C3d及荷C3d免疫复合物的测定与意义

用抗人Ｃ３和抗人ＩｇＧγ球蛋白组分作固相反应物，建立了检测补体活化片段Ｃ３ｄ及荷Ｃ３ｄ－ＩＣ的ＥＬＩＳＡ法，并对临床各类疾病患者血清Ｃ３ｄ和Ｃ３ｄ－ＩＣ的水平进行了测定，结果表明：慢性肾炎，ＳＬＥ，慢性乙肝及肺炎患者血清Ｃ３ｄ总体水平均较对照组显著增高，分别有５８．５％～７２．２％的病人Ｃ３ｄ含量高于正常上限（Ｐ〈０．０１），且该类病人亦有较高的Ｃ３ｄ－ＩＣ阳性检出率（肺炎患者例外）本项研究中，Ｃ     

端粒重复序列扩增-银染色法用于端粒酶活性测定的研究

目的建立端粒重复序列扩增（TRAP）- 银染色技术,探讨端粒酶活性检测在肿瘤诊断中的意义。方法用裂解液提取组织细胞中的端粒酶模板,在特异引物作用下进行PCR 扩增,所得产物用氯仿∶异戊醇（24∶1）处理浓缩,作聚丙稀酰胺凝胶垂直板电泳,经硝酸银染色分析端粒酶活性。结果TRAP-银染色法能准确特异地检测小鼠骨髓瘤细胞（SP 2/0）的端粒酶活性,灵敏度可达 1×10     

45例SLE患者抗CyP与ENA多肽抗体谱测定结果分析

0　引　　言系统性红斑狼疮 ( SLE)是一种全身性的自身免疫病 ,其血清学异常常表现为产生一系列特异的自身抗体 ,如抗 Sm、抗 ds- DNA、抗 U1- RNP等 ,其中可提取的核抗原 ( ENA)多肽抗体谱的出现在 SLE的发病机制中具有重要作用。近年来 ,国外有学者发现 SLE患者存在有较高水平的亲环素 ( Cy P)自身抗体 ,并与疾病的活动性密切相关 [1]。为探讨 Cy P自身抗体与 ENA多肽抗体间的关系 ,作者以 SLE患者为研究对象 ,对二者进行了测定和比较 ,现报告如下。1　材料与方法1 .1　主要试剂　重组人 Cy PA( rh Cy PA)抗原、辣根过氧化…     

亲环素及其自身抗体与SLE活动性的相关性探讨

目的：探讨血浆与淋巴细胞内亲环素（ＣｙＰ）水平及抗亲环素自身抗体与全身性红斑狼疮（ＳＬＥ）活动性的关系。方法：用重组人亲环素（ｒｈＣｙＰ）制备单克隆和多克隆抗体,建立双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法,测定血浆和细胞内ＣｙＰ水平,用ｒｈＣｙＰ包被反应板微孔,建立间接ＥＬＩＳＡ法检测抗ＣｙＰ自身抗体,对活动性和非活动性ＳＬＥ患者进行了观察。结果：ＳＬＥ患者含量分别为（３２３±４２０）μｇ／Ｌ和（２６４０±６５０）μｇ／ｇ蛋白,均显著高于正常对照组的（１６５±８０）μｇ／Ｌ和（２２９０±３８０）μｇ／ｇ蛋白;其中活动性ＳＬＥ患者又显著高于非活动性ＳＬＥ（Ｐ＜０．０５）。ＳＬＥ抗ＣｙＰ自身抗体阳性率（４８％）显著高于正常人（２．５％）,抗ＣｙＰ阳性与皮肤粘膜损害、关节痛、发热、白细胞减少、抗Ｓｍ抗体阳性密切相关。结论：血浆和淋巴细胞内ＣｙＰ升高和抗ＣｙＰ自身抗体阳性可反映ＳＬＥ活动性。     

固相功能化免疫分子层的制备与形貌表征

抗原与抗体的特异结合 ,主要是基于抗原和抗体分子结构及立体构型的互补 ,以及由多种因素造成二者分子间引力参与下发生的可逆性免疫反应。现行的固相免疫测定中 ,都是依据上述原理而设计 ,其与传统的“液相”血清学试验本质区别是有一个预先将抗原或抗体固相到载体表面的步骤 ,抗原 抗体结合反应由液态环境转移到了固相载体表面进行。因此 ,首先将特定的抗原或抗体吸附于固相上 ,是进行此类分析的前提 ,且后续测定结果的好坏 ,与免疫分子固相化状况密切相关。近年来 ,一些研究者为改善固相免疫分析结果 ,对各种抗原或抗体的固相化进行了较…     

质谱技术对类风湿关节炎患者滑膜免疫复合物差异蛋白质的分析

目的利用质谱技术对类风湿关节炎(RA)患者关节滑膜中的免疫复合物进行全面的抗原谱分析。方法选取本院3例RA患者和3例骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者的关节滑膜,通过蛋白质提取、免疫沉淀、胶内酶解和液相色谱串联质谱系统,对滑膜免疫复合物进行抗原谱分析。用FOT值(fraction of total)评价蛋白质的丰度,通过FOT值的比较筛选出上调蛋白和下调蛋白。用David和String软件对差异蛋白质进行功能富集、相互作用网络和信号通路分析。结果在RA和OA患者的关节滑膜组织免疫复合物中分别鉴定出511和526种蛋白质。通过维恩图比较,仅在RA组出现的蛋白质有170种。RA组有45种蛋白质发生上调,85种蛋白质发生下调。结论热休克蛋白HSP90AA1、HSP70、人类白细胞抗原(HLA)-G、硫氧还蛋白、膜联蛋白A2和玻连蛋白可能通过不同的机制参与RA的发病过程,具有RA新的生物标志物的潜在应用价值。     

婴幼儿感染金黄色葡萄球菌耐药性与耐药基因研究

目的 调查婴幼儿感染标本分离的金黄色葡萄球菌耐药性与耐药基因携带状况。方法 收集南京市儿童医院2013年10-12月婴幼儿感染标本分离出的金黄色葡萄球菌20株,首先采用K-B法和E-test法做抗菌药物敏感性试验,再用聚合酶链反应(PCR)的方法分析β-内酰胺类药物耐药基因(blaZ、mecA)及大环内酯类药物耐药基因(ermA、ermB、ermC、mphC、msrA)。结果 20株金黄色葡萄球菌对头孢西丁、青霉素、红霉素、克林霉素的耐药率,分别为50.0%、100.0%、40.0%、40.0%;耐药基因共检出mecA基因11株占55.0%、ermB基因1株占5.0%、ermC基因7株占35.0%;该组菌中17号株对头孢西丁敏感,检出mecA基因,其他菌株头孢西丁药敏结果耐药株均能检出mecA基因,头孢西丁敏感株均未检出mecA基因。结论 mecA、ermB、ermC基因是该组菌对β-内酰胺类和大环内酯类药物耐药的重要原因,对婴幼儿感染标本分离的金黄色葡萄球菌进行β-内酰胺类药物耐药基因(blaZ、mecA)及大环内酯类药物耐药基因(ermA、ermB、ermC、mphC、msrA)检测研究尚为国内首次。     

类风湿关节炎免疫学发病机制研究的最新进展

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以对称性多关节炎为特征的慢性、进行性、侵袭性风湿免疫病。RA不仅自身免疫系统功能紊乱,也涉及心、肺、肾、神经和血管等多个系统,不同程度地影响着患者的健康和生活质量。该文探讨了RA免疫学发病机制研究的最新进展,以加深人们对疾病的认识,为RA的基础研究和临床治疗提供讨论的依据与新的方向。     

琼脂糖凝胶基片用于蛋白质与抗原分子的固定研究与表征

目的 探索一种新型的适用于生物分子偶联的固相载体，并对其用于蛋白质与抗原分子微阵列制作的实验条件和检测结果进行评价。方法 于氨基硅烷化的载玻片表面制作琼脂糖凝胶膜，经NaIO4氧化和戊二醛分子偶联后，得到3种不同的凝胶表面，分别考察其固定生物分子的偶联效率、检测敏感度和稳定性能，并用原子力显微术和X射线光电子能谱对其表面进行表征和对比研究。结果 未经氧化的琼脂糖凝胶基片固定生物分子的能力和检测敏感度低于经NaIO4氧化与后续醛化处理的基片，其中又以后者的应用效果最佳，温度因素（实验温度分别为37℃、25℃和4℃）对用此法制作的蛋白质与抗原分子微阵列的使用无显著影响。表征结果提供了琼脂糖凝胶表面固定生物分子的直接证据和内在机制。结论 经修饰处理的琼脂糖凝胶基片可有效固定不同的生物分子，用其作为固相表面制作的蛋白质与抗原分子微阵列可取得较为理想的实验效果。     

双向电泳和质谱技术在类风湿关节炎滑膜细胞差异蛋白分析中的应用及意义

目的 采用2-DE和质谱技术分析RA患者和创伤件关节炎患者关节滑膜组织中FLS蛋白质组学的变化,寻找RA关节滑膜特异性自身抗原.方法 采用2-DE分离6例创伤性关节炎患者及3例RA患者关节滑膜组织中FLS总蛋白质,凝胶经银染显色和图像数据分析识别差异蛋白质点,并用MALDI-TOF-MS对筛选出的差异蛋白质点进行鉴定.结果 RA患者与创伤性关节炎患者中的FLS蛋白质通过2-DE检测,分别检出1 633、1 603个蛋白质点;对2组相互匹配的蛋白质点进行差异分析后,其中蛋白质差异量大于3倍的差异点共有92个,从中选取在RA患者FLS中表达上调的33个差异蛋白质点进行MALDI-TOF-MS 鉴定分析,并与IPI和Swiss-Prot数据库进行比对,共鉴定出包括肿瘤型丙酮酸激酶、α-烯醇化酶、二硫键异构酶A3 前体、谷胱甘肽转移酶、泛素结合酶E2K、血小板活化因子乙酰水解酶、二氢嘧啶酶样2、腺苷酸酶、转醛醇酶、乙酰基辅酶A异构酶、26S蛋白调节亚单位S6a、膜联蛋白A11、过氧化物还原酶1、人色氨酰tRNA合成酶、核纤层蛋白、肌间蛋白、核基质蛋白、肌动蛋白、T-复合物多肽1、葡萄糖调节蛋白75、αB-晶体蛋白、葡萄糖调节蛋白78、未知蛋白:如PSMFA和SELENBP1等30个与RA发病有关的蛋白.结论 RA患者与创伤性关节炎患者FLS间存在差异表达的蛋白质,这些差异蛋白有可能是构成RA关节滑膜的相关自身抗原,并可能在诱导RA自身免疫反应中发挥一定作用.