肇庆市城区居民主要腹泻病原菌现状分析

目的了解肇庆市城区居民的主要腹泻病原菌,为建立食源性疾病主动监测体系,提供必要的监测数据。方法采集监测点腹泻门诊腹泻患者粪便(或肛拭)标本,分离沙门氏菌、志贺氏菌、霍乱、肠出血性大肠杆菌EHECO157:H7和副溶血性弧菌。结果314份标本共分离各类病原菌51株(16.24%),其中,以副溶血性弧菌检出率为最高,占总检出率的49.02%,沙门氏菌、志贺氏菌的检出率分别为25.49%和15.69%,霍乱、肠出血性大肠杆菌EHECO157:H7未检出;女性患者病原菌检出率显著高于男性患者(P<0.01);50.98%的患者年龄集中在21～40岁(P<0.001);检出的25株副溶血性弧菌分属其6个血清型,其中O3和O4血清型最为多见,分别占64.00%和20.00%。结论肇庆市城区居民主要腹泻病原菌为副溶血性弧菌O3血清型,患者主要为中青年。     

诺如病毒遗传组I型TaqMan—MGB探针实时荧光RT-PCR的研究

目的建立诺如病毒遗传组I型TaqMan-MGB探针实时荧光RT-PCR快速、特异、灵敏的检测方法，为疾病预防控制提供可靠的依据。方法根据GenBank诺如病毒遗传组I型代表株保守序列设计特异引物对和TaqMan-MGB探针，建立一步法实时荧光RT-PCR快速检测反应体系，优化反应条件，评价反应体系的灵敏度、特异性、重复性．并与常规RT—PCR比较。结果诺如病毒遗传组I型TaqMan-MGB探针实时荧光RT-PCR检测时限短。仅1h就出结果。与轮状病毒、腺病毒、星状病毒、甲肝病毒、诺如病毒遗传组Ⅱ型无交叉反应，最低检出下限为100拷贝／反应，比常规RT—PCR灵敏100倍，5份浓度不同的诺如病毒遗传组I型标本重复检测5次。平均Ct值变异系数范围为0．39％-1．02％。结论诺如病毒遗传组I型TaqMan-MGB探针实时荧光RT—PCR快速、特异、灵敏、重复性好，可应用于突发公共卫生应急检测和诺如病毒遗传组I型监测，提高快速检测能力。     

水产品中霍乱弧菌的分离鉴定及生物分型报告

目的 了解肇庆市售水产品中霍乱弧菌的污染状况及霍乱弧菌分离株的噬菌体-生物分型情况,研究其分子遗传学特征及流行病学意义.方法 2004年7月,采集肇庆市各水产品交易市场的海、水产品及其养殖水,按国标方法进行霍乱孤菌分离鉴定,采用噬菌体-生物分型区分检出菌是否为流行株.结果 从87份样品中共检出9株霍乱弧菌,检出率为10.35%.其中分离自青蛙5株、牛蛙3株、养殖水1株.分离的菌株均为01群埃尔托霍乱弧菌,噬菌体-生物分型结果其中均为9 L,分离自青蛙和牛蛙的8株霍乱弧菌的血清型为稻叶型,分离自养殖水的1株霍乱弧菌为小川型.结论 本次在水产品及其养殖水中检出霍乱弧菌,虽然检出的霍乱弧菌均为非流行株,但仍需加强监测,预防霍乱的散发和暴发流行.     

2014-2016年广东省肇庆市人感染H7N9禽流感病毒基因组特征分析

目的 了解广东省肇庆市2014-2016年人感染H7N9禽流感病毒基因进化特征.方法 对肇庆市17例H7N9患者咽拭核酸直接进行8节段基因序列扩增与测定,用BioEdit5.0、MEGA6.0进行同源性和重要氨基酸位点分析,采用Neighbor-Joining法构建进化树,参比序列从GenBank下载.结果 7份H7N9病例标本获得8节段全基因序列,HA与A/chicken/Dongguan/695/2014 (H7N9)相似度最高,NA与A/ chicken/Dongguan/1075/2014 (H7N9)相似度最高;内部基因与2013-2014年广东东莞、深圳禽源H7N9及H9N2相似度较高.HA和NA基因与广东省东莞、广州、深圳等地市的H7N9序列同处于珠三角进化分支,与安徽、浙江、江苏等长三角分支的序列相似性低.HA蛋白受体结合位点发生G186V、Q226L变异,裂解位点序列均为PEIPKGR↓ GLF,含有2个碱性氨基酸;M2蛋白上发现耐药位点S31N,PB2蛋白上发现E627K突变,NA蛋白上未发现耐神经氨酸酶的位点变异.结论 肇庆市人感染H7N9病毒株可能来源于2013 2014年广东省珠三角地区禽源H7N9和H9N2,G186V、Q226L和E627K位点变异增强了对人的易感性.     

香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR的建立与应用

目的建立快速、灵敏、特异的香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR体系,用于食源性致病菌监测和淡水鱼产品贸易往来的快速检测。方法根据GenBank公布的香港海鸥形菌16SrRNA基因高保守序列,设计特异引物对和TaqMan-MGB探针,建立和优化快速检测体系,评价反应体系的特异性、灵敏度、重复性,并在淡水鱼类、急性胃肠炎腹泻患者标本中临床应用,结合细菌分离方法和序列测定分析进行验证。结果建立的香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR反应体系检测时限短,仅40min就可出结果,特异性好,与沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血弧菌等非目标菌无交叉反应,灵敏度高,检测下限达10拷贝／反应,稳定性好,同一浓度阳性质粒进行16次重复检测的Ct值变异系数0．183％。92份淡水鱼及211份医院急性胃肠炎腹泻标本实时荧光PCR与常规细菌分离结果完全一致,均检出了12株香港海鸥形菌。16SrRNA测序结果显示与HKU1株同源性在99．5％以上,进一步验证了实时荧光PCR的特异性。结论本研究建立的香港海鸥形菌TaqMan—MGB探针实时荧光PCR反应体系快速、特异、灵敏,在防止食源性疾病的传播和加快贸易通关速度方面,具有较强的的应用价值。     

广东省肇庆市肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药性与MLST分型研究

目的 了解广东省肇庆市肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae, KP)临床分离株的抗生素耐药情况及多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)特征。方法 收集肇庆市两家医院KP临床分离株63株，采用肉汤微量稀释法进行30种抗生素的体外药物敏感性试验，并对所有菌株进行多位点序列分型。结果 63株KP临床分离株的耐药谱特点可分为4类，即全敏感的高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulent K. pneumoniae, hvKP)、产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌(extended spectrum β-lactamases K. pneumoniae, ESBLsKP)、耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant K. pneumoniae, CRKP)和其他类型的多重耐药肺炎克雷伯菌(multidrug-resistant K. neumoniae，MDRKP)；MLST分型结果显示63株临床分离株可分成41个ST型。其中，ESBLsKP以ST37型(9株，39.13%)为主，CRKP以ST11型(5株，62.50%)为主，hvKP以ST65(5株，25.00%)型和ST23(3株，15.00%)型为主，而其他类型的多重耐药KP的ST型(12株9种ST型)则呈现明显的多态性。结论 我市肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药情况比较严重，要加强院内感染监测，警惕其成为优势菌型并引发院内感染的风险。     

筛选与确诊试验在检测香港海鸥菌中的建立与应用

目的建立简便、快速、准确、特异的香港海鸥菌实验室诊断技术。方法采集淡水鱼类、胃肠炎腹泻患者新鲜粪样,接种于改良头孢哌酮MacConkey（CMA）培养基,对典型菌落分别进行氧化酶、触酶、三糖铁（TSI）3项筛选试验和常规生化鉴定,凡氧化酶、触酶试验阳性以及三糖铁（TSI）试验阴性的菌株,采用特异性PCR检测确诊;通用引物扩增16SrRNA并与香港海鸥菌HKU1株进行同源性分析。结果在92份淡水鱼样品和211份胃肠炎腹泻患者粪样中,共检出香港海鸥菌11株和1株,阳性率分别为11.96%（11/92）和0.48%（1/211）。筛选与确诊试验和常规生化试验的检测结果一致,符合率为100%（12/12）。分离的香港海鸥菌16SrRNA序列与HKU1株同源性在99.5%～100%之间,仅差1～2个碱基。结论本文建立的筛选与确诊试验适用于香港海鸥菌的诊断。     

1例重症尿毒症病人的护理

尿毒症是一种较严重的晚期慢性肾脏疾病,对病人生活有很大影响,不能治愈.2004年我科收治了1例重症尿毒症合并多种疾病的患者,经治疗和护理,取得了较好效果,现将护理体会报告如下.     

增菌液增菌过程pH值变化与水产品中霍乱弧菌检出关系研究

目的：了解增菌液增菌过程pH值变化与水产品中霍乱弧菌检出的关系。方法：向10份水产品中加入一定量的Eltor小川血清型霍乱弧菌，并按国标方法检测水产品增菌前后霍乱弧菌的菌落数，以观察增菌过程中增菌液pH值变化对霍乱弧菌检出的影响。结果：水产品检测时，增菌液pH值有较大降低（9．2～5．7），部分已超过霍乱弧菌可繁殖的pH值范围（6．0—9．2）。经37℃、8h增菌后，增菌液有明显的增菌效果。结论：增菌液的pH值变化并未影响水产品中霍乱弧菌的检出。