HbA1c在妊娠糖尿病诊断中的价值分析

目的检测孕24~28周产前检查妇女糖化血红蛋白(HbA1c),同时口服75g无水葡萄糖耐量试验(OGTT)结果,分析应用国际妊娠合并糖尿病研究组织(IADPSG)推荐的妊娠糖尿病(GDM)诊断标准,评价HbA1c在GDM诊断中的价值。方法 2013年1月至2013年12月期间就诊于南京市中西医结合医院孕24~28周产前检查妇女1 024例,口服75g无水葡萄糖OGTT试验,分别进行空腹、口服葡萄糖后1、2h静脉采血。结果以IADPSG推荐的GDM诊断标准,GDM诊断率为10.3%,此时对应的HbA1c值是5.5%,漏检率为20.4%。以一般人群糖尿病HbA1c>6.1%作标准,GDM诊断率是4.3%。结论应用IADPSG诊断标准,GDM诊断率明显高于以HbA1c>6.1%作标准的GDM诊断率。HbA1c不宜用于预测GDM阴性,但HbA1c≥5.8%可作为诊断GDM的参考。     

抗人树突状细胞单克隆抗体可变区基因克隆和序列分析

目的:为了将抗树突状细胞(dendritic cells,DC)抗体应用于临床疾病治疗,计划克隆获得抗人DC单克隆抗体(McAb)的可变区序列,在此基础上进一步获得人源化的抗人DC抗体.方法:运用RT-PCR技术,从分泌抗人DC McAb的杂交瘤细胞株(H1E11)中,克隆出VH和VL基因片段,并对VH和VL进行了测序分析.所测得的重链和轻链在基因库中与相关的Ig的VH和VL基因序列进行经Blast同源性比较.结果:通过碱基和蛋白序列的比较确认为小鼠IgG的VH和VL基因.运用Dnasis软件对VH和VL基因进行阅读框分析和模拟翻译,并参照Kabat等人(1991)编写的Ig蛋白质编码序列图谱,根据其FRs和CDRs的序列特征进行Ig的家族分析,发现VH共有414 bp,编码138个氨基酸序列,属于小鼠IgG重链Ⅲ(A)家族;VL由396 bp编码,产生132氨基酸,属于轻链κV家族.结论:成功克隆抗人DC McAb重链和轻链的可变区.     

幽门螺杆菌对左氧氟沙星、克拉霉素耐药性及基因突变分析

目的 分析幽门螺杆菌(Hp)对左氧氟沙星、克拉霉素的耐药表型及与耐药相关基因突变(基因型)的相关性,为临床制定Hp个体化根除治疗方案提供实验依据。方法 分别选择2021年6月至12月和2018年8月至2019年3月在南京医科大学附属南京医院就诊的未经治疗的292例和350例Hp阳性患者的胃黏膜组织进行分离培养,用E-test药敏试验法检测左氧氟沙星、克拉霉素的耐药性,用卡方检验分析不同性别、年龄患者耐药表型的差异;用基因测序方法检测耐药相关基因型,并分析与耐药表型的一致性。结果 在左氧氟沙星耐药性研究的292例病例中,有120例(41.10%)表型耐药,不同性别(P=0.031)、年龄(P<0.01)患者间耐药率差异均有统计学意义;耐药相关基因型中有123例(42.12%)突变,与表型的一致性很高(Kappa=0.951,P<0.01),且主要耐药基因gyrA的第87位突变与表型的一致性略高于第91位突变。在克拉霉素耐药性研究的350例病例中,有168例(48.00%)表型耐药,不同性别(P=0.165)、年龄(P=0.192)患者间耐药率差异均无统计学意义;耐药相关基因型...     

原核表达的含PTD—eGFP不同分子质量融合蛋白穿膜能力的比较

目的: 评价HIV-1 TAT蛋白转导结构域(PTD)携带的不同分子质量融合蛋白的穿细胞膜能力.方法: 诱导表达、纯化含PTD-eGFP的不同分子质量的融合蛋白,与细胞共育后,通过流式细胞术、激光共聚焦评价融合蛋白穿膜能力.结果: 诱导表达、纯化获得3种含PTD-eGFP的不同分子质量的融合蛋白.流式细胞术和激光共聚焦方法分析发现3种融合蛋白均具有高效穿膜能力.结论: PTD介导融合蛋白的穿膜能力与分子质量无直接关系.     

3种指标联合检测在类风湿关节炎诊断中的应用

目的探讨类风湿因子(RF)、抗角蛋白抗体(AKA)及抗环瓜氨酸多肽(CCP)抗体联合检测对类风湿关节炎(RA)的临床诊断价值。方法对77例RA和90例非RA患者用免疫比浊法检测RF,间接免疫荧光染色法检测AKA,酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗-CCP抗体,并对3种指标检测进行比较分析。结果 RF、AKA和抗-CCP不同方式联合检测对RA诊断的敏感性、特异性分别为RF+AKA为37.6%、97.8%,RF+抗-CCP为45.5%、98.8%,RF+AKA+抗-CCP为32.5%、100%。结论不同方式联合检测对RA诊断敏感性有所下降,但特异性却有不同程度的上升,3种指标联合检测特异性最高达100%。     

PTD-mFoxp3抑制小鼠皮肤移植排斥反应的研究

目的:研究带有蛋白穿膜结构域的小鼠Foxp3融合蛋白(mouse Foxp3 fusin protein combining with transduction domain, PTD-mFoxp3)对小鼠脾淋巴细胞活化增殖能力和皮肤移植排斥反应的影响.方法:取健康C57BL/6小鼠脾淋巴细胞,在体外经刀豆蛋白A(concanavaline A, ConA)活化,并分别给予环孢素A(cyclosporine,CsA)、不同浓度的PTD-mFoxp3,mFoxp3,PTD-GFP和培养基处理,检测脾淋巴细胞增殖指数.在此基础上进行从Balb/c小鼠到C57BL/6小鼠的皮肤移植试验,将40只C57BL/6受体小鼠随机分为4组,每组10只,分别以PTD-mFoxp3,CsA,0.9%氯化钠注射液(NS),PTD-GFP于手术当天开始连续腹腔注射8天为干预手段.术后第9天各组随机取2只移植小鼠,采集皮片标本,进行组织学检查.其余的8只用于观察移植皮瓣的存活时间.结果:PTD-mFoxp3和CsA相似,与其他处理方法相比明显抑制ConA活化的小鼠脾淋巴细胞增殖指数(P<0.05).PTD-mFoxp3组,CsA组移植物的存活时间较各对照组显著延长(P<0.05);病理检查显示PTD-mFoxp3组和CsA组移植物淋巴细胞浸润明显轻于各对照组.结论:PTD-mFoxp3能抑制ConA活化的T淋巴细胞的增殖,且具有抑制小鼠皮肤移植排斥反应的作用.     

两种方式制备的原核表达含TAT蛋白转导域融合蛋白穿膜能力比较

目的:联合应用多种技术评价不同方式制备的TAT转导结构域-eGFP-目的蛋白的穿膜效率及亚细胞定位情况,以期建立有效、稳定的高效穿膜蛋白制备方法。方法:诱导表达、纯化包涵体形式融合蛋白,分别进行直接脱盐和透析复性,并与细胞共育,然后通过流式细胞术、激光共聚焦显微镜及免疫印迹法评价融合蛋白穿膜能力。结果:通过透析复性制备的融合蛋白穿膜效率极低;而纯化后直接脱盐的融合蛋白经流式细胞术、激光共聚焦显微镜及免疫印迹等方法分析,表明均具有高效穿膜能力。结论:两种方式制备的融合蛋白均能穿膜,但透析复性制备的蛋白穿膜效率低,且不易定位于细胞核中,影响进一步对该目的蛋白在胞核中生物学行为的研究;而脱盐的变性蛋白具有高效的穿膜效率。     

2013年临床分离铜绿假单胞菌的耐药性分析

目的了解该院铜绿假单胞菌(PAE)的分布和耐药情况,为临床合理使用抗菌药物及控制感染提供依据。方法对送检样本中培养分离出的822株PAE的分布与耐药情况进行分析。采用稀释法进行药物敏感试验,结果按美国临床实验室标准化研究所标准判定,应用WHONET5.6对数据进行分析统计。结果 822株PAE主要分布在重症监护室、普外科、呼吸科、肿瘤科。标本来源以痰标本为主(82.1%)。秋季感染率最高,为30.0%。PAE对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低,为7.6%,对阿米卡星的耐药率为19.1%,其余抗菌药物的耐药率均超过20.0%。结论 PAE主要引起呼吸道感染,对现有多种抗菌药物耐药严重,提示临床医生必须对该菌所致感染予以高度重视。     

PTD-eGFP-△ E250 mFoxp3融合蛋白的表达与穿膜能力鉴定

目的:构建、表达并纯化含有蛋白转导结构域(protein transduction domain,PTD)、eGFP的小鼠Foxp3突变体(PTD-eGFP-△E250 mFoxp3)融合蛋白,为研究小鼠Foxp3的功能奠定基础.方法:利用重叠延伸PCR方法构建pET28a-PTD-eGFP-△E250 mFoxp3原核表达载体,并在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中表达此融合蛋白,经Ni2柱纯化,通过流式细胞仪和激光共聚焦显微镜观察其穿膜效率.结果:成功构建了pET28a-PTD-eGFP-△E250 mFoxp3原核表达载体,并表达和纯化了PTD-eGFP-△E250 mFoxp3融合蛋白,流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测结果显示融合蛋白能很好地穿过细胞膜进入细胞内,并定位于细胞质和细胞核.结论:成功制备了具有穿膜活性的PTD-eGFP-△E250 mFoxp3融合蛋白,为更好地研究小鼠Foxp3的功能与特性奠定了实验基础.