肠道病毒71型诱导人恶性胶质瘤细胞U251自噬的研究

目的 初步研究肠道病毒71型(EV71)诱导人恶性胶质瘤细胞U251的自噬现象及其对微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达的影响.方法 RPMI 1640培养U251细胞24h后随机分为实验组和对照组,实验组按感染复数(MOI)值为1加入EV71,EV71感染12h后采用单丹磺酰戊二胺(MDC)染色标志细胞自噬泡,荧光显微镜观察自噬泡的形成.EV71感染24 h后细胞免疫荧光检测LC3,荧光显微镜观察LC3在U251细胞内的分布.EV71感染2、4、8、12、24、48 h采用Western blot检测LC3-I和LC3-Ⅱ蛋白的表达,并对LC3-Ⅱ蛋白进行半定量分析.结果 自噬泡经过MDC染色后,荧光显微镜观察发现自噬泡呈点状结构.与对照组比较,实验组在EV71感染12 h,U251细胞内自噬泡明显增多;EV71感染24 h,U251细胞皱缩、变小、形态不规则,LC3蛋白表达明显增多,主要分布在细胞质和细胞核周围;EV71感染4h后,LC3-Ⅱ蛋白表达开始增加,明显高于对照组(P＜0.01).结论 EV71能有效诱导U251细胞自噬,发挥其溶瘤作用.     

脓毒症对大鼠海马区caspase-3表达的影响

目的 探讨脓毒症对大鼠海马区神经元的凋亡蛋白酶caspase-3表达的影响。 方法 80只30日龄健康雄性Wistar大鼠,随机分为盲肠结扎穿孔术（CLP） 组（n=50）和对照组（n=30）。CLP组采用CLP建立脓毒症模型,对照组行假手术不造成脓毒症模型。于手术后6、12、24 h,CLP组和对照组分别取10只大鼠,5只做神经行为学评分,另外5只处死取脑,采用蛋白免疫印迹法观察caspase-3的表达,术后24 h,两组各取3只大鼠,采用免疫荧光检测caspase-3的表达。 结果 对照组大鼠大脑海马区仅微量表达caspase-3,神经行为学评分较高。CLP组大鼠caspase-3的表达量于CLP后6 h就开始升高,24 h达高峰,均明显高于对照组（P＜0.05）,大鼠的神经行为学评分在CLP后6 h开始降低,并随着时间逐渐下降,均明显低于对照组（P＜0.05）。 结论 脓毒症脑损伤时大鼠的神经行为学评分降低,海马区神经元caspase-3表达上调,并随时间变化而波动。     

脓毒症相关性脑病大鼠海马区神经细胞自噬

目的：探讨脓毒症相关性脑病(sepsis-associated encephalopathy，SAE)大鼠海马区神经细胞自噬现象及微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达。方法：盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture，CLP)建立脓毒症大鼠模型。60只30日龄健康雄性Wistar大鼠被随机分为假手术组(10只)和CLP组(50只)。CLP后12 h监测大鼠脑电图(electroencephalogram，EEG)及体感诱发电位(somatosensory evoked potential，SEP)，并进行神经生物学评分。根据大鼠是否发生SAE将CLP组大鼠再分为SAE(+)组和SAE(–)组。HE染色观察大鼠海马区病理学改变；电子显微镜观察大鼠海马区神经细胞自噬的超微结构；Western印迹检测LC3-I和LC3-II蛋白的表达。结果：50只大鼠在CLP后12 h内死亡5只，存活45只大鼠中有16只出现神经行为学、EEG及SEP改变，诊断为SAE，其发病率为35.56%(16/45)。与假手术组和SAE(–)组比较，SAE(+)组大鼠在CLP后12 h时α波的频率明显减少，δ波增加，P1振幅下降，P1波和N1波潜伏期延长(P<0.05)。CLP后12 h时SAE(+)组大鼠海马区细胞明显水肿，锥体细胞明显减少，甚至溶解，细胞排列紊乱，而假手术组和SAE(–)组大鼠海马区细胞形态正常、层次清楚。透射电子显微镜观察表明：SAE(+)组大鼠海马区细胞结构紊乱，可见自噬泡、颗粒状基质和方形或长方形晶体，自噬泡内含有溶酶体等细胞器，假手术组和SAE(–)组大鼠海马区组织细胞无自噬泡形成。SAE(+)组大鼠在CLP后12 h，海马区神经细胞LC3-II/LC3-I值明显高于假手术组和SAE(–)组(P<0.05)。结论：SAE大鼠海马区神经细胞存在细胞自噬现象，LC3-II/LC3-I值明显升高。     

儿童肺炎支原体感染相关心包积液八例临床分析

目的探讨儿童肺炎支原体(MP)感染相关心包积液的临床特点,提高对该病的诊治水平。方法回顾2008年1月—2014年12月我院收治的儿童MP感染相关心包积液8例的临床资料,对临床特点、医技检查、治疗方法进行分析。结果 8例均急性发病,有发热,咳嗽、气促4例,胸痛、胸闷3例,食欲缺乏1例。就诊初期6例诊断不明确,曾考虑心功能不全3例,川崎病2例,幼年特发性关节炎1例。8例心包积液均由超声心动图检查证实,其中2例因大量心包积液引起压迫症状行心包穿刺抽液处理。均经查血清MP-Ig M抗体阳性明确诊断,全部予静脉-口服阿奇霉素序贯疗法治疗,6例痊愈出院,2例好转出院。出院后7例获随访,随访时间3~47个月,无一例复发。结论MP相关心包积液临床相对少见,易与其他导致心包积液的疾病相混淆而误诊,及时应用阿奇霉素疗效及预后均较好。