用头孢西丁三相试验检测大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的质粒AmpC酶

目的：检测质粒介导的持续高产AmpC酶在大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌中的携带率，为临床治疗提供指导。方法：采用头孢西丁纸片药敏试验（K-B法）作AmpC酶的初筛试验，头孢西丁三相试验间接法作AmpC酶的确证试验。结果：在检测的86株菌中，有9株菌K-B法初筛结果为阳性。在这9株菌中经头孢西丁三相试验确证有5株产AmpC酶，阳性率为5.8%。其中大肠埃希菌3株，肺炎克雷伯菌2株。结论：头孢西丁K-B法筛选试验结合头孢西丁三相试验可准确检出质粒介导的AmpC酶，可用于临床常规检测。     

重组逆转录病毒双表达载体的构建及其对K562细胞增殖活性的影响

目的 构建针对慢性粒细胞白血病bcr-abl b3a2型mRNA的双表达逆转录病毒载体,初步探讨其对K562细胞表型的影响.方法 以逆转录病毒载体pMSCV-neo为骨架,构建eGFP及针对bcr-abl b3a2型mRNA的反义RNA双表达载体pMSCV/GFP-H1-BCR/ABL40AS,同时构建对照载体pMSCV/GFP-H1-BCR/ABL40S和pMSCV/GFP-H1-BCR/ABL80AS,酶切及测序鉴定各重组载体;以脂质体法转染各载体到PT67包装细胞后,G418筛选稳定的病毒产生细胞株,再以NIH3T3细胞测定病毒滴度并感染K562细胞,计数细胞数绘制细胞生长曲线,FCM检测细胞凋亡情况、并用Western blot检测PKR激活情况.结果 酶切及测序结果证实各重组载体构建完全正确;G418筛选到高滴度重组逆转录病毒生产细胞株:PT67-MSCV/GFP、PT67-40as、PT67-40s和PT67-80as,且PT67-40as上清感染组K562细胞生长受抑制,其24 h时早期细胞凋亡率为22.54±3.19%,与除PT67-80as组外的其余各组相比有显著差异(P＜0.05);PT67-40as和PT67-80as处理组细胞PKR磷酸化水平分别增高了59.20%和60.33%,2AP能抑制PT67-40as的作用.结论 成功构建重组逆转录病毒双表达载体,并发现其能抑制K562细胞生长并引起细胞凋亡,通过激活PKR抗肿瘤可望成为肿瘤新的靶向治疗策略.     

重庆地区4414例泌尿生殖道支原体检测及药敏分析

目的 研究解脲支原体(Uu)和人型支原体(Mh)在非淋球菌性尿道炎(NGU)疑似感染者中的感染率和药敏情况.方法 使用安图生物支原体培养鉴定计数药敏试剂盒检测4 414份疑似泌尿生殖道感染者临床标本.结果 4 414份标本中,检出支原体阳性感染者2 295例,阳性率51.99％,其中Uu和Mh的单一感染阳性率分别为40.69％和2.08％,两者共同感染阳性率9.22％.交沙霉素(JOS)、多西环素(DOX)、克拉霉素(CLA)、加替沙星(GAT)和红霉素(ERY)敏感率分别为96.03％、95.51％、78.69％、77.21％和72.55％.罗红霉素(RXT)、甲砜霉素(THI)、克林霉素(CLI)和克拉霉素(CLA)的耐药率分别为16.91％、22.27％、41.96％和17.60％.结论 Uu是NGU感染中的主要病原体,临床推荐使用DOX、JOS、GAT和ERY作为一线药物,而不适宜使用耐药率高的RXT、THI、CLI和CLA.     

真核细胞起始因子4E与基质金属蛋白酶7在胃癌中表达及侵袭转移作用

目的通过检测真核细胞起始因子4E(eIF4E)、基质金属蛋白酶7(MMP-7)在胃癌中的表达,探讨其在胃癌侵袭和转移过程中的作用。方法选择重庆市中医院和重庆市第五人民医院的58例胃癌手术标本设为观察组,另选取通过胃镜取材的正常胃黏膜组织25例设为常规组。应用免疫组化SP法检测eIF4E、MMP-7蛋白的表达,并分析其在肿瘤侵袭转移中作用。结果 elF4E、MMP-7蛋白阳性表达率高于常规组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组中淋巴结转移患者的eIF4E、MMP-7阳性表达率均高于淋巴结未转移患者,差异有统计学意义(P<0.05)。elF4E、MMP-7的阳性表达率与肿瘤的浸润深度、肿瘤分化程度及临床分期呈正相关(P<0.05)。结论 eIF4E、MMP-7蛋白在胃癌组织的表达与胃癌的侵袭转移能力有关,可作为胃癌侵袭转移的生物学标志之一,有助于判断胃癌恶性程度、评估侵袭能力,为胃癌预后的判断和进一步治疗提供依据。     

4种检测血清抗环瓜氨酸肽抗体的方法学比较

目的 评估4种抗环瓜氨酸肽(抗CCP)抗体检测方法,并筛选出符合临床要求的检测方法。方法 分别用酶联免疫法、免疫胶体金法、免疫透色比浊法和化学发光法检测该院有关节炎症状的100例患者血清抗CCP抗体。以国家卫生健康委临床检验中心室间质评采用的定性方法(酶联免疫法)作为参比方法,分别比较其他3种方法与其检测结果的符合率。根据WS/T505-2017指南对符合率较高的方法进行精密度和准确度评价。结果 免疫胶体金法、免疫透色比浊法和化学发光法与酶联免疫法的阳性符合率分别为：100.0%[95%CI(83.9%,100.0%)]、90.0%[95%CI(69.9%,97.2%)]和100.0%[95%CI(83.9%,100.0%)];阴性符合率分别为：62.5%[95%CI(51.6%,72.3%)、82.5%[95%CI(72.7%,89.3%)]和98.8%[95%CI(93.1%,99.8%)];总体符合率分别为：70.0%[95%CI(60.4%,78.1%)]、84.0%[95%CI(75.6%,89.9%)]和99.0%[95%CI(94.4%,99.8%)];κ值分别为：0.4...     

eIF4E、CD44和E－cadherin在胃癌组织中的表达

目的：通过检测eIF4E、CD44和E－cadherin蛋白在胃癌组织中的表达,探讨其与胃癌临床病理的关系,以及它们在肿瘤转移和侵袭过程中的作用。方法取胃癌组织58例和正常胃黏膜25例,应用免疫组化SP法检测eIF4E、CD44、E－cadherin蛋白的表达。结果与正常胃组织相比,eIF4E、CD44蛋白在胃癌组织中均呈现高表达（P＜0.05）,E－cadherin在胃癌组织呈低表达。 eIF4E、E－cadherin、CD44的阳性表达率与患者的年龄、性别均无明显相关性（P＞0.05）,而与肿瘤的浸润深度、淋巴转移及临床分期有关（P＜0.05）。 eIF4E、CD44的阳性表达率与肿瘤分化程度有关（ P＜0.05）。 eIF4E与CD44表达呈正相关（ P＜0.05）。 eIF4E与E－cadherin的表达呈负相关（P＜0.05）。结论检测eIF4E、CD44、E－cadherin有助于对胃癌恶性程度的判定及侵袭转移能力的评估,进而为胃癌的预后分析和进一步治疗提供依据。     

应用NCCLS EP10-A2文件对五种半胱氨酸蛋白酶抑制剂C试剂进行初步评价

目的 对五个厂家的半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(胱抑素C)试剂检测性能进行初步评价.方法 按照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP10-A2文件,使用五种试剂分别对胱抑素C低值、中值、高值标本进行检测,计算偏倚、总不精密度及其截距、斜率、携带污染、非线性、漂移性,并判断其临床可接受性.结果 五个厂家的试剂总不精密度均在允许的范围内,截距、非线性、漂移性的差异无统计学意义;利德曼试剂测定值偏倚大于允许偏倚,其余四个厂家试剂偏倚在允许范围内;科华、景源、迈克、美康的试剂存在携带污染.结论 科华、景源、迈克、美康胱抑素C试剂合准确度和精密度良好,试剂稳定,性能指标基本符合临床要求,但携带污染还有待理一步改进.     

基因治疗的病毒载体研究进展

基因治疗成功的关键是选择合适的载体系统，由于病毒载体的转染效率高、靶向性好等特点，病毒载体系统就显得格外引人注目。现重点介绍逆转录病毒、慢病毒、腺病毒、腺相关病毒、单纯疱疹病毒的基因组特点、优缺点，以及目前对其进行的优化改造。