧光模式主要为核膜、着丝点、核浆颗粒和核点型;AMA-M2和M4亚型抗体为诊断PBC的重要血清免疫学标志,并且AMA—M4与疾病进程密切相关。