生物支架材料在骨组织工程中的研究进展

骨缺损修复尤其是大段骨缺损的修复一直是骨科临床急需解决的问题,目前组织工程用于骨缺损的修复已成为研究热点,随着组织工程的快速发展,骨修复支架材料的研究也越来越多。本文就近年来组织工程支架材料的发展分类做简要综述。     

Wnt/β-catenin信号通路介导红景天苷诱导间骨髓充质干细胞向神经细胞定向分化研究

目的探讨红景天苷诱导小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchyma stem cells,MSCs)向神经元细胞定向分化的分子机制。方法以小鼠MSCs系D1细胞为研究对象,实验分为阴性对照组(完全培养液)、阳性对照组(含1 mmol/Lβ-巯基乙醇)、红景天苷组(20 mg/L红景天苷)和阻断组(20 ng/m L DKK1);1×104个/孔细胞接种于6孔板24 h后分组,荧光免疫化学方法观察阴性对照组、阳性对照组和红景天苷组中β-链蛋白(β-catenin)的表达;RT-PCR法检测阴性对照组、阳性对照组、红景天苷组中神经元特异性烯醇化酶(neuronspecific enolase,NSE)、抗微管蛋白(beta 3 classⅢtubulin,β-tubulinⅢ)、孤儿核受体相关因子1(nuclear receptor related factor1,Nurr1)、神经胶质原纤维酸性蛋白质(glial fibrillary acidic protein,GFAP)mRNA和阻断组Wnt3a、β-catenin、低密度脂蛋白受体相关蛋白6(low-density lipoprotein receptor-related protein6,LRP6)、轴蛋白(Axin)mRNA的表达;Western blot分析阴性对照组、阳性对照组和红景天苷组中β-catenin和NSE蛋白的表达。利用胞外Ca2+螯合剂乙二醇双四乙酸[EGTA(胞外Ca2+螯合剂)]、细胞膜Ca2+通道阻断剂硝苯地平(Nifedipine细胞膜Ca2+通道阻断剂)和LY294002(IP3Ks特异抑制剂)分别阻断细胞不同Ca2+信号阻断剂,RT-PCR检测红景天苷组和阻断组中Wnt3a、LRP-6、Axin、糖原合成酶激酶3(glycogen synthase kinase,GSK-3)和β-catenin mRNA的表达;Western blot法分析β-catenin蛋白的表达。结果与阳性对照组比较,红景天苷组β-catenin为强阳性表达,Wnt3a、β-catenin、LRP6、Axin mRNA表达明显上调(P<0.01);NSE、β-tubulinⅢ、Nurr1 mRNA和NSE蛋白表达上调(P<0.01);与阳性对照组和红景天苷组比较,阻断组β-catenin、NSE、Nurr1和β-tubulinⅢmRNA表达降低,β-catenin和NSE蛋白表达下调(P<0.01)。与红景天苷组比较,尼莫地平组、EGTA、LY294002组Wnt3a、LRP-6、β-catenin和Axin mRNA及蛋白表达降低,β-catenin蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论红景天苷通过Wnt/β-catenin和Ca2+信号通路影响MSCs向神经元细胞定向分化。     

大鼠卵巢经诊断超声照射后c-fos表达的研究

目的：探讨大鼠卵巢经超声照射不同次数，时间对c-fos表达的影响。方法：将30只雌性大鼠随机分为等同数6组：正常对照组，5min,10min,20min,30min和60min组，应用EUB－26黑白超声诊断仪，对大鼠卵巢相应部位予以不同时间持续照射，7天后断头处死当即取材，用免疫组织化学ABC法检测c-fos，用原位杂交方法检测c-fosmRNA表达情况。结果：诊断超声持续照射大鼠卵巢组织10min后与对照组无差异（P＞0．05），照射20min后大鼠卵巢组织c-fos表达增加并随照射时间的延长表达明显增加，与对照组差异显著（P＜0．05），而持续照射大鼠卵巢20min时c-fosmRNA与对照组无明显差异呈弱表达（P＞0．05），而持续照射30min时表达增加（P＜0．05），60min后表达明显增加（P＜0．01）。结论：诊断超声持续照射大鼠卵巢20min后使c-fos表达增加，持续照射30min后使c-fosmRNA表达增加，从而诱导大鼠卵巢细胞凋亡。     

骨髓间充质干细胞复合鸡蛋膜构建组织工程化骨的实验研究

目的探讨鸡蛋膜作为组织工程支架材料同大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchy-cmal stem cells,BMSCs）复合培养构建组织工程化骨的可行性。方法采用梯度离心法分离大鼠骨髓间充质干细胞;将第2代BMSCs同鸡蛋膜支架材料复合,利用含0.1μmol/L地塞米松、10mmol/Lβ-甘油酸钠、50μg/ml维生素C的条件培养液诱导培养2周后,分别将复合材料植入Wistar大鼠右侧背部皮下,左侧植入无细胞复合的鸡蛋膜作为对照。28d后处死大鼠收集标本,利用扫描电镜技术、HE染色、免疫组织化学（Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶）和茜素红染色进行相应检测。结果细胞同鸡蛋膜复合培养后,细胞在鸡蛋膜上容易贴附生长,7d后鸡蛋膜表面有大量的细胞生长,14d后细胞连接成片且鸡蛋膜网状孔隙中有大量的细胞生长。复合材料植入大鼠28d后,实验组鸡蛋膜内部有大量细胞存在,植入区可见有组织形成,对照组鸡蛋膜内部无细胞,植入区未见组织形成;实验组BMSCs向成骨细胞分化并分泌矿化基质,表达Ⅰ型胶原,碱性磷酸酶,对照组均为阴性。结论鸡蛋膜具有良好的组织生物相容性,以BMSCs作为种子细胞、鸡蛋膜作为支架材料构建组织工程化骨具备一定的可行性。     

家蝇对菊酯类杀虫剂抗性的分子生物学监测

目的用分子生物学方法测定甘肃省部分地区家蝇对菊酯类杀虫剂的抗药性。方法用引物P1、P2、P3对采自甘肃省6个地区（部队营区）的家蝇的钠离子通道基因进行扩增。结果4个地区的家蝇对菊酯类杀虫剂产生了抗性，其他2个地区的家蝇对菊酯类杀虫剂仍然敏感。结论PCR可用于家蝇抗药性的快速检测。     

内镜细胞刷几种低温灭菌方法的实验研究

目的：探讨几种低温灭菌方法对内镜细胞刷的灭菌效果。方法：内镜细胞刷浸染枯草杆菌黑色变种芽孢（ATCC9372），干燥后分别经戊二醛浸泡3h、4h、5h，戊二醛熏蒸3h、5h和环氧乙烷灭菌处理．采样培养7d。结果：内镜细胞刷经戊二醛浸泡3h、4h不能完全杀灭细胞刷污染的枯草杆菌黑色变种芽孢，浸泡5h，则可完全杀灭芽孢，达到灭菌合格；经戊二醛熏蒸3h、5h，不能完全杀灭细胞刷污染的枯草杆菌黑色变种芽孢；经环氧乙烷灭菌，能完全杀灭细胞刷污染的枯草杆菌黑色变种芽孢，达到灭菌合格。结论：戊二醛浸泡5h灭菌和环氧乙烷气体灭菌可有效杀灭内镜细胞刷污染的细菌芽孢，达到灭菌效果。     

陕西省蜱的种类与自然地理分布

目的调查陕西省蜱的种类与自然地理分布。方法采用布旗法和动物体表采集法采获蜱类标本。结果陕西省有26种蜱，长角血蜱、波斯锐缘蜱、翘缘锐缘蜱在陕西省6个自然地理区划内均有分布，其他蜱的分布有一定的地理特征。结论发现陕西省蜱类新记录12种。     

平塞补片无张修补治疗腹股沟巨大疝和复发疝

目的:探讨复合平塞补片治疗腹股沟巨大疝、复发疝的疗效。方法:回顾分析2003年8月至2005年9月应用平塞复合体治疗腹股沟巨大疝和复合疝的临床资料,包括巨大斜疝14例,复发性斜疝4例;巨大直疝6例,复发性直疝6例。结果:术后除2例有轻度疼痛不适,经过热敷而消失外,其余无任何并发症,随访0.5a~1.5a,无复发。结论:复合平塞补片治疗巨大疝和复发疝安全可靠。     

用随机扩增多态DNA(RAPD)区分青海血蜱与日本血蜱

目的用随机扩增多态DNA(RAPD)技术确定青海血蜱与日本血蜱的分类地位。方法分别提取青海血蜱与日本血蜱的DNA，确定聚合酶链反应(PCR)总体积、反应条件。选取8条不同的随机排列碱基顺序的多聚核苷酸单链为引物，进行RAPD—PCR扩增反应。将扩增产物制备成DNA图谱，比较青海血蜱与日本血蜱基因组DNA多态性，从DNA水平鉴定这2种蜱。结果2种蜱仅有少部分DNA条带相同，大部分条带不同。结论RAPD技术可准确地鉴别青海血蜱与日本血蜱这2种形态特征十分相似的蜱种。     

多氯联苯对大鼠海马超微结构影响的研究

为探讨多氯联苯（polychlorinated biphenyl，PCB）对大鼠海马组织学及超微结构的影响，初步认识PCB致海马损伤的特点。将45只雄性Wistar大鼠随机分为3组，每组15只。对照组饲喂正常饲料，低剂量组喂含0．1mg／kgPCB饲料，高剂量组喂含10mg／kgPCB饲料；染毒3个月后观察大鼠海马超微结构变化。随着PCB剂量的增加大鼠海马神经元细胞损伤程度增大，表现为线粒体水肿、空化，内质网扩张，核膜界线不清。提示PCB能引起大鼠海马神经元细胞的损伤，线粒体损伤与神经元细胞的凋亡有关且损伤程度同PCB剂量相关。