葡萄糖-6-磷酸异构酶mRNA在RA患者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的探讨葡萄糖-6-磷酸异构酶（glucose-6-phosphate isomerase，GPI）mRNA在类风湿关节炎（RA）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中的表达及其与RA疾病活动性的关系。方法对30例RA活动期患者、30例RA缓解期患者、30例其他风湿性疾病患者及30名健康体检者，采用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）半定量检测PBMCs中GPImRNA的表达水平。结果RA活动期患者GPImRNA的表达水平明显高于RA缓解期患者、其他风湿性疾病患者及正常对照组（P〈0．05），在RA活动组和RA缓解组，差异亦有统计学意义（P〈0．05）。结论GPImRNA在部分RA患者中高表达，其可能在RA发病机制中起作用，并与疾病的活动性相关。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中趋化因子受体CXCR3 mRNA表达水平变化

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMC)中CXCR3mRNA表达及其与疾病发病机制、疾病活动性的关系.方法 采用逆转录实时荧光定量(FQ-RT)-PCR的方法,在Light Cycler Real time PCR检测仪上检测59例PBC患者(活动期29例、缓解期30例)、结缔组织病(CTD)患者20例(疾病对照组)、健康体检者29名(健康对照组)外周血PBMC中CXCR3 mRNA的表达水平和含量.以Act=Ct(待测基因)-Ct(内参基因)比较基因表达水平的变化.结果 活动期PBC患者CXCR3 mRNA表达水平(Act=5.41±2.69)明显高于缓解期PBC患者(Act=7.77±2.74,t=3.39,P＜0.01);活动期PBC患者CXCR3 mRNA表达水平(Act=5.41±2.69)明显高于正常对照组(Act=7.16±2.76,t=2.45,P＜0.01)和疾病对照组(Act:7.24±2.75,t=2.53,P＜0.01);缓解期PBC患者CXCR3 mRNA表达水平与正常人及疾病对照组的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PBC患者CXCR3 mRNA表达水平显著高于正常人、疾病对照组和疾病缓解期,提示CXCR3的表达与PBC的发生发展存在一定关联性.     

葡萄糖-6-磷酸异构酶在诊断类风湿关节炎中的意义

目的 探讨类风湿关节炎(BA)患者外周血单个核细胞(PBMC)中葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)mRNA及血清中GPI抗原表达与RA发病机制及活动性的关系,分析比较GPI与抗突变型瓜氨酸波形蛋白(MCV)抗体、抗环瓜氨酸多肽(CCP)抗体、类风湿因子(RE)在RA诊断中的价值.方法 用实时荧光定量逆转录(FQ-RT)-PCR检测60例RA患者(活动期28例、缓解期32例)、30例其他风湿性疾病患者、30名健康体检者PBMC中GPI mRNA的表达水平和含量[以△Ct=Ct1(待测基因)-Ct2(内参基因)来比较基因表达水平的高低];同时用ELISA检测各组血清中GPI和抗MCV抗体,抗CCP抗体和RF水平.结果 RA患者GPI mRNA表达水平[△Ct=4.21(3.04～7.23)]明显高于其他风湿性疾病组[△Ct=8.42(5.16～9.98),P<0.01]和健康对照组[△Ct=8.66(4.90～10.01),P<0.01],活动期组GPI mRNA表达水平[△Ct=3.78(1.28～6.09)]与缓解期组[△Ct=5.88(3.23～8.94)]的差异有统计学意义(H=11.760,P<0.01);RA组血清GPI水平[3.02(2.02～8.39)mg/L]明显高于其他风湿性疾病组[0.20(0.11～0.32)mg/L]和健康对照组[0.18(0.08～0.30)mg/L],且RA活动期组血清GPI水平[4.84(2.81～10.38)mg/L]与缓解期组[2.12(1.26～4.34)mg/L]差异也有统计学意义(H=9.830,P<0.01).同时检测GPI、抗MCV抗体和抗CCP抗体对RA的敏感度分别为68%(41/60)、57%(34/60)、58%(35/60);特异度分别为95%(57/60)、92%(55/60)、93%(56/60).结论 GPI mRNA可能参与了RA的发病过程,并与疾病的活动性相关,血清中GPI对RA诊断有相对较高的敏感度和特异度,可作为临床诊断RA的辅助指标.     

抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体在类风湿关节炎诊断中的意义

目的了解抗突变型瓜氨酸波形蛋白(MCV)抗体在类风湿关节炎(RA)诊断中的意义,并比较抗MCV抗体与类风湿因子(RF)、抗核周因子(APF)、抗角蛋白抗体(AKA)、抗环瓜氨酸多肽(CCP)抗体以及某些临床指标的相关性。方法对166例研究对象,包括74例RA患者(其中早期18例,中晚期56例),50例非RA的风湿性疾病患者,42名健康对照,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中的抗MCV抗体,同时检测其他相关自身抗体,结合临床资料进行分析。结果74例RA中抗MCV抗体阳性58例,对RA诊断的敏感性为78％,特异性为95％,阳性预测值和阴性预测值分别为97％和71％。抗MCV抗体阳性的平均抗体浓度依次为(552±380)U/ml(RA组),(162±63)U/ml(非RA组),(63±46)U/ml (健康对照组)。RA组的平均抗体水平较高。抗MCV抗体和抗CCP抗体相关性最强(r=0．502,P=0．000),APF、AKA次之(r=0．369、0．408,P＜0．01)。抗MCV抗体与各项临床、实验室指标间的差异无统计学意义(P＞0．05)。结论抗MCV抗体在RA中具有较高的敏感性和特异性,且较APE、AKA与抗CCP抗体相关性强,可作为RA诊断的辅助指标。抗MCV抗体可能与病情活动度、功能状态无关。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞諸Toll样受体3 mRNA表达水平的研究

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中Toll样受体3(TLR3 mRNA)表达及其与疾病活动性的关系.方法 利用实时荧光定量-反转录-聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)的方法 ,检测55例PBC患者(活动期33例、缓解期22例)、20例肝癌患者(疾病对照组)和24名健康体检者(健康对照组)PBMCs中TLR3 mRNA的表达水平.以△Ct=Ct(待测基因)-Ct(内参基因)来比较基因表达水平的高低.结果 PBC患者活动期TLR3 mRNA的表达水平高于疾病缓解期,差异有统计学意义(P<0.05);同时也高于肝癌患者和健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);缓解期TLR3 mRNA的表达水平与健康人和肝癌对照组差异无统计学意义(P>0.05).结论 PBC患者TLR3 mRNA表达异常,可能参与了PBC的发病过程并与疾病的活动性有关.     

应用蛋白指纹图谱技术筛选原发性胆汁性肝硬化患者血清特异性标志物

目的: 探讨蛋白指纹图谱技术筛选原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者血清中可用于诊断的特异性标志物.方法: 采用弱阳离子纳米磁性微球捕获血清中的蛋白,ProteinChip PBSII-C型蛋白质芯片阅读仪检测绘制成蛋白指纹图谱.所有蛋白指纹图谱采用Biomarker Wizard 3.1分析之后用Biomarker Pattems Sofiware 5.0识别最终可能用于PBC诊断的蛋白标志物并优化组合建立诊断模型.结果: 在PBC患者和对照组之间找到69个差异蛋白峰(P<0.05).其中质荷比(m/z)为3445,4260,8133和16 290的蛋白峰建立PBC诊断模型.该诊断模型能很好地把PBC患者从其他肝脏疾病患者和正常人群中区分出来,其敏感性为93.3%,特异性为95.1%.经双盲实验验证,该模型对PBC诊断的敏感性为92.9%,特异性为82.4%. 结论: 采用纳米磁性微球与蛋白质芯片阅读仪联用的蛋白指纹图谱技术可以检测PBC患者血清中的特异性蛋白标志物,并建立敏感性和特异性均较高的PBC诊断模型.     

应用尿液蛋白质组技术筛选多发性骨髓瘤相关蛋白的初步研究

目的应用蛋白质组学相关技术筛选多发性骨髓瘤（MM）患者尿液中差异表达的蛋白质,寻找与MM诊断相关的疾病标志物。方法收集MM组、疾病对照组（肾脏疾病）、健康对照组尿液各8例,TCA沉淀法提取尿液蛋白质后建立双向凝胶电泳图谱;Image Master软件筛选差异蛋白质;利用MALDI-TOF-MS获得肽质量指纹图谱,通过Mas-cot软件进行数据库搜索,得到蛋白质鉴定结果。结果筛选出57个差异蛋白点,43个在MM组上调,14个下调。对其中30个差异蛋白点进行分析,鉴定出甘露聚糖结合凝集素相关蛋白19（Map19）、人组织相容性抗原A2（Hla-A2）、视黄醇结合蛋白（RBP）、转甲状腺素蛋白（TTR）、免疫球蛋白轻链、α2-糖蛋白1（ZAG1）等9类差异表达的蛋白质。结论应用尿液蛋白质组技术成功筛选鉴定出MM尿液中存在的差异蛋白质,可能是MM疾病诊断相关标志物,尚需要进一步验证。     

用2-DE和MALDI-TOF-MS筛选多发性骨髓瘤患者骨髓上清液中标志物

目的 运用2-DE和MALDI-TOF-MS研究MM患者骨髓上清液中差异表达蛋白,以寻找对MM发病机制研究和诊断或鉴别诊断的特异性蛋白质标志物.方法 收集14例MM患者、5例其他血液系统恶性肿瘤患者及5名健康对照者骨髓上清液标本.除去标本中白蛋白和免疫球蛋白G(IgG)后,用2-DE分离3组骨髓上清液标本.用ImageMaster 2D platinum 5.0图像分析软件分析比较3组2-DE凝胶图像,以差异倍数在3倍以上的蛋白点作为候选差异表达蛋白.然后,用MALDI-TOF-MS对重复性较好的候选差异表达蛋白做PMF和二级质谱鉴定.将得到的肽片段质量进行NCBInr 数据库检索,以鉴定出相应的差异表达蛋白.结果 用图像分析软件对3组骨髓上清液2-DE凝胶进行分析比较,从MM组与健康对照组中筛选出47个差异蛋白点,从MM组与疾病对照组中筛选出58个差异蛋白点.从MM组选取41个差异点进行质谱分析并鉴定,发现MM组与其他2组相比,5种高表达蛋白为免疫球蛋白J链、κ轻链、λ轻链、前病毒遗传的Gag多聚蛋白和与半抗原结合的含成熟氧(末)端的催化抗体;3种低表达蛋白为血红蛋白、结合珠蛋白(Hp2)、锌-α2-糖蛋白.这些差异蛋白部分与MM的临床表现相关,部分与MM的发生发展及临床治疗相关.结论 应用2-DE和MALDI-TOF-MS技术从MM患者骨髓上清液标本中筛出与MM疾病相关的8种差异表达蛋白,为进一步研究MM发生发展机制,完善MM诊断、鉴别诊断指标提供了参考依据.     

血清中葡萄糖6-磷酸异构酶在类风湿关节炎中的诊断意义

目的 探讨血清中葡萄糖6-磷酸异构酶（glucose-6-phosphate isomerase,GPI）抗原升高在类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者诊断中的意义.方法 用酶联免疫吸附试验（ELIAA）检测128例RA患者,86例其他风湿病患者和42例健康对照血清中GPI抗原的浓度,RA患者同时还检测了类风湿因子（RF）,关节疼痛及肿胀数,血沉（ESR）,以及X线分级等.结果 128例RA患者血清中GPI浓度为（2.52±2.37）μg/ml,86例其他风湿性疾病组为（0.083±0.056）μg/ml,42例健康对照组为（0.081±0.050）μg/ml,RA患者血清中GPI浓度显著高于其他风湿病组和健康对照组（P＜0.05）,在RA活动组和RA非活动组,亦有显著差异（P＜0.05）.通过分段回归分析发现GPI的浓度和RA病情活动成正相关.GPI抗原对RA检测的敏感性为43.5%,特异性为98.3%.结论 GPI在部分RA患者血清中显著升高,有可能成为诊断RA及判断其疾病活动性的一个新指标.     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体mRNA表达水平的研究

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中肿瘤坏死因子受体(GITR)mRNA表达及其与疾病发病机制、疾病活动性的关系.方法 采用反转录实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)的方法 ,在Light Cycler Real time PCR检测仪上检测78例PBC患者(活动期44例、缓解期34例)、肝癌患者30例(疾病对照组)、健康体检者30名(健康对照组)PBMCs中GITR mRNA的表达水平和含量.以△Ct=Ct(待测基因)-Ct(内参基因)来比较基因表达水平的高低.结果 活动期PBC患者GITR mRNA表达水平(△Ct=10.5±2.8)明显低于缓解期PBC患者(△Ct=7.2±2.3,P<0.01);活动期PBC患者GITR mRNA表达水平(△Ct=10.5±2.8)明显低于健康对照组(△Ct=7.4±1.1)与肝癌组(△Ct=5.9±1.3,P<0.01);缓解期PBC患者GITR mRNA表达水平与健康对照组差异无统计学意义(P>0.05);肝癌患者GITRmRNA表达水平明显高于健康对照组及PBC患者(P<0.01).结论 GITR的表达与PBC的发生发展存在定关联性,可能参与了PBC的发病过程并与疾病的活动性有关.