人ARPC2基因的克隆与表达

目的 构建人His-ARPC2融合蛋白表达载体，并在原核细胞中进行表达与纯化．以研究其功能及鉴定与其相互作用的蛋白。方法 采用PCR方法从人肝cDNA文库扩增ARPC2基因编码区,使用常规酶切、连接方法将其重组至pET-14b载体中。对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定。转化BL21(DE3)大肠杆菌株，用异丙基β-D硫代半乳糖(IPTG)诱导融合蛋白表达，并利用Ni-NTA亲和层析纯化该融合蛋白。结果 所构建的人ARPC2的His融合蛋白表达载体是正确的，该载体可在大肠杆菌内高效表达，用Ni-NTA纯化获得了相对分子质量约36000的融合蛋白。结论 成功构建了人His-ARPC2融合蛋白表达载体，并在原核细胞中获得了高效表达和纯化，为进一步研究ARPC2的生理功能提供了重要的实验材料。     

基于核磁共振氢谱建立多发伤患者微循环损伤程度的预测模型

目的 应用以核磁共振氢谱(HNMR)技术为基础的代谢组学方法,结合机器学习,建立多发伤患者微循环损伤程度的预测模型,从而达到对多发伤患者进行及早精准治疗的目的。方法 本研究纳入2021年6月至2022年5月四川省人民医院急诊科收治的30例多发伤合并失血性休克患者,在患者进入急诊抢救室后2h内采集血清样本,经预处理后采集HNMR数据。根据休克指数(SI)将多发伤患者分为A组(SI≥1.5)和B组(1.5>SI≥1),利用MestReNova软件提取两组的HNMR数据,再利用MetaboAnalyst 5.0进行偏最小二乘判别分析(PLS-DA),结合人类代谢组数据库(HM-DB)和京都基因和基因组百科全书(KEGG),找出能够区分两组的代谢物及相关的代谢途径。结果A组共纳入20例,B组共纳入10例。与B组比较,A组的烟酰胺、L-5-羟色氨酸、3-羟基苯乙酸、4-羟基苯甲醛、烟尿酸、L-犬尿氨酸、N-甲基烟酰胺、烟酸、5-羟基吲哚、伞形花序酮、N-乙酰血清素、N-氧代烟酰胺、肌苷水平升高;L-乙酰肉碱水平降低(P<0.05)。通路富集分析得出色氨酸代谢及烟酸和烟碱胺代谢途径在两组间的差异均有统计学意义(P<0.05),其中色氨酸代谢途径的影响最大(影响因子=0.29)。结论 本研究首次通过检测不同休克指数多发伤患者血清,找到了组间的代谢差异,为今后使用其他更方便的样本建立多发伤患者微循环损伤程度的预测模型提供了理论支持,但本研究样本量偏小,未来还需要对更大的样本量进行定量实验。     

肝癌再手术的优越性及术式的选择

肝癌是目前最常见的恶性肿瘤之一,肝癌发病率位居恶性肿瘤发病率第5位,病死率居第3位[1]。随着医学水平的提高,肝癌的治疗比以往取得了有较大的进展,尽管采取了积极的手术治疗结合化疗、放疗等治疗方案,但肝癌的长期生存率仍然很低,主要原因在于肝癌术后复发[2]。所谓肝癌的复发包括原发部位的复发、肝内其他部位肿瘤的形成和肝外远处转移,肝内肝癌的复发率为68%～96%[3]。即使行肝癌根治切除的患者,术后3年的复发转移率也有40%～50%,术后5年复发率高达60%～70%[4]。     

严重急性呼吸综合征患者细胞因子与趋化因子表达谱的特征

由于严重急性呼吸综合征(SARS)的免疫病理机制尚未阐明,目前尚无有效药物或治疗方法能够控制这种疾病.为了探讨SARS发病的免疫学机制,我们研究了SARS患者外周血细胞因子与趋化因子的表达谱以及肺和淋巴组织的免疫病理改变.采用液相芯片技术,动态扫描了23例诊断明确的SARS患者血中14种细胞因子与趋化因子;应用反转录PCR、免疫组化和免疫荧光技术对SARS死亡患者经尸体解剖的肺和淋巴组织进行免疫病理学观察.     

益气活血通脉颗粒治疗冠心病经皮冠状动脉介入术后气虚血瘀证患者的疗效观察

【目的】 观察益气活血通脉颗粒对冠心病经皮冠状动脉介入术（PCI）后气虚血瘀证患者心功能、血液流变学和炎症指标的影响。【方法】 将60例冠心病PCI术后气虚血瘀证患者随机分为试验组和对照组,每组各30例。对照组给予冠心病PCI术后常规治疗,试验组在对照组的基础上加用益气活血通脉颗粒治疗,疗程为8周并随访6个月。观察2组患者治疗前后中医证候评分、心功能指标、炎症指标、血液流变学指标的变化情况,比较2组患者的中医证候疗效和不良事件发生率。【结果】（1）中医证候疗效方面：治疗8周后,试验组的总有效率为86.7%（26/30）,对照组为70.0%（21/30）,组间比较,试验组的中医证候疗效明显优于对照组（P＜0.05）。（2）中医证候评分方面：治疗后,2组患者的各项主症评分和次症评分均较治疗前明显降低（P＜0.05）,且试验组的降低作用均明显优于对照组（P＜0.05）。（3）心功能指标方面：治疗后,2组患者的左心室射血分数（LVEF）和每分心输出量（CO）水平均较治疗前明显提高（P＜0.05）,且试验组的提高作用均明显优于对照组（P＜0.05）。（4）血液流变学指标方面：治疗后,2组患者的全血高切黏度、全血低切黏度、血浆黏度、红细胞聚集指数均较治疗前明显降低（P＜0.05）,且试验组的降低作用均明显优于对照组（P＜0.05）。（5）炎症指标方面：治疗后,2组患者的超敏C反应蛋白（hs-CRP）和白细胞介素6（IL-6）水平均较治疗前明显降低（P＜0.05）,且试验组的降低作用均明显优于对照组（P＜0.05）。（6）不良事件方面：经6个月随访,试验组的不良事件发生率为16.7%（5/30）,明显低于对照组的43.3%（13/30）,差异有统计学意义（P＜0.05）。【结论】 益气活血通脉颗粒治疗冠心病PCI术后气虚血瘀证患者疗效确切,可有效改善患者临床症状、心功能和血液流变学指标,降低患者的炎症水平和心血管不良事件发生率。     

42例经胸乳径路腔镜甲状腺手术的高效分析

目的：探讨经胸乳径路腔镜甲状腺手术的效果。方法将42例甲状腺结节患者分别行胸乳径路腔镜甲状腺手术（腔镜组20例）与常规甲状腺手术（常规组22例）,比较两组手术时间、术中出血量、术后引流量、术后住院时间、美容效果满意度及并发症。结果腔镜组与常规组手术时间分别为（119.2±25.7）min、（74.5±10.3）min（P0.05）;对切口满意率分别为90.0%与36.3%（P〈0.00）;两者均无甲状腺旁腺及喉返神经损伤及因术后大出血而再次手术等并发症。结论经胸乳甲状腺切除术是一种安全的手术方式,具有较好的美容效果。     

肿瘤坏死因子α通过丝裂原活化蛋白激酶激酶6诱导LA795肺腺癌细胞凋亡

目的：为了研究肿瘤坏死因子α（TNF－α）诱导肺癌细胞凋亡的分子机制，寻找肺癌基因治疗的新方法。方法：建立TNF－α诱导LA795肺腺癌细胞凋亡的细胞模型；使用人胚肾293包装细胞制备丝裂原活化蛋白激酶激酶6（mitogen-activated protein kinase kinase 6,MKK6)及其结构活性和无活性突变体的重组腺病毒；使用激酶活性测定法检测细胞内MKK6的激酶活性。结果：TNF－α刺激可明显诱导LA795肺腺癌细胞MKK6激活；用TNF－α刺激肺腺癌细胞可明显诱导细胞凋亡；MKK6结构活性突变体也可明显诱导LA795细胞凋亡；而MKK6无活性突变体可明显抑制TNF－α诱导的LA795细胞凋亡。结论：TNF－α诱导LA795肺腺癌细胞凋亡是通过MKK6发挥作用的，MKK6的重组腺病毒有希望用于肺癌的基因治疗。     

p38丝裂原激活蛋白激酶对人胚胎肾293细胞一氧化氮合酶基因转录的调控

目的探讨p38 丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)家族四种亚型对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因的转录调控。方法以人胚胎肾293(HEK 293)细胞为靶细胞,采用脂质体(LPS)介导的细胞基因共转染技术、荧光素酶报告基因技术,分别将FLAG-tagged p38 MAPK 4种亚型、含有鼠iNOS基因启动子区的荧光素酶报告基因质粒(piNOS-Luc)、空载体(pcDNA3)、β-半乳糖苷酶表达质粒(pCMV-β)共转染,检测并比较荧光素酶相对活性。结果(1)未加刺激时,在HEK 293细胞中,p38 MAPK中仅有p38α能够诱导iNOS基因启动子的转录活性;(2)在LPS刺激下,p38 MAPK 4种亚型均能够诱导iNOS启动子的转录活性,其中,p38β所诱导的转录活性最高,p38α的诱导作用亦很明显。结论(1)LPS能够在HEK 293细胞中诱导iNOS基因转录活性;(2)在HEK 293细胞中,p38 MAPK参与了静息时及LPS刺激下对iN-OS基因的转录调控。     

人IP10启动子红色荧光蛋白报告基因载体的构建及在细胞中的表达

目的:构建IP10启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,为研究细胞内IP10的基因表达调控和相关的信号转导机制提供重要工具.方法:采用基因重组技术构建含IP10启动子区的红色荧光蛋白报告基因载体pDsRed1-1-IP10;用脂质体瞬时转染HEK293 细胞,观察IP10启动子对脂多糖(LPS)刺激的反应.结果:酶切和DNA 测序证明所构建的红色荧光蛋白报告基因载体是正确的;该表达载体在HEK293细胞静息状态下表达水平很低,经LPS 刺激后,在荧光显微镜下可看到高亮度的红色荧光.结论:所构建的IP10启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体是正确的,对生理相关刺激有很好的反应,可有效地用于IP10基因表达信号调控机制的研究.